逆转录环介导等温扩增技术快速检测大豆花叶病毒-论文.pdf

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1、第33卷第3期大豆科学V01．33No．32014矩6月S0YBEANSCIENCEJun．20l4逆转录环介导等温扩增技术快速检测大豆花叶病毒张雯娜，李晋玉，田金艳，卫其巍，智海剑，陶小荣(1．南京农业大学植物保护学院，江苏南京210095；2．南京农业大学大豆研究所／国家大豆改良中心，作物遗传与种质创新国家重点实验室江苏南京210095)摘要：大豆花叶病毒(Soybeanmosaicvirus，SMV)是一种在世界很多国家广泛分布并极具破坏性的植物病毒，导致大豆严重减产和种质衰退，每年都会给很多国家带来巨大的农业经济损失，为此，建立了一种逆转录环介导等温扩增(Reve

2、rse—transcriptionloopmediatedisothermalamplification，RT—LAMP)全新的SMV检测技术，利用该技术可以快速、准确与有效地检测大豆植株和种子中携带的SMV。根据GenBank数据库中大豆花叶病毒的外壳蛋白基因序列，设计并筛选到了SMVRT—LAMP特异性引物组，应用该引物组优化了RT—LAMP反应参数，灵敏度实验结果表明，RT．LAMP检测SMV比普通RT—PCR灵敏度高10～100倍。结合RNA粗提法，建立了一步法RT—LAMP快速、灵敏地检测到植物叶片中的SMV。加入荧光染料SYBRGreenI则可在反应管中直接观

3、察检测结果，实现了检测的可视化。该R-r_LAMP技术还可灵敏地检测到大豆种子中携带的SMV。RT—LAMP检测方法第一次应用于SMV的检测，具有灵敏度高、速度快和特异性强的优点，可应用于实验室和田问大豆样品SMV的快速检测。关键词：大豆花叶病毒；快速检测；RT．LAMP；大豆；种子带毒检测中图分类号：S435．651文献标识码：ADOI：10．11861／j．issn．1000-9841．2014．03．0422RapidDetectionofSoybeanMosaicVirusbyReverse-—TranscriptionLoop--Media--tedIsothe

4、rmalAmplificationZHANGWen．na，LIJin—yu，TIANJin—yan，WEIQi．wei，ZHIHal—jian，TAOXiao．rong(1．PlantProtectionCollegeofNanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China；2．SoybeanResearchInstitute，NanjingAgriculturalUniversity／NationalKeyLaboratoryforCropGeneticsandGermplasmEnhancement，NationalCen

5、terforSoybeanImprovement，Nanjing210095，China)Abstract：Soybeanmosaicvirus(SMV)isawidelydistributedandhighlydestructiveplantvirusworldwide．InfectionbySMVusuallyresultsinsevereyieldlossesandseedqualityreduction．SMVinfecteddiseasehascausedahugeeconomiclossesinmanycountries．Therefore．reverse．t

6、ranscriptionloop—mediatedisothermalamplification(RT．IAMP)，amethodtoachieverap—id．sensitiveandaccuratedetectionofSMVinsoybeanleavesandseedswasestablished．UsingSMVcoatproteingencse—quencesfromGenBankdatabase．theRT．LAMPprimemsetsweredesignedandthebestprimerssetwasselected．Thentheywereusedfor

7、theoptimizationoftheRT—LAMPparameters．ThesensitivityoftheRT—LAMPwas10—1ootimeshigherthantheconventionalRTPCR．WhencrudeRNAwasintegratedinthisassay．thedevelopedone—stepRTLAMPcouldrapidlyandsensitivelydetectSMVinsoybeanleaves．Thereactionproductcouldbedirectlyvisualized