GBT 15399-1994 饲料中含硫氨基酸测定方法—离子交换色谱法

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1、中华人民共和国国家标准饲料中含硫氨基酸测定方法GB/'f15399一94-一离子交换色谱法Determinationofsulfuraminoacidsinfeedstuffs-ionexchangechromatography1主题内容与适用范围本标准规定了饲料中含硫氨基酸的测定方法。本标准适用于单一饲料、配合(混合)饲料及浓缩饲料。2引用标准GB/T6432饲料粗蛋白质测定方法GB/T6439饲料水溶氯化物测定方法3原理饲料中的含硫氨基酸(胧氨酸、半胧氨酸和蛋氨酸)用过甲酸氧化并经盐酸水解生成磺基丙氨酸和蛋氨酸矾，此二产物可用离子交换色

2、谱法分离测定。4试剂除特别注明者外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水，电导率小于1MS4.1过甲酸溶液4.1.1常规过甲酸溶液:将30%过氧化氢(GB6684)与88%甲酸(HG3-1296)按1:9(V/V)混合，于室温下放置1h，置冰水浴中冷却30min，临用前配制。4.1.2浓缩料用过甲酸溶液:将常规过甲酸溶液中按3mg/mL加入硝酸银(GB670)即可。此溶液适用于氯化钠含量小于3%的浓缩料。当浓缩料中氯化钠含量大于3%时，氧化剂中硝酸银浓度可用下式计算:C,)1.454XmX蛛··························.

3、⋯⋯(1)式中:C,—过甲酸中硝酸银的浓度，mg/mL;C}—样品中氯化钠含量，mg/mL;。—样品质量,mg,4.2氧化终止剂4.2.148氢澳酸(GB621)4.2.2偏重亚硫酸钠溶液:33.6g偏重亚硫酸钠(HG3-909)加水定容至100ML4.3酸解剂国家技术监督局1994一12一30批准1995一07一01实施GB/T15399一944.3.16.0mot/L盐酸溶液:将优级纯盐酸(GB622)与水按1:1(V/V)混合。4.3.26.8mol/L盐酸溶液:将优级纯盐酸(GB622)1133mL加水稀释重2000ml。4.47.

4、5mol/L氢氧化钠溶液:取优级纯氢氧化钠(GB629)30g，加水溶解并定容至100ml-4.5稀释上机用柠檬酸钠缓冲液，pH2.2,0.2mol/LNa:称取柠檬酸三钠(HG3-1298)19.6g，用水溶解后加入优级纯盐酸16.5mL，硫二甘醇5.0mL,苯酚(HG3-1165)1g，最后加水定容至1000ml,，用G4垂熔玻璃砂芯漏斗过滤。4.6不同pH及离子强度的洗脱用柠檬酸钠缓冲液:按仪器说明书配制。4.了荀三酮溶液:取苟三酮适量，按仪器说明书配制。4.8磺基丙氨酸一蛋氨酸矾标准贮备液,2.50pmol/mL:准确称取磺基丙氨酸

5、105.7mg和蛋氨酸矾113.3mg，加水溶解并定容至250mL.4.9氨基酸混合标准贮备液:含有L一天门冬氨酸、L一苏氨酸等17种常规蛋白质水解分析用L-A基酸，各组份浓度为2.50pmol/ml-4.10混合氨基酸标准工作液:吸取磺基丙氨酸一蛋氨酸矾标准贮备液(4.7)和氨基酸混合标准贮备液(4.8)各1.00mL,置于50mL容量瓶中，加稀释上机用柠檬酸钠缓冲液(4.4)定容，混匀。有关各组份浓度为50nmol/mL.5仪器、设备5.1实验室用样品粉碎机;5.2样品筛:孔径0.45mm(40目);5.3分析夭平:感量0.0001g;

6、5.4喷灯;5.5旋转蒸发器或浓缩器:可在室温至65℃间调温，控温精度士1'C,真空度可低至3.3X10'Pa(25mmHg柱)5.6恒温箱或水解炉;5.7氨基酸自动分析仪:要求蛋氨酸A的分辨率大于90X006样品取具代表性的饲料样品，用四分法缩减分取25g左右，粉碎并过0.45mm孔径(40目)筛，充分混匀后装入磨口瓶中备用。7分析步驻7.1氧化和水解:称取含蛋白质7.5-25mg的试样双份(精确至0.0001g，样品量不超过75mg),置于旋转蒸发器20mL浓缩瓶或浓缩管中，于冰水浴中冷却30min后加入已经冷却的过甲酸溶液(4.2)2

7、mL，加液时需将样品全部润湿，但不要摇动，盖好瓶塞，连同冰浴一道置于00C冰箱中，反应16h以下步骤依使用不同的氧化终止剂而不同:若以氢澳酸为终止剂，于各管中加入氢澳酸(4.1)0.3mL，振摇，放回冰浴，静置30min，然后移到旋转蒸发器或浓缩器(5.5)上，在60'C、低于3.3X10'Pa(25mmHg柱)下浓缩至干。用盐酸溶液(4.3.1)约15mL将残渣定量转移到20mL安瓶中，封口，置恒温箱中、11。士1C下水解22^24h也可用6.0mol/I盐酸溶液约25ml将残渣转移到50mL消煮管中，于水解炉中、11。士3℃下回流水解2

8、2-24h.取出安瓶或水解管，冷却，用水将内容物定量地转移至50mL容量瓶中，定容。充分混匀，过滤，取1-2mL滤液，置旋转蒸发器或浓缩器中，在低于50℃的条件下，减压蒸发至千。