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小鼠肝组织RNA提取及RT-PCR实验.ppt

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时间：2020-08-12

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1、小鼠肝组织RNA提取及 RT-PCR一、试剂及材料1、小鼠肝脏2、DEPC处理过的EP管、PCR管3、Trizol、氯仿、异丙醇、DEPC水二、实验原理TRIZOL：异硫氰酸胍+苯酚裂解细胞，RNA与蛋白质分离，将RNA释放到溶液中。促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层。RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。三、实验步骤RNA提取1、新鲜肝组织置EP管中，加200lTrizol充分研磨后，补加800lTrizol，枪头吹匀。2、加入20

2、0l氯仿，剧烈震荡15秒，4℃12000g离心15min。3、将上层水相移至洁净EP管中，加入500l异丙醇颠倒混匀。4、4℃12000g离心10min。5、弃水相，EP管开盖干燥，溶于50lDEPC水中。RT-PCR：RNA的反转录+cDNA的PCRRT-PCR操作步骤5xPrimeScriptBuffer2l①PrimeScriptRTEnzymeMix0.5l②OligodTprimer(50m)0.5l③Random6mers(`100m)1l④提取的RNA0.5lRNaseFree水5.5

3、l⑤37℃15min85℃5sec10lPCR10xPCRBuffer5ldNTP4l模板DNA2l引物12l引物22lTaq酶0.5lH2O34.5l50l94℃5min94℃°30sec54℃°30sec72℃30sec72℃7min25cycle1%琼脂糖凝胶电泳观察结果

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