人教生物选修一专题5课题课件.ppt

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1、生　物必修①·人教版新课标导学专题五DNA和蛋白质技术课题3　血红蛋白的提取与分离学习目标课程标准1．掌握提取生物大分子的基本过程和方法。(重点)2．理解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。(重、难点)3．尝试对血液中的血红蛋白进行提取和分离。尝试蛋白质的提取与分离1自主学习2新知解读3指点迷津4核心素养5问题释疑6知识构建7训练巩固8课时作业自主学习分配色谱法相对分子质量大小相对分子质量较小较大较慢较大凝胶外部短快相对分子质量外界酸和碱相对稳定1～2水使用比例带电粒子迁移pH多肽核酸正电负电电场相反带电性质大小形状迁移速度各种分子琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胺电泳SD

2、S－聚丙烯酰胺凝胶电泳样品处理粗分离纯化纯度鉴定去除杂蛋白低速短时间生理盐水黄色(2)血红蛋白的释放：在__________和________的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液：把混合液离心后，将试管中的液体用滤纸过滤，除去________________，于分液漏斗中静置片刻后，分离出下层的________________。(4)透析：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。蒸馏水甲苯脂溶性沉淀层红色透明液体2．凝胶色谱操作(1)凝胶色谱柱的制作：准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱。(2)凝胶色谱柱的装填。(3)样品的加入和洗脱。其基本过程

3、是调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。至此，血红蛋白即可得到粗分离。3．纯度鉴定：在鉴定的方法中，使用最多的是_________________________________。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳洗涤次数离心速度离心时间血浆蛋白过高过长白细胞洗脱液沸水浴加热气泡洗脱次序红色区带均匀一致地移动？思考红细胞破碎后混合液中含有什么成分？提示：红细胞破碎混合液中不仅含有血红蛋白，而且还含有细胞破碎物、脂质、甲苯等。1．相对分子质量较大的蛋白质，无法进入凝胶内部的通道，移动速度较慢。(　　)分析：相对分子质量较大的蛋白质，无法进入凝胶内部的通道，移动速

4、度较快。2．在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。(　　)判断题×√3．电泳法分离样品只取决于蛋白质的相对分子质量大小。(　　)分析：电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。4．红细胞的洗涤是为了彻底除去杂蛋白，应快速高速离心。(　　)分析：红细胞的洗涤目的是除去杂蛋白，离心的目的是使红细胞沉淀，而杂蛋白等均在上清液中，应低速缓慢离心，如果高速离心则会导致白细胞等一起沉淀，起不到分离的效果。××5．纯化蛋白质的原理是根据不同蛋白质之间以及蛋白质

5、与其他分子之间存在电荷差异进行的。(　　)分析：纯化蛋白质的方法是凝胶色谱法，利用的是不同蛋白质之间以及蛋白质与其他分子之间存在分子大小的差异进行的。6．样品处理和粗分离的目的都是除去相对分子质量较小的杂质。(　　)分析：样品处理的目的是除去相对分子质量较大的杂质。××7．透析袋是一种选择透过性膜。(　　)8．SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的依据是蛋白质分子相对分子质量和带电性质的差异。(　　)分析：SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂——十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的电荷量，消

6、除了不同蛋白质间的电荷差别，使蛋白质分子电泳迁移率完全取决于相对分子质量的大小。√×新知解读(一)依据蛋白质的特性的差异蛋白质的理化性质(如形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等)千差万别，由此可提取和分离各种蛋白质。知识点1　血红蛋白提取和分离的方法(二)蛋白质的分离方法：凝胶色谱法1．概念：凝胶色谱法也称做分配色谱法，是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。2．原理：大多数凝胶由糖类化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长移动速度较慢；而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶

7、内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。(三)缓冲溶液1．作用：在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。2．配制：通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。(四)电泳1．概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。2．原理：许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定pH下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。电