脱氧雪腐镰刀菌烯醇人工抗原和多克隆抗体的制备.pdf

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1、第26卷第2期V01．26。No．22010年3月Mar．2010脱氧雪腐镰刀茵烯醇人工抗原和多克隆抗体的制备PreparationofartificialantigenandpolyclonalantibodiesagainstdeOxyniValenOl张燕马冬月段素欣姜小梅王硕ZHANGYanMADong—yueDUANSu—xinJIANGXiao—meiWANGShuo(食品营养与安全教育部重点实验室，天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457)(KeyLaboratoryofFoodNutritionandSafety，Mini

2、stryofEducation，FacultyofFoodEngineeringandBiotechnolgy，TianjinUniversityofScienceandTechnology，Tianjin300457，China)摘要：对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的两种半抗原合成方法sariumculmorum)和燕麦镰刀菌(fusariumavenaceum)产进行对比研究，合成半抗原，并采用活化酯法将半抗原与牛生，该类真菌毒素是污染粮食的主要毒素，一般大麦、小血清白蛋白偶联制备得到免疫原，通过特定程序免疫日本大麦、玉米、燕麦中均含有较高浓度的

3、呕吐毒素，它具有急性毒耳白兔获得了多克隆抗体。抗血清效价为1：32000，protei性、免疫毒性和胚胎毒性，是赤霉病麦引起人、畜中毒的主nA—sepharose4B亲和层析纯化的D0N抗体与DON、3一AC—要毒素。其结构式见图1。D()N(3一乙酰氧基脱氧雪腐镰刀茵烯醇)、15AC—DON(15一乙酰氧基脱氧雪腐镰刀菌烯醇)、T一2毒素、0TA(赭曲霉A)、oHZEN(玉米赤霉烯酮)的交叉反应率分别为：100、500、2．5O、0．10、0．01、0．01，表明了所制备DON抗体的高特异性。0关键词：脱氧雪腐镰刀茵烯醇；人工抗原；多克隆抗体；效价

4、；特异性Abstract：DeoxnivalenolhaptenwassynthesizedsuccessfullyfollowedOHbystudyingofthetwokindsofhaptensynthesismethod．Theim—呕吐毒素的化学结构munogenwaspreparedfollowingaschemethatemploysactiveesterChemicalStructureofDONmethodfortheconjugationofthehaptenstoBSA(bovineserumal—bumin)，withwhic

5、hpolyclonalantibodiesagainstde。xyniva1en。1目前检测呕吐毒素的方法主要有：薄层层析法wereraisedinrabbitsafterimmunization．Theantiserumtiterw3s1(TLC)[、高效液相色谱(HPIC)[、气相色谱(GC)[和免：32000，andtheantiserumwaspurifiedbyproteinA—sepharose4Bimmunityaffinitychromatography．Theantibodyspecificitywas疫法l6]，免疫法中最常用的是

6、酶联免疫吸附试验checkedonthebasisofthe50inhibitionlevels，relativecrossreac—(ELISA)[8-]。其中，传统的薄层层析方法操作复杂，仪器tivitieswithDON，3AC-DON，l5一ACD0N，T2，0TAandZEN检测结果准确可靠，但是样品前处理过程复杂，并且仪器设Werefoundtobe100，500％，2．50，0．10，0．01％，0．O1．备比较昂贵；酶联免疫吸附试验操作简便，样品前处理简单，Keywords：deoxynivalen01；artificialantig

7、en；polyclonalantibodies；titer；specificity不需要净化，适用于大量样品的快速筛选，具有很好的应用前景。脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxyniva1enol，DON)，又名呕吐本研究主要对两种半抗原合成方法进行了比较，得出一毒素(vomitoxin)，是B型单端孢霉烯族化合物中的一种，主种有效的方法，制备出了高灵敏度的多克隆抗体，为建立呕要由禾谷镰刀菌(fusariumgraminearum)、黄色镰刀菌(fu一吐毒素的ElISA检测方法提供依据。l材料与方法基金项目：国家科技支撑计划课题(项目编号：2009BADB9

8、B03)1．1试剂与仪器作者简介：张燕(1970～)，女，天津科技大学食品工程与生物技术学1．1．1材料呕吐