FastQuant cDNA第一链合成说明书.pdf

《FastQuant cDNA第一链合成说明书.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、产品简介操作步骤FastQuantcDNA第一链合成试剂盒是一种高效、快速并可以去除基因组DNA污染的使用快速反转录试剂盒合成第一链cDNA反转录系统。本试剂盒含有高效去除基因组DNA的gDNase；通过42℃，3min即可去除50ng-2μg总RNA可建立20μl反应体系。gDNA，有效避免TotalRNA中基因组DNA的干扰。本试剂盒所含的高效反转录酶FastQuant1.将模板RNA在冰上解冻；5×gDNABuffer、FQ-RTPrimerMix、10×FastRTBuffer、RTEnzyme，42℃，15min即可完成cDN

2、A第一链的合成。另外，本品还具有与RNA模板高亲合性的特点，其能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。RNase-FreeddH2O在室温（15-25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。产品特点以下操作步骤请在冰上进行。为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先配制成Mix，然后再分装到每个反应管中。反转录效率高：反转录效率可达90%以上；2.按照表1的基因组DNA的去除体系配制混合液，彻底混匀。简短离心，并置于42℃，孵育操作简单快速：反应体系配制简单，21min完成c

3、DNA第一链的合成；3min。然后置于冰上放置。通读复杂模板：能够作用于GC含量高，二级结构复杂的RNA模板；表1gDNA去除反应体系后续兼容性好：后续配合荧光定量检测产品，灵敏度高、稳定性好。组成成分使用量5×gDNABuffer2μl适用范围TotalRNA-RT-PCR；荧光定量PCRRNase-FreeddH2O补足到10μl注意事项3.按照表2的反转录反应体系配制混合液。1.下列操作步骤适用于模板量为50ng-2μg的总RNA，如果总RNA量大于2μg，请按比例扩大反应体系。表2反转录反应体系2.在冰上进行操作，防止RNA发生

4、降解。组成成分使用量3.不需分开变性和退火两个步骤。但是对于二级结构很复杂的RNA模板，推荐使用变性步10×FastRTBuffer2μl骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5min后迅速转移到冰上，进行下一步操RTEnzymeMix1μl作。FQ-RTPrimerMix2μl4.根据实验需求不同，也可以选用Oligo-dTPrimer或GeneSpecificPrimer，引物使用量如RNase-FreeddH2O补足到10μl下：Oligo-dTPrimer50pmol/20μl反应体系，GeneSpecificPrime

5、r5pmol/20μl反应体系。4.将反转录反应中的Mix，加到gDNA去除步骤的反应液中，充分混匀。5.42℃，孵育15min。5.使用GeneSpecificPrimer时，反转录反应可设置为42℃，15min。当PCR反应有非特异6.95℃，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后续实验，或低温保存。性扩增时，将反转录温度升到50℃会有改善。6.反转录体系可以根据需要相应扩大。Order:010-59822688Toll-free:800-990-6057/400-810-6057TIANGENBIOTECH(BEIJIN

6、G)CO.,LTD版本号:KR151125对RNA模板的要求逆转录酶以RNA为模板合成第一链cDNA，模板RNA的质量和数量直接影响逆转录的结FastQuantRTKit(withgDNase)果。FastQuantcDNA第一链合成试剂盒1.模板的完整性：模板RNA的完整性对逆转录非常重要，若RNA模板中含有RNase酶将降（去基因组）解模板RNA，最后导致cDNA产物的量少甚至无cDNA产物。目录号：KR1062.模板的纯度：若RNA模板中含有蛋白、盐离子、EDTA、乙醇、酚等杂质，将影响逆转录产品内容酶的活性，最后影响逆转录结果。

7、KR106-01KR106-023.模板的加量：上述操作步骤适用于模板RNA量为50ng-2μg，如果模板RNA的量大于2μg，产品组成(25rxn)(100rxn)请按比例扩大反应体系。5×gDNABuffer50μl200μlFQ-RTPrimerMix50μl200μlRTEnzymeMix25μl100μl注意10×FastRTBuffer50μl200μl1.若后续实验为实时荧光定量PCR，逆转录产物的加量应不超过PCR体系终体积的1/10，RNase-FreeddH2O1ml2×1ml例如50μl的PCR反应体系，逆转录产物

8、的加量应不超过5μl。2.将逆转录产物置于冰上，再进行后续PCR反应；如果需要长时间保存，请置于-20℃。储存条件该试剂盒使用干冰运输，-20℃可保存一年。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及