生化分析仪检测原理课件.ppt

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1、临床生化检验反应原理及报告审核检验科黄小虎全自动生化分析仪生化分析仪特点优点亮点自动化机械化的仪器设备模仿代替手工操作提高了工作效率减少了主观误差灵敏准确快速标准化生化分析仪分类1按结构原理分管道连续流动式分立式——常用离心式干片式——急诊常用2按测定速度分小型中型大型超大型（模块式）3按自动化程度分半自动全自动2004중점사업분야生化分析仪主要构成加样系统供排水系统构成比色系统光源比色杯单色器检测器数据处理系统样品转盘试剂仓取样装置基本原理临床生化分析仪最常使用的是——分光光度法分光光度法——是通过测定被测物质在特定波长处或一定

2、波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。分光光度计组成光源样品池单色器检测器记录装置滤光器光吸收曲线溶液对不同波长光的吸收程度，通常用光吸收曲线来描述。在分光光度法中,以吸光度为纵坐标,以波长为横坐标作图可得光吸收曲线。浓度不同的同种溶液,在该种曲线中其最大吸收波长相同，相应的吸光度大小则不同，同一波长下摩尔吸数相同。Lambert-Beer（朗伯-比尔）定律当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比A=kcbA---吸光度k---吸光系数c---溶液浓度b---液层厚度吸光系数

3、定义：吸光物质在单位浓度及单位厚度时测得的吸光度。K值的大小取决于吸光物质的性质、入射光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位的不同而异。讨论：1.Lamber-Beer定律的适用条件（前提）:入射光为单色光溶液是均匀，无散射溶液2.该定律适用于固体、液体和气体样品3.在同一波长下，各组分吸光度具有加和性，如果溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质,则测得的该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物质吸光度的总和，即：A（a+b+c）＝Aa＋Ab＋Ac应用：多组分测定定量分析方法(1)标

4、准曲线法(2)标准溶液对比法(3)吸光系数法标准曲线法——最经典方法前提：固定仪器和固定条件A=K*BC过程：配置标准溶液系列→分别测定A→得C~A曲线样品→测定A样→查得C样标准溶液对比法在相同的条件下，配制浓度为cs的标准溶液和浓度为cx的样品溶液，在最大吸收波长处，分别测定二者的吸光度值为As、Ax，依据朗伯-比尔定律得:As=KbcsAx=Kbcx则:cx=cs*Ax/AsX吸光系数法吸光系数法又称绝对法，是直接利用朗伯-比尔定律的数学表达式A＝Kbc进行计算的定量分析方法。在手册中查出待测物质在最大吸收波长处的吸光系数或,

5、并在相同条件下测量样品溶液的吸光度A，则其浓度为：或检测方法1.终点法2.固定时间法3.连续监测法终点法终点分析法是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小，对物质进行定量的一类分析方法。反应混合物进行一定时间反应后，达到平衡终点，即在显色反应处于稳定阶段时，监测其颜色对光的吸收强度，以此计算待测物浓度。终点时间的确认：一、根据时间-吸光度曲线如:Trinder（偶联终点比色法）反应测尿酸，反应曲线上3-5分钟时其A趋向稳定,故可将5分钟作为反应终点。二、根据被测物反应终点，结合干扰物的反应情况来确定如:溴甲酚

6、绿法测血清白蛋白分类终点法：一点终点法二点终点法免疫比浊法双波长法一点终点法一点终点法——在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个时间点测定吸光度值。通常在反应终点附近连续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。一点终点法的设置：以R和S混合之前的空气空白、水空白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点，以反应达到平衡的吸光度读数减去空白读数，校准曲线通过零点且成直线，对于反应速度比较快的实验多用。多见于单试剂项目，如：总蛋白，白蛋白等。2021/10/721AmT（时间）AS+R(吸光度）一点终点法反

7、应曲线计算公式：C=(Am-Ab)*KAm----终点读数点的吸光Ab----试剂空白吸光度K----校正系数TP反应曲线蛋白质+Cu2+→Cu-蛋白质络合物550nm处吸收峰二点终点法第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光度Am，经过一定时间后反应达终点后测第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计算结果。第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反应有关，相当于样品空白，可有效的消除样品自身的吸光度，如溶血，黄疸，脂血等的干扰。AnTAR2AmS+R1(吸光度）（时间）两点终点样本空白=S+R1S+R1+R2（体积校正因子）k

8、0计算公式C=(An-K0*Am)*KCRE反应曲线肌酐在一系列酶的作用下生成H2O2，H2O2和4-氨基氨替比林反应生成红色醌类物质，在540nm处有吸收峰。Mg反应曲线在碱性溶液中，Mg与二甲苯胺蓝形成重氮盐类的紫色复合物，Mg2