药物定量分析与分析方法验证课件.ppt

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1、第五章体内药物分析体内药物分析是一门研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学体内药物分析又被称为生物医药分析BiomedicalAnalysis生物药物分析BiopharmaceuticalAnalysis——药物分析的重要分支学科——研究生物机体中外源性药物及其代谢物和内源性活性物质的质与量的变化规律——药物的体内研究和治疗药物监测——综合性较强的应用学科:分析方法学——为将来的相关课程（临床药学、临床药理学、生物药剂学）学习和实验研究奠定重要的基础药物进入体内后——经过吸收、分布、代谢和排泄等动力学过程——化学结构和存

2、在状态都可能发生变化——在不同个体中存在差异（个体差异）——进而直接影响到药物在不同个体中的治疗效应和毒副作用——需对生物体内药物及其代谢物进行研究分析药物在人（或动物）体内的存在形式游离型:原形药物或代谢物药物或其代谢物与葡萄糖醛酸等结合:缀合物药物与蛋白质结合:结合物体内药物分析的任务检测人（或动物）的体液或组织（生物样本）中的药物或特定代谢物的浓度生物样本的特点1.药物浓度：低，要求方法灵敏度高2.干扰物质：多，要求方法专属性好3.样品量少、不能重复取样.生物样品多数在特定条件下采集，无法再次取样，且浓度低、变化幅度大.在样品测定之前，进行适当的

3、样品制备，进行分离、纯化、浓集、必要时还需对待测组分进行化学衍生化，然后进行测定评价药物的安全性（临床前研究）：动物评价药物的有效性（临床研究）：人体（健康志愿者或患者）用药的安全、有效与合理：人体（患者TDM:治疗药物血浓度监测）分析方法有:①色谱法:HPLC,HPCE,GC②光谱法:比色法、紫外-可见分光光度法、荧光分光光度法、原子吸收分光光度法③免疫分析法:放射免疫法RIA、酶免疫法EIA、化学发光酶免疫、荧光免疫分析④联用技术:GC-MS、LC-MS、LC-NMR发展概况20世纪60年代:临床药理学与生物药剂学建立70年代初:体内药物分析在国外

4、开始建立70年代末:血药浓度监测广泛用于临床80年代:体内药物分析学科雏形基本形成国内发展概况：在70年代末受到关注1979年有相关论文发表1981年在“中国药学会药物分析第一次学术会议”大会上作学术报告，引起了广泛的关注和兴趣80年代中期，许多高等医药院校为本科生、硕士研究生开设了体内药物分析必修和选修课程.学科主要研究问题游离型血药浓度测定方法研究血中游离型药物浓度(F)与总浓度(T)的比率(F/T)及唾液与血液游离浓度的比率(S/P)以及它们之间的相关性的研究代谢物的监测与研究对映体的监测与研究体内微量元素的测定与研究方便、快捷的样品制备方法与样

5、品直接进样分析的研究分析新方法、新技术的联用研究体内药物分析方法的质量控制研究第一节常用体内样品的制备与贮藏一.样品种类，采集与制备1.血样：血药浓度一般指血浆（血清中）药物浓度，它可正确反映药物在作用点的浓度。药物在血中分布均匀后取样：a.动物：动脉或心脏，b.人静脉或毛细管采血.血液：a.加抗凝剂混合（EDTA,肝素etc),离心(3000r/min，5min)取上清液为血浆。b.室温放0.5~1h，3000r/min离心5~10min,取上清液为血清。C.全血.要点：取样后及时分离出血浆（清），随后进行分析，若不能马上测定，应密塞后置冰箱保存（时

6、间短：4℃，长：-20℃)应用:药物动力学;生物利用度;临床治疗药物监测(TDM)2·尿液优点：易收集、量大，主要用于药物剂量回收，尿清除率，生物利用度研究，以及药物代谢研究，一般采集24h尿液，最好立即测定，否则要加防腐剂（PhCH3,CHCl3etc）置冰箱保存。缺点：尿液中药浓度与血药浓度相关性差，肾功能不全者不适于取样3·唾液：优点：样品易得，采集无痛，无危险。缺点：一般唾液中药浓与血药浓度不吻合，易变4.组织：用于药物体内动力学研究步骤：取样，匀浆，去蛋白5.头发：主要用于体内微量元素的测定。枕部取样，洗净，消化或者高温灰化后测定二体内样品的

7、贮藏与处理1.冷藏或冷冻2.去活性：快速冷冻；微波照射；加入酶活性阻断剂或者抗氧剂；高温煮沸。第二节.体内样品分析的前处理依据:1）样品种类（血，尿）2）被测药物结构及性质3）测定方法：专属性，LOD应用：1.药物含量高，处理简单。2.样品干扰小,(如尿）,前处理简单3.测定方法专属性好(HPLC),前处理简单。一.目的1.使待测药物游离2.满足测定方法的要求:重点考虑分析方法的灵敏度和专属性.3.改善分析环境:如HPLC.二.样品前处理方法·1.去除蛋白质目的：①使结合型药物释放出来②减少乳化③保护色谱柱方法：1）加入与水相混溶的有机溶剂（EtO

8、H,Me2CO,CH3CN,etc）,混匀后离心，取上清液分析（破坏氢键使蛋白质凝聚）.2）加