DB12∕T 946-2020 饲料中氨基酸的测定 离子交换色谱法.pdf

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1、ICS65.120B25DB12天津市地方标准DB12/T946—2020饲料中氨基酸的测定离子交换色谱法Determinationofaminoacidsinfeeds-Ionexchangechromatography2020-06-29发布2020-08-01实施天津市市场监督管理委员会发布DB12/T946—2020前言本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：天津市畜牧兽医研究所。本标准主要起草人：杨鸿雁、梁世岳、李玉鹏、陈龙宾、范寰、乔家运。IDB12/T946—2020饲料中氨基酸的测定离子交换色谱

2、法1范围本标准规定了饲料中氨基酸的离子交换色谱法测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品的采集与制备、测定步骤和结果计算。本标准适用于饲料原料、配合饲料及浓缩饲料中氨基酸含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理3.1常规酸水解法饲料中的蛋白质在盐酸的作用下，水解成单

3、一氨基酸，经离子交换色谱法分离并以茚三酮柱后衍生测定。水解中，色氨酸全部被破坏，不能测量，胱氨酸和蛋氨酸部分氧化，不能测准。3.2氧化酸解法将饲料蛋白中的含硫氨基酸（胱氨酸和蛋氨酸）用过甲酸氧化，使之转变为对酸稳定的氧化物，再通过酸水解法释放出来，经离子交换色谱法分离并以茚三酮柱后衍生测定。3.3碱水解法饲料中的蛋白质在碱的作用下，水解出色氨酸，经离子交换色谱法分离并以茚三酮柱后衍生测定。4试剂和材料4.1本标准所用试剂和水，在没有注明其它要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水；所述溶液如未指明溶剂均系水溶液。试验中所需溶液、制剂及制品，在没有注明其它要求时均

4、按GB/T603的规定制备。4.2盐酸：优级纯。4.3盐酸溶液（6mol/L）：量取盐酸500mL，用水稀释至1000mL，混匀。4.4茚三酮溶液：按仪器说明书配制或购买。4.5pH系列缓冲液、再生液：按仪器说明书配制或购买。1DB12/T946—20204.6甲酸：浓度为88%。4.7过甲酸溶液：将30%过氧化氢与甲酸按体积比1:9混合，室温放置1h，置冰水浴中冷却30min,临用前配制。4.8盐酸溶液（7.2mol/L）：取盐酸600mL，用水稀释至1000mL，混匀。4.9氢氧化锂溶液（4mol/L）：称取一水合氢氧化锂167.8g，用水溶解并稀释至1000mL，混匀。

5、4.10柠檬酸钠缓冲液：称取柠檬酸三钠14.71g、氯化钠2.92g和柠檬酸10.50g，溶于500mL水中，加入硫二甘醇5mL和辛酸0.1mL，定容至1000mL。4.11氢溴酸（48%）：分析纯。4.12高纯氮气：纯度为99.999%。4.13氨基酸混合标准储备液：含L-天门冬氨酸、L-苏氨酸等17种常规水解分析用氨基酸，各组分浓度均为2.50µmol/mL。4.14磺基丙氨酸-蛋氨酸砜标准储备液：准确称取磺基丙氨酸（纯度≥99.0%）105.7mg和蛋氨酸砜（纯度≥99.0%）113.3mg，用水溶解并定容至250mL,浓度均为2.50µmol/mL，2℃～8℃保存，有

6、效期1年。4.15色氨酸标准储备液：准确称取色氨酸标准品（色谱纯）127.5mg，加少许水和数滴0.1mol/L氢氧化钠溶液使之溶解，用水定容至250ml，浓度为2.50µmol/mL，2℃～8℃保存，有效期1年。4.16混合氨基酸标准工作液：准确吸取氨基酸混合标准储备液、磺基丙氨酸-蛋氨酸砜标准储备液和色氨酸标准储备液各1mL，置于25mL容量瓶，用柠檬酸钠缓冲液定容，混匀，各氨基酸组分浓度均为100nmol/mL，2℃～8℃保存，有效期3个月。5仪器设备5.1样品粉碎机。5.2样品筛孔径0.18mm。5.3分析天平感量0.1mg。5.4恒温鼓风干燥箱。5.5氮吹仪。5.6

7、旋涡混合仪。5.7氨基酸分析仪具有离子交换柱、茚三酮柱后衍生装置及570nm和440nm光度检测器。6样品的采集与制备按GB/T14699.1采集样品；按GB/T20195制备样品，要求样品粉碎至过0.18mm孔径（80目）样品筛，充分混合均匀后装入密封袋中备用。7测定步骤7.1样品的水解7.1.1常规酸水解法称取试样30mg～70mg（约含蛋白质5mg～20mg，精确至0.1mg）于25mL水解管中，准确加入10mL盐酸溶液，充氮气约1min后拧紧瓶盖，将水解管放入110℃±1℃恒温干燥箱，水解22h