荧光分光光度计课件概要.ppt

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1、第五章荧光分析法1荧光分光光度计2荧光分光光度法荧光分光光度法当用紫外光照射某种物质时，这些物质会发出各种颜色和不同强度的光，当紫外光停止照射时，这种光线也随之消失。我们这种光线称为荧光。依据物质所发荧光的颜色和强度建立起来的定性和定量的分析方法称为荧光分光光度法。1、荧光分光光度法简介3黄连牛蒡子元胡浙贝母4可用荧光鉴别的中药黄连：根茎折断面在紫外光下显金黄色荧光浙贝母：粉末置于紫外光下呈亮淡绿色荧光元胡：切面或粉末置于紫外光下，亮黄色荧光牛蒡子：粉末，绿色荧光麻黄：纵剖面，边缘显亮白色荧光，

2、中心显棕色荧光甘草：粉末显黄色荧光黄柏：断面呈亮黄色荧光5荧光分光光度法4、荧光分析中常用参数：FΛ（nm）1、荧光物质都具有荧光激发光谱和发射光谱2、荧光的激发光谱和发射光谱是用荧光分析法进行定量和定性分析时的基本参数和依据激发光谱发射光谱6荧光分光光度法4、荧光分析中常用参数Fλ激发激发光谱：当改变激发光波长，测量荧光物质在每一波长(λ)激发光照射下发射的荧光强度(F)，以荧光强度(F)为纵坐标，激发光波长(λ)为横坐标作图，得到荧光物质的激发光谱。λem(max)最大激发波长常作为入射波长

3、7荧光分光光度法4、荧光分析中常用参数Fλ发射发射光谱（荧光光谱）：当用最大激发波长λem(max)照射荧光物质，测量荧光物质在照射下所发出的对应每一波长(λ)的荧光强度(F)，以F为纵坐标，λ为横坐标作图，得到荧光物质的发射光谱。λex(max)最大发射波长常作为测定波长8荧光分光光度法4、荧光分析中常用参数荧光分析法优点：1、灵敏度高检测限可达10-10-10-12g/mL2、定性更可靠缺点：1、干扰因素较多对实验条件要求严格，测量精密度差2、应用范围有限但具有特殊重要性能产生荧光的物质较少

4、，但中药生化物质、致癌物质、天然产物都有荧光现象。9荧光分光光度法3、荧光分光光度法的优缺点3.1、优点：（1）灵敏度高检测限可达10-10-10-12g/mL，比紫外可见光度计高出3-4个数量级。（2）定性更可靠荧光分析可提供激发光谱、发射光谱、荧光强度、总荧光量、峰位、谱带宽度、量子产率、荧光寿命等参数。干扰因素较多10荧光分光光度法3、荧光分光光度法的特点缺点：（3）对实验条件要求严格，测量精密度差（4）应用范围有限但具有特殊重要性能产生荧光的物质较少，但中药生化物质、致癌物质、天然产物都

5、有荧光现象。11定量依据当其他条件固定、荧光物质溶液浓度很稀时，荧光强度(F)和荧光物质溶液浓度(c)成正比，即：F=Ac，A为常数1、荧光分析法应在低浓度溶液中进行。2、荧光强度是表示发射相对强度的物理量，它是最常用的荧光参数之一。单位为任意单位，表示的是相对强度。12荧光分光光度法荧光分析仪器的结构和主要部件：2、荧光分光光度计的基本结构光源激发单色器样品室发射单色器检测器显示装置13荧光分光光度法2、荧光分光光度计的基本结构2.1、光源：对光源的要求是必须有足够的强度且具有连续光谱，其波长

6、范围能满足仪器的需要。即：具有光强度大、适用波长范围宽两个特点。先多用氙灯。14荧光分光光度法2、荧光分光光度法简介2.2、单色器：单色器也是荧光分光度计的核心部件。它有两个单色器：激发单色器：作用是从光源发射的复合光中获得单一波长的激发光。发射单色器：作用是消除其他荧光光线和待测溶液中存在的干扰谱线，获得所需波长。15荧光分光光度法2、荧光分光光度计的基本结构2.3、样品池多为用石英制成的厚度为1cm的长方形体，四面均为磨光面。所以使用时不能用手拿四面，应拿对角侧棱。--区别于紫外-可见分光光

7、度计样品池16荧光分光光度法2、荧光分光光度计的基本结构2.4、检测器荧光分光光度计常用的是光电倍增管2.5、数据记录和处理系统：利用计算机将测量到的荧光强度显示出来。17荧光分析法在药物分析中的应用麦角碱、麻黄碱、吗啡、喹啉等生物碱，青霉素、四环素等抗生素，维生素A、B族维生素、维生素E、维生素C等药物君可用荧光分析法测定。18荧光分析法在药物分析中的应用定性鉴别：利用药物在特定激发光照射下，产生特殊颜色的荧光对药物进行鉴定。e.g.中药材的快速鉴别处理后的三七粉滴加硼酸饱和的丙酮溶液与10%

8、枸椽酸溶液各1滴，干后，置紫外光灯下观察，有强烈的亮黄绿色荧光，其伪品菊三七显土白色荧光。定量分析：标准曲线法19中药的一般理化鉴别1、化学定性分析2、中药的膨胀度3、微量升华4、荧光分析5、显微化学分析20理化鉴别-荧光分析中药中所含的某些化学成分，在紫外光或常光下能产生一定颜色的荧光的性质进行鉴别。样品置于紫外光等下约10cm处观察，一般紫外灯波长设为365nm。取中药断面、饮片、粉末或浸出物在紫外光等下观察。某些本身不显荧光的中药，用酸、碱或其他化学方法处理后，可使其产生可见荧光，如：芦荟