利用SSH方法筛选与鉴定AC3基因缺失小鼠主要嗅觉表皮内的差异表达基因-论文.pdf

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1、连Hereditas(Beijing)2014年6,EJ，36(6)：574—583WWW．chinagene．cn研究报告利用SSH方法筛选与鉴定AC3基因缺失小鼠主要嗅觉表皮内的差异表达基因曹振龙，郝江叶，周艳芬，一，张3，倪志华，胡远想3，刘伟丽，李永超4，DanielR．Storm，马润林49王振山1,21．河北大学生命科学学院，保定071002；2．河北省生物工程技术研究中心，保定071002；3．河北大学基础医学院，保定071002；4．中国科学院遗传与发育生物学研究所，北京100101；5．DepartmentofPharmacology,Un

2、iversityofWashington，Seattle，WA98195摘要：腺苷酸环化酶3(Adenylatecyclase3，AC3)基因在小鼠主要嗅觉表皮(Mainolfactoryepithelium，MOE)内的嗅觉信号传导中起着重要作用，AC3缺失是否会导致MOE内与之相关的基因发生差异表达，尚待确定。文章利用抑制性消减杂交(Suppressionsubtractivehybridization，SSH)方法，以AC3敲除(Ac3)及其同窝出生的野生型c3~／+Vj,鼠MOE为材料，构建了正向和反向两个消减文库，采用斑点杂交对消减文库进行初步筛选

3、，对筛选出的差异表达基因进行序列测定及生物信息学分析，并利用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对其进行验证。斑点杂交筛选获得了386个差异表达克隆，随机选取其中的80个进行DNA序列测定，经序列比对后发现有62个在GenBank上获得了与之相匹配的基因信息，其中24个上调差异表达克隆对应于kcnk3．mapk7、megfll等基因，38个下调差异表达克隆对应于tmem88b、c—mip、skpla、mlycd等基因。利用GeneOntology(GO)方法对这些差异表达基因进行蛋白功能注释，发现它们主要集中在分子结合、细胞周期、生物和细胞过程等功能方面选取

4、其中上调基因kcnk3和下调基因c．mip、mlycd、tmem88b及trappc5进行qRT-PCR验证。结果表明，在AC3小鼠MOE内kcnk3的表达量显著上调，是对照组小鼠的1．27倍，而c．mipmlycd、tmem88b和trappc5的表达量显著下调，为对照组小鼠的20％、7％、32％和29％。这些基因的功能与K通道、细胞发育与分化、脂肪代谢和膜蛋白转运等密切相关。推测它们可能与AC3基因共同作用，调节小鼠MOE内的嗅觉信号传导信息。关键词：腺苷酸环化酶3；主要嗅觉表皮；差异表达基因；抑制性消减杂交收稿日期：2013—11-24；修回日期：20

5、14—01一l6基金项目：国家自然科学基金项目(编号：31171191)，河北省自然科学基金项目(编号：C2012201106)，教育部留学人员回国启动基金项目(教外司留<2013>693号)和河北省生物工程重点学科经费资助作者简介：曹振龙，硕士研究生，专业方向：细胞分子生物学。E—mail：dafeizizhu@163．GOm通讯作者：王振山，教授，博士生导师，研究方向：动物行为遗传分子机制。E．mail：zswang@hbu．edu．cnDOI：l0．3724／SPJ．1005．2014．0574网络出版时间：2014．4一I11：35：35URL：ht

6、tp：／／www．cnki．net／kcms／detail／11．1913．R．20140401．1135．001．html第6期曹振龙等：利用SSH方法筛选与鉴定AC3基因缺失小鼠主要嗅觉表皮内的差异表达基因575Differentiallyexpressedgenesidentifiedinthemainolfactoryepi—theliumofmicewithdeficiencyofadenylatecyclase3byusingsup-pressionsubtractivehybridizationapproachZhenlongCao，Jiang

7、yeHao，YanfenZhou，ZheZhang，ZhihuaNi，YuanxiangHu，W_eiliLiu，YongchaoLi4，DanielR．Storm，RunlinZ．Ma4，ZhenshanWang，1．CollegeOfLireScience，HebeiUniversity，Baoding071002，China；2．ResearchCenterofBioengineeringofHebeiProvince，Baoding071002，China；3．CollegeofBasicMedicine，HebeiUniversity，Baodin

8、g071002，China；4．Instituteo