培养基的配置.doc

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1、牛肉膏蛋白月东培养基配方：牛肉膏蛋口豚培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有牛肉膏、蛋白豚和NmCI。其中牛肉膏为微牛物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋口豚主要提供氮源，而NmCI提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96°C时溶化，一般实际应用时在沸水浴屮或下而热以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40°C时凝固，通常不被微牛物分解利用。固体培养基小琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌，因此

2、，要用稀酸或稀碱将其pH调至屮性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白豚培养基的配方如下:牛肉膏3g蛋白豚10gNaCI5g琼脂15—20g水1000mlpH7.4—7.6三、器材牛肉膏，蛋口腺，NaCI,琼脂；1mol/LNaOH,1mol/LHCI；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸(pH5.5—9.0),棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。四、操作步骤1•称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白豚、NqCI放入烧杯屮。牛肉膏常用玻

3、棒挑取，放在小烧杯或表面皿屮称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水屮，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。蛋白月东很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一•把牛角匙用于一•种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。2.溶化在上述烧杯屮可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网丄加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品屮，再加热溶化，在琼

4、脂溶化的过程屮，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。3.调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基屮逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6-反Z,则用1mol/LHCI进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH值较精确的微牛物，其pH的调节可用酸度计进行(使用方法，可参考有关说明书)。4.过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一

5、般无特殊要求的情况下，这一步可以省去(本实验无需过滤)。5.分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图V■1O分装过程屮注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞血引起污染。(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜而，如图V・2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。6.加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞丄棉塞，以

6、阻止外界微牛物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。2.包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包-•层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、H期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。3.灭菌将上述培养基以1・05kg/cm2（15磅/英寸2）,121.3°C,20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。4.搁置斜面

7、将灭菌的试管培养基冷至50°C左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。5.无菌检查将灭菌的培养基放入37°C的温室屮培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。