经典液相色谱法1

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1、第九章经典液相色谱法123经典液相柱色谱法液相色谱的固定相和流动相液相色谱法类型平面色谱法薄层扫描法简介本章要求掌握熟悉了解液相色谱技术的基本原理吸附等温线液相色谱技术的基本操作3液相色谱法类型LC以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法LiquidChromatography定义4-按分离效能分类经典液相现代液相-按操作形式-按分离机制液相色谱法类型5常压下靠重力或毛细作用输送流动相的色谱方法经典液相色谱法经典柱色谱法平面色谱法现代液相色谱法高压输液泵输送流动相高效液相色谱法（HPLC）液相色谱法类

2、型6液相色谱的固定相和流动相吸附色谱分配色谱离子交换色谱空间排阻色谱7吸附色谱固定相——吸附剂流动相——有机溶剂溶质基于吸附现象而获得分离的液-固色谱分析方法分离分析极性至弱极性的化合物液相色谱的固定相和流动相81.对吸附剂的要求1）有较大表面积和足够的吸附能力，对不同物质吸附能力不同2）与洗脱剂、溶剂、样品不起化学反应，且不溶于洗脱剂和溶剂3）粒度细而均匀吸附色谱的固定相液相色谱的固定相和流动相92.常用吸附剂-有机类：活性炭、淀粉、蔗糖等、聚酰胺、大孔树脂-无机类：氧化铝、硅胶、硫酸钙、滑石粉

3、、硅藻土等液相色谱的固定相和流动相吸附剂硅胶分离酸性和中性物质氧化铝碱性氧化铝分离碱性和中性物质酸性氧化铝分离酸性物质和对酸稳定的中性物质中性氧化铝分离在酸、碱中不稳定物质聚酰胺分离易形成氢键的物质大孔吸附树脂应用广泛10液相色谱的固定相和流动相111）硅胶（SiO2•xH2O)吸附能力：取决于骨架表面硅羟基-极性吸附剂吸附机理：氢键作用-硅羟基为质子给予体适用范围：适用于分离酸性和中性化合物活化温度：105～110℃物质的极性越大，硅胶吸附能力越强溶剂的极性越弱，硅胶吸附能力越强化学反应将有机分

4、子以共价键连接在硅羟基上，则成为化学键合固定相，按键合官能团极性分为极性键合相及非极性键合相液相色谱的固定相和流动相122）氧化铝优点：分离能力强、活性可控分类：酸性、中性、碱性，以中性氧化铝使用较多用途：酸性-分离酸性化合物，如有机酸中性-分离生物碱、挥发油、萜类、甾体、蒽醌以及在酸碱中不稳定的苷类、醌、内酯碱性-分离碱性和中性化合物，如生物碱类活化温度：200～400℃活化：一定温度下加热除去水分以增强活性的过程失活：一定温度下加入一定量水分使吸附剂活性降低的过程液相色谱的固定相和流动相含水量

5、（%）活度级别吸附能力硅胶氧化铝051525380361015ⅠⅡⅢⅣⅤ含水量越低，活度级别越小，吸附能力越强。含水量越高，活度级别越大，吸附能力越弱。吸附剂的吸附能力常称为活度或活性液相色谱的固定相和流动相143）聚酰胺常用种类：聚己内酰胺作用机理：氢键作用（1）酰胺基中的羰基与酚类、黄酮类、酚类中的羟基或羧基形成氢键（2）酰胺基中的氨基与醌类、硝基类中的醌基、硝基形成氢键液相色谱的固定相和流动相154）大孔吸附树脂定义：不含交换基团，有大孔网状结构的高分子吸附剂种类：非极性和中等极性两类范围：

6、水溶性化合物的分离纯化液相色谱的固定相和流动相16组分在色谱柱中的移动速度和分离效果取决于：1.吸附剂对样品各组分的吸附能力-吸附活性2.洗脱剂对各组分的解吸能力-极性大小3.待分离各组分本身极性差异-结构性质吸附色谱的条件选择液相色谱的固定相和流动相171.化合物的极性及其判断规律常见化合物按其极性由小到大顺序为：烷烃＜烯烃＜醚硝基化合物＜二甲胺＜酯类＜酮类＜醛类＜硫醇＜胺类＜酰胺类＜醇类＜酚类＜羧酸类依据规律：（1）基本母核相同—基团极性越强，整个分子极性越强（2）分子中双键越多，吸附能力越强

7、共轭双键越多，吸附能力也越强（3）基团的空间排列—能形成分子内氢键吸附能力较弱液相色谱的固定相和流动相18分离极性小的物质，选用吸附能力强的吸附剂分离极性大的物质，选用吸附能力弱的吸附剂2.吸附剂的选择液相色谱的固定相和流动相19常用溶剂的极性顺序为：石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜三氯乙烯＜苯＜甲苯＜二氯甲烷＜乙醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜丙酮＜正丁醇＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸3.流动相的选择分离极性大的物质应选用极性大的溶剂分离极性小的物质应选用极性弱的溶剂液相色谱的固定相和流动相20选择色谱分离条件时，必须从

8、吸附剂、被分离物质、流动相三方面综合考虑。吸附色谱三要素之关系液相色谱的固定相和流动相21分配色谱正相分配色谱：固定相的极性大于流动相反相分配色谱：固定相的极性小于流动相比较项目正相色谱法（NP）反相色谱法（RP）固定相强极性非极性流动相弱-中等极性中等-强极性出峰顺序极性弱的组分先出峰极性强的组分先出峰保留值与流动相极性的关系随流动相极性增大保留值减小随流动相极性增大保留值增大适于分离的物质极性物质弱极性物质液相色谱的固定相和流动相22分配色谱的固定相固定相：载体+固定液某种溶剂