经典液相色谱法课件.ppt

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1、Chap.5经典液相色谱法1本章内容层次掌握：吸附色谱法、分配色谱法的基本原理以及应用，薄层色谱法的基本操作。熟悉：离子交换色谱法的基本原理以及应用。了解：尺寸排阻色谱法、聚酰胺色谱法的基本原理以及应用。2§1吸附色谱法1.基本原理1.1定义一种溶质基于吸附现象而获得分离的液－固色谱分析方法，按操作方式又可分为吸附柱色谱和薄层色谱。31.2吸附色谱法的依据吸附过程的两个规律：1）吸附过程是可逆的，存在着吸附解附的动态平衡,存在一个吸附平衡常数K=Cs/Cm2）吸附剂对不同物质的吸附行为有差异4吸附机理流动相通过固定相时，吸附剂表面的活性中心吸附流动相分子，当组分分子进入柱子时，会赶走流动相分子

2、而占据吸附剂的活性中心位，即组分被吸附；反之，溶剂分子也可把溶质分子赶走，即解吸。51.3吸附等温线指在一定温度下，某一组分在固定相和流动相之间达到平衡时，组分在固定相中的浓度Cs对组分在流动相中的浓度Cm作图得到的曲线，用函数描述为Cs=f（Cm），它描述了组分在两相中浓度之间的关系。6等温线的形状是重要的色谱特性之一。它反映了一定温度下，吸附剂对溶液中某一组分的吸附能力。对某一体系，组分的分布取决于吸附等温线，它有三种类型：线型、凸型和凹型。通常在低浓度时，每种等温线均呈线型，而在高浓度时，等温线则呈凸型或凹型。782.吸附剂2.1对吸附剂的要求1）颗粒要有一定的细度且粒度要均匀2）具有较

3、大的吸附表面积和一定的吸附能力3）与洗脱剂、样品不起化学反应，且不溶于洗脱剂中92.2常用吸附剂无机类：氧化铝、硅胶、硫酸钙、滑石粉、硅藻土等。有机类：活性炭、淀粉、蔗糖等。其中以硅胶和氧化铝较为常用。101）氧化铝优点：分离能力强、活性可控分类：酸性、中性、碱性以中性氧化铝使用较多,用来分离生物碱、挥发油、萜类、甾体、蒽醌以及在酸碱中不稳定的苷类、醌、内酯等化合物。活化温度：200～400℃112）硅胶优点：适用于各类样品的分离吸附能力：取决于骨架表面的硅醇基吸附机理：硅胶表面羟基作为质子给予体，通过氢键形式将溶质吸附在硅胶表面。由于硅胶具有弱酸性，所以选择性地保留胺类和其它碱性化合物。活化

4、温度：105～110℃122.3吸附剂的活性吸附剂的活性与含水量有一定的关系。吸附剂在使用前必须先经过活化处理。活化：在一定温度下，加热除去水分以增强活性的过程。13硅胶含水量(％)活性级别氧化铝含水量(％)0Ⅰ05Ⅱ315Ⅲ625Ⅳ1038Ⅴ15143.色谱条件的选择在吸附色谱中，除了正确选择吸附剂外，还可以通过流动相的选择来改变K值，或改变一对化合物的K值比，从而使它们的K值有最大的差别而达到分离。流动相在色谱分析中除了起着溶质通过色谱柱的作用，还影响着溶质的分配系数，所以在色谱分析中流动相的选择也很重要。极性较大的化合物可以比较强的从溶液中被吸附剂吸附，需要极性较大的洗脱剂才能洗脱下来。

5、15选择色谱分离条件时，必须从吸附剂、被分离物质、流动相三方面综合考虑。164.操作方法—薄层色谱4.1基本概念1）薄层色谱法将吸附剂（或载体）均匀地铺在玻璃板或塑料板、铝箔、聚酯薄膜上，形成薄层，把要分离的样品点加在薄层上，然后用合适的溶剂展开而达到分离、鉴定和定量的目的。172）比移值Rf在薄层色谱法中，常用比移值Rf来表示各组分在色谱中的保留行为。Rf(A)=b/cRf(B)=a/c18在给定条件下，Rf值为常数，其值在0～1之间。当Rf值为0时，表示化合物在薄层上不随溶剂的扩散而移动，仍在原点位置；Rf为1时，表示溶质不进入固定相，即表示溶质和溶剂同步移动。Rf值：一般要求0.2～0.

6、8最佳范围0.3～0.5。193）薄层色谱法的特点展开时间短，一般只需十几到几十分钟；分离能力强，斑点集中；灵敏度高，通常用量为几至几十微克；显色方便；仪器简单，操作方便。204.2操作技术薄层色谱法的操作步骤：选择—制板—点样—展开—斑点的检出—定性定量211）选择(1)选板—玻璃板表面光滑、平整清洁(2)固定相：吸附剂；粘合剂(3)流动相(4)显色剂222）制板薄层板的制备，就是将吸附剂均匀地涂铺在玻璃板上，使成薄层称之为制板。制板的步骤：(1)吸附剂的涂布(2)板的活化23(1)吸附剂的涂布常用薄板：加粘合剂的硬板和不加粘合剂的软板一般氧化铝采用软板多，而硅胶常采用硬板。硬板的涂铺方法：

7、倾注法、平铺法、涂铺器、喷雾法24(2)板的活化铺成的薄层，必需置于水平台面上晾干（也可以热风吹干），再置烘箱中活化即可。253）点样薄层分析时，一般使用微量注射器或毛细管点样。注意事项：（1）溶剂应易挥发或用流动相。（2）样品浓度合适，一般对照品浓度宜控制在几mg/ml。26（3）点样体积宜在20ml以下，点加量一般为几~几十微克，直径以小于3mm为宜。少量多次点加。（4）点样时，原点距离底边、