设计性实验体外抗凝血实验鉴别未知药物：肝素与枸橼酸钠.ppt

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1、体外抗凝血实验鉴别未知药物：肝素与枸橼酸钠设计实验：凝血酶原凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白ⅫⅫaⅪⅪaⅨⅨaⅩⅩTFⅦCa2+PF3Ca2+ⅧaⅩaPF3Ca2+Ⅴa内源性凝血途径外源性凝血途径肝素主要抗凝机制：与ATⅢ结合，增强ATⅢ与凝血酶的亲和力。heparinthrombin*ATIIIATIIIheparinthrombin*thrombin*heparinATIIIATIIIthrombin*heparin*canalsobeFactorXa带有大量阴电荷有带阳电荷的赖氨酸残基发生变构重新作用于其他ATⅢ，连续应用可使后者耗竭枸橼酸钠抗凝机制:枸橼酸钠能络合血浆中的钙离子,

2、并结合成难解离的可溶性枸橼酸钙复合物,使血液脱钙,从而阻滞了钙参与凝血过程而发挥抗凝血作用。肝素与枸橼酸钠的作用特点、作用机理肝素枸橼酸钠体内抗凝有无体外抗凝有有作用机理激活AT-III络合Ca2+拮抗剂硫酸鱼精蛋白氯化钙两药的抗凝机制不同，特异性拮抗剂不同，如何设计实验并鉴别两药？各小组分别进行实验设计（30分钟）实验设计要点首先证明两种药物的体外抗凝血作用如何分组？阴性对照：蒸馏水/生理盐水？受试动物？取血方法？判断血凝的方法？2.根据肝素与枸橼酸钠抗凝血机理的不同点，选用什么办法进行二者的鉴别？实验分组阴性对照：生理盐水未知药物1未知药物1未知药物2未知药物2受试动物家兔取

3、血方法心脏取血家兔心脏取血方法：一人稳妥固定家兔，腹面向上，采血者一手持浸润过的采血用注射器，另一手指于家兔前胸部查找心跳最强处（一般位于胸骨左缘4-5肋间），于肋间隙进针，垂直刺入，待有突破感即刺入胸腔，垂直向下刺入心脏。如刺入心脏，则注射器颤动均匀稳定，与心跳频率一致，此时回吸血液，有血液进入则证明进入心脏。向每支试管中加入兔血后充分混匀，计时，放入37℃恒温水浴中。每隔30秒将试管轻轻倒转，观察血凝。注意事项：加入每支试管中的血量应一致判断血凝方法——试管法0.1ml生理盐水未知药物1未知药物2取血0.9ml血混匀，37℃，计时CaCl2鱼精蛋白若2、3、4、5管未凝鉴别两

4、种未知药物：1.根据肝素与枸橼酸钠抗凝血机制的不同，向未凝血的两未知药物试管中分别加入3%氯化钙溶液，观察是否凝血。出现凝血者证明为枸橼酸钠。2.向未凝血试管中加入鱼精蛋白，出现凝血即证明为肝素。