细胞培养对无血清培养基的适应.doc

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1、细胞培养对无血清培养基的适应有两种方法可以使细胞适应无血清培养基(SFM):1．直接适应法式—将细胞直接从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。2．连续适应或循序隔绝法—分几步将细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。与直接适应法相比较，连续适应法对于细胞更温和些。为了使细胞适应无血清培养基，关键是细胞培养应满足以下条件：1．处于对数生长中期2．存活率大于90%3．在适应期间，以较高的初始细胞接种量进行接种　下面列出了常规适应步骤。初始细胞接种量、细胞产量和培养　周期是连续优化的良好开端。直接适应有些类型的细胞可以直接

2、从含有血清培养基适应无血清培养基。对于直接适应，细胞接种量应在2.5x105-3.5x105细胞/ml范围内，当细胞密度达到1x106-3x106细胞/ml时，传代培养细胞。培养4至7天后，当细胞密度达到2x106-4x106细胞/ml时，细胞已完全适应了无血清培养基。当细胞密度达到1x106-3x106细胞/ml且存活率为90%时，应当每隔3到5天再次将适应了无血清培养基的贮存细胞在无血清培养基中进行传代培养。连续适应我们推荐采用连续适应法使细胞适应无血清培养基(SFM),典型的转换步骤如下:第一代75%含血清培养基和2

3、5%无血清培养基第二代50%含血清培养基和50%无血清培养基第三代25%含血清培养基和75%无血清培养基第四代100%无血清培养基由于从75%无血清培养基到100%无血清培养基的变化对细胞的压力过大，因此可能需要将细胞在含有10%含血清培养基与90%无血清培养基的混合培养基中传代培养2-3次。可以认为大多数细胞系在100%无血清培养基中传代培养3次后即可完全适应。在将细胞转换到100%无血清培养基中之前，偶尔也会遇到问题，无法通过某一特定步骤。如果出现这种情况，可在上一混合比例的含血清培养基中将细胞传代培养2-3次。无血清

4、培养基的使用注意事项总体而言,无血清基培养中的细胞对于极端pH值、温度、渗透度、机械压力和酶处理更为敏感。抗生素在无血清培养基中最好不要使用抗生素。如需使用，建议其用量比使用含血清培养基时减少十分之一到五分之一。这是因为血清蛋白倾向于结合一定量的抗生素；如果没有这些血清蛋白，原来使用的抗生素水平将对某些细胞产生毒性。更高的细胞密度在适应前，细胞必须处于对数生长中期，而且存活率大于90%。可能必须采用连续适应的方法。在无血清适应期间，每次传代时接种密度要高于正常传代，这有助于适应过程。由于部分细胞无法在新的培养环境中存活，因

5、此接入更多的细胞可以提高以后传代存活的细胞数量。细胞聚集在适应无血清培养基时，细胞经常会聚成团。建议您在进行细胞传代时将细胞团轻轻弄碎，使之散开。细胞形态在适应无血清培养基的过程中以及适应无血清培养基以后，一般不会发生细微的细胞形态变化。只要细胞倍增时间和存活率保持良好，细微的形态变化是无关紧要的。条件培养基适应适应无血清培养的另一种方法是使用“条件培养基”。这种培养基是指细胞已经在其中生长了完整一代。如果采用这种方法，可以按照以下步骤进行适应第一代100%含血清培养基第二代50%来自第一代的培养基和50%无血清培养基第三

6、代50%来自第二代的培养基和50%无血清培养基第四代50%来自第三代的培养基和50%无血清培养基第五代100%无血清培养基无论采用哪种适应方法，都强烈建议您始终采取下列预防措施：?适应前用含血清培养基冻存一份细胞。?每进行下一步适应之前，都要在上一步的条件中再培养一份细胞作为备份，以免进行下一步适应时细胞无法存活。