高效液相色谱测定苯萘蒽的含量.doc

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1、高效液相色谱测定苯萘蒽的含量一实验目的1熟悉HPLC的结构和操作2了解反相高效液相色谱法3掌握峰面积归一化法定量方法二实验原理1仪器结构储液器→高压泵→进样器→色谱柱→检测器→记录仪↓↓梯度洗脱馏分收集器2分离原理在反相高效液相色谱中其分离原理取决于组分与固定相间作用力的大小差异，组分的非极性相对最强，与固定相作用最强，故保留时间最长，最后被洗脱。3归一化法（1）定量校正因子：fi’即mi=fi’*Ai（2）实验一般用相对定量校正因子：fifi=As*mi/Ai*ms式中i指样品；s指标准品，用各

2、组分的标准样品可求出各组分的fi（3）求各组分含量Xi=Ai*fi/(A1f1+A2f2+…Anfn)*100%三仪器与试剂1shimudza高效液相色谱仪，7725i手动进样伐，微量注射器（25μL）,C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,超声波脱气机，抽滤器。2试剂：甲醇、苯、萘和蒽均为分析纯，水为二次蒸馏水，苯、萘和蒽标准溶液（浓度均为100μg/mL），未知浓度的苯、萘和蒽混合溶液。四实验步骤1将实验用流动相进行过滤和脱气处理2开机，依次打开泵、检测器、工作站。调整色谱条件（检测波长

3、：254mnv=1.0mL/min,流动相，甲醇：水=80：20，柱温：室温），平衡色谱系统。3基线平稳后，取混合溶液5μL进样，记录各峰tR和A，重复两次。分别取苯、萘和蒽的标准溶液各5μL，依次进样，以确定混合物中各组分的峰的位置。4清洗色谱柱，关机。五结果处理1根据纯品的出峰时间，确定混合物中各组分出峰顺序。2以苯为标准物，计算各组分的相对定量（质量）校正因子。3计算样品中各组分的百分含量。六思考题1归一化法定量有何优缺点？如果样品中各组分不能完全流出时，用此方法定量是否合适？为什么？2解释

4、样品中各组分的洗脱顺序。如果用纯甲醇作为流动相，则各组分保留时间如何变化？对定量结果有无影响？