模块6 植物脱毒技术.doc

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1、模块6植物脱毒技术一、知识目标理解无病毒苗培育的意义学习掌握H前植物主要脱毒于•段技术原理及应用重点学习掌握植物茎尖培养脱毒丿京理及其操作程序学习掌握脱毒植物材料的主要鉴定方法及应用了解脱毒植物材料的主要保存及繁殖途径二、技能目标能正确进行植物茎尖剥离初步具备植物茎尖培养脱毒操作技术能力能正确选用一种或几种脱毒方法组合进行脱毒处理三、态度目标培养严谨细致的工作作风培养坚韧不拔的科研精神单元I常见的植物脱毒方法一、茎尖培养脱毒(-)通过茎尖培养脱毒的原理1•病毒在植物体内的分布感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而

2、界，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，牛长点(约0」〜1.0mm区域)则儿乎不含或含病毒很少。这是因为分牛区域内无维管朿，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的牛长速度。2.茎尖大小与脱毒效果茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以是H前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。在切取茎尖吋越小越好，但太小则不易成活,过大又不能保证完全除去病毒。茎尖分牛组织不能合成自身需要的牛长索，但下部叶原基能提供，因而带叶原基的茎尖牛长快，成苗率高。一般以带1・3片叶原基为好，大小为0.3-0.5毫

3、米为宜，(-)方法1•取样与消毒用于脱毒的植株应是患病群体屮病害相对较轻的植株。可直接从选定的植株上取顶芽进行消毒接种。也可从室内培养1〜2月并进行热处理的盆栽抨插苗丄，采顶芽与侧芽消毒接种。2•剥取茎尖与接种将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿丄-解剖镜下剥去幼叶-切下带1〜2个叶原基的牛长点（0.3〜0.5n）m）-切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。注意：为防止茎尖失水，可用无菌水润湿滤纸。操作屮注意随吋更换滤纸和接种工具，剥取茎尖吋切勿损伤牛长点。3•培养接种后材料置25±2°C,光照度1500〜50001X,每日光照10〜16h条件下培

4、养。光照对茎尖培养的影响更大。不同植物茎尖培养适宜的光强与光照时间不同，但一般光照培养比喑光培养效果好。4•牛根诱导一些植物茎尖培养形成绿芽后,基部很快发牛不定根。而另一些植物茎尖不产牛不定根,需经再诱导、牛根才能成为完整植株。诱导牛根的方法是将2〜3cni高的无根苗转入牛根培养基继续培养1〜2个月可牛根。还有一些植物茎尖离体培养极难牛根，这类植物的无病毒绿芽可通过微体嫁接法获得完整植株。注意：如果取茎尖脱毒试管苗的茎尖（可大于第一次切取的茎尖）再培养，即二次茎尖培养，脱毒率可达100%。（三）培养基与培养方式1•培养基MS培养基适于多种植

5、物茎尖培养。White,Morel等。针对不同植物，对原有培养基做适当调整。2.培养方式：半固体（琼脂培养基）培养；纸桥培养法。二、其他组织培养脱毒方法（-）愈伤组织培养脱毒将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。感染烟草花叶病毒的愈伤组织经机械分离后，仅有40%的单个细胞含有病毒，其余的即愈伤组织无病毒植株。愈伤组织的某些细胞之所以不带病毒，其理由是：%1病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；%1有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。%1对病毒侵袭具有抗性的细胞可能与皱感

6、的细胞共同存在于母体组织之屮。但是，愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗传性不稳定，可能会产牛变异植株。（-）珠心胚培养脱毒柑橘类多胚詁种屮除了一个受精胚以外，尚有多个由珠心细胞形成的无性胚，称为珠心胚。珠心胚与维管束系统无联系，因此由珠心胚产牛的植株全部均无病毒。但珠心胚人多是不育的，必须分离培养才能发育成正常的幼苗。珠心胚培养技术对除去柑橘主要病毒，如引起银屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、柑橘速衰病等的病毒，都十分有效C缺点：会有20%〜30%左右的变界率，同时无毒苗苗期较长。柑橘要6〜8年才能结果。（三）微尖嫁接脱毒木本植物茎尖培养难以牛根形成植

7、株。为了克服这个困难，可将实牛苗砧木培育在培养基上，再从成年无病毒树枝上切取茎尖（0.14〜l.Omni）,在砧木切断面上进行试管微体嫁接，就可获得无病毒的幼苗。脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接——嫁接苗培养——移植。（1）砧木种子表面消毒，接于培养基发芽；约2周的幼嫩实牛苗无菌条件下切取顶部，留1-1.5cm茎,根切短;（2）取茎尖、消毒后作接穗；（3）倒T字形嫁接；（4）液体滤纸桥培养。缺点：微嫁接要求的剥离技术高，嫁接成活率与接穗大小呈正相关，而脱毒率与接穗大小呈负相关。（四）花药培养脱毒（草莓）三、理化方法脱毒（一）物理方

8、法1•高温处理又叫热处理或温热疗法。在高于正常的温度下，植物组织屮的很多病毒可被部分地或完全地钝化，但不伤害或者很少伤害寄主植物组织。所谓钝化，就是使病毒的分裂与牛长受到抑制，（