细菌生物学检验基本技术ppt课件.ppt

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1、细菌生物学检验技术TextTextText第一节细菌的形态学检查讲授内容显微镜的使用细菌的形态学检查方法细菌的基本形态和特殊结构观察显微镜普通光学显微镜（lightmicroscope）暗视野显微镜（dark-fieldmicroscope）相差显微镜（phasecontrastmicroscope）普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌均能清楚看到。暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态及某些内部结构。普通光学显微镜暗视野显微镜倒置相差显微镜显微镜油镜的使用(一)低倍镜对光，将光线调至最强程度

2、(聚光器提高，光圈全部开放)。转动粗调节器使镜筒上升，滴香柏油1小滴(不要过多，不要涂开)于接物镜正下方标本上。转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油镜头徐徐下降浸入香柏油内，轻轻接触玻片为止。显微镜油镜的使用(二)慢慢转动粗调节器，使油镜头徐徐上升至见到标本的物象为止。转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。标本观察完毕后，转动粗调节器将镜筒升起，取下标本玻片。立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净。显微镜的保护(一)显微镜在从木箱中取出或装箱时，右手紧握镜臂，左手稳托镜座，

3、轻轻取出。不要只用一只手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在实习台上或装入木箱内。显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装置易损坏。显微镜的保护(二)显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油污，先将擦镜纸蘸少许二甲苯拭去。显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下，再将物镜转成“八”字形，转动粗调节器使镜筒下降，以免接物镜与聚光器相碰。细菌形态学检查方法不染色检查法染色检查法负染色法（一）不染色标本检查应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式。常用方法

4、：压滴法、悬滴法、暗视野映光法。1、压滴法载玻片细菌悬液盖玻片2、悬滴法镜检盖玻片细菌悬液凹玻片染色检查法细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类。染色检查法常用染料染料分天然染料和人工染料。依据助色基解离后的带电情况，要将染料分为碱性和酸性两种。碱性染料常以氯化物的形式存在，电离后带正电荷。如美兰、结晶紫、碱性复红等。酸性染料电离后带负电荷。如伊红、刚果红等。染色检查法染色的一般原理和程序细胞壁通性学说：与肽聚糖结构有关。化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关。等电点学说：与细菌所带电荷有关。染色检查法染色的

5、一般原理和程序染色材料准备→涂片制备→染色。染色材料准备要注意染液配制、玻片处理、标本采集等几个环节。涂片制备是在玻片上制备菌膜的过程。通常是用接种环将细菌涂成1cm~2cm大小菌膜，待自然干燥后经固定处理再行染色。染色是增加被染物折光性过程。根据形态学检查要求可将染色法分为单染色法和复染色法。涂片干燥固定染色水洗、吸干镜检制备涂片标本→染色固定固定的目的在于：①杀死细菌。②使细胞物质凝固和增加细菌通透性。③使菌膜较牢固地固定于玻片上，避免其在染色过程中脱落。固定可采用加热法、冻干法、和化学法。碱性美蓝液和石炭酸复红液单染色法【染液】碱性美蓝液、石炭酸复红液【方

6、法】将上述某种当液覆盖于菌膜上，常温染1min~3min，水洗，待干或吸水纸印干，镜检。【结果】菌体呈蓝色或红色。单染色法常用复染色方法革兰氏染色法抗酸染色法异染颗粒染色法荚膜染色法芽孢染色法鞭毛染色法染色涂片保存法革兰染色（Gramstain）最经典、最常用的染色方法。通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类。革兰氏染色的步骤1.涂片2.初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。4.脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15－20秒，后立即用

7、流水冲洗。5.复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。6.镜检：观察染色结果并绘图。革兰染色结果紫色－－革兰阳性菌红色－－革兰阴性菌革兰阳性菌革兰阴性菌影响革兰染色的因素操作因素涂片的厚薄；脱色时间的长短。染液因素卢戈碘液放置时间过长；95％乙醇挥发；结晶紫与草酸铵混合时间太长。细菌因素细菌种类；细菌菌龄等。革兰氏染色法鉴别细菌抗酸染色法抗酸染色法是用于区分混合标本中分枝杆菌属细菌（如结核杆菌、麻风杆菌）的鉴别染色方法。【原理】完整分枝杆菌中含有分枝菌酸，能在加热条件下与渗入细胞内石炭酸复红牢固结合，其细胞壁有阻止染料脱出作用。因此能抵抗盐酸酒精

8、脱色使菌体染成红色，称抗