细菌的基本检验技术ppt课件.ppt

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1、第一章细菌检验基本技术鞠晓红、申艳娜、罗红目录第一节细菌形态学检查法第二节细菌的培养与分离技术第三节细菌的生物化学鉴定技术第四节细菌非培养检验技术第五节细菌检验的自动化第一节细菌形态学检查法鞠晓红重点提示不染色标本的形态学检查染色标本的形态学检查革兰染色抗酸染色一、显微镜1．普通光学显微镜（lightmicroscope）光源：可见光2．暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）暗背景，菌体发光用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察3．荧光显微镜（fluorescencemicroscope）

2、光源：100W~200W的高压汞灯一、显微镜4．相差显微镜（phasecontrastmicroscope）检查不染色活细菌的形态及某些内部结构5．电子显微镜（electronmicroscope)光源：电子流透射电镜：观察细菌内部超微结构扫描电镜：对细菌表面结构及附件观察二、不染色标本的细菌学检查常用方法压滴法悬滴法用途动力试验：检查细菌有无动力及运动状况制动试验：初步鉴别病原菌；鉴定血清型三、细菌染色标本的检查（一）常用染料1．碱性染料解离后色基带正电荷，如碱性亚甲蓝、结晶紫、碱性复红等2．酸性染料解离后色基带

3、负电荷，如伊红、酸性复红、刚果红等3．中性染料碱性染料与酸性染料的复合物，如瑞氏染料、姬姆萨染料等三、细菌染色标本的检查(二)常用染色方法单染色法只用一种染料，如吕氏美蓝。用于观察细菌的形态、大小、排列复染色法（鉴别染色法）用两种或两种以上不同颜色的染料，以区别细菌的着色性1．革兰染色（Gramstaining）（1）原理细胞壁学说：两种细菌细胞壁结构不同G+菌肽聚糖层厚、致密，脂质含量少；G-菌薄而疏松，脂质含量多等电点学说：G+菌pI2～3；G-菌pI4～5化学学说：G+菌含有核糖核酸镁盐多，G-菌含量少三、细

4、菌染色标本的检查-革兰染色三、细菌染色标本的检查-革兰染色（2）结果细菌分为革兰阳性（G+）菌和革兰阴性（G-）菌紫色为革兰阳性菌，红色为革兰阴性菌革兰染色方法三、细菌染色标本的检查-革兰染色三、细菌染色标本的检查2．抗酸染色（1）原理分枝杆菌细胞壁含脂质较多，其中主要成分为分枝菌酸，此物具有抗酸性，染色时与石炭酸复红结合牢固，能抵抗酸性乙醇的脱色作用，因此抗酸菌能保持复红的颜色，达到初步鉴别细菌的目的（2）结果抗酸性细菌和非抗酸性细菌未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌脱色经复染呈蓝色为非抗酸性细菌三、细菌染色标本的检查

5、3．其他染色方法（1）鞭毛染色（2）荚膜染色三、细菌染色标本的检查第二节细菌的培养与分离技术鞠晓红重点提示培养基的主要成分及作用培养基的种类培养基制备的基本程序细菌接种与培养方法细菌在培养基中的生长现象一、培养基概念：人工配制的、适合细菌生长繁殖的混合营养基质要求：培养基必须含有细菌生长繁殖所需的营养物质和适宜的pH值一、培养基（一）培养基的组成1．营养物质氮源、碳源、无机盐及生长因子蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖（醇）类、血液、鸡蛋和动物血清、无机盐、生长因子2．不含杂质的蒸馏水或离子交换水3．凝固物质即赋形剂，常用

6、琼脂、明胶一、培养基4．抑制剂抑制非检出菌的生长或使其少生长，以利于检出菌的生长胆盐、煌绿、玫瑰红酸、亚硫酸钠、某些染料及多种抗生素等5．指示剂常用的指示剂：酚红、中性红、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、甲基红等一、培养基（二）培养基分类1．按成分分类合成培养基：是人工合成，组分明确，都是无机盐和化学纯物质组成的培养基天然培养基：也称复合培养基。是指含有化学成分不完全明了或各批物质的成分很难一致的天然物质所组成的培养基，如蛋白胨、牛肉膏、肉浸液、鸡蛋、马铃薯等。细菌检验常用一、培养基2．按营养成分和用途分类基础培养基：只有

7、基本营养成分营养培养基：加有血液、血清等鉴别培养基：含有特定底物和指示剂选择培养基：含有抑制剂特殊培养基：厌氧、细菌L型一、培养基3．按物理性状分类液体培养基：增菌固体培养基：分离培养、纯化、增菌半固体培养基：动力检测、保存菌种一、培养基（三）培养基的制备1．调配根据培养基组成，准确称取各组分，先加一部分蒸馏水，再加培养基干粉，最后补足水量2．溶解液体培养基不需加热3．校正pH一般7．2~7．64．过滤澄清液体培养基用滤纸；固体培养基用纱布（若培养基澄清，此步可省略）一、培养基5．分装平板：灭菌后冷却至50~60℃

8、时倾倒90mm内径倾注25~30ml（4mm厚）：药敏用90mm内径倾注13~15ml（3mm厚）：培养用琼脂斜面：分装量为试管的1/4~1/3，灭菌后趁热摆成斜面，斜面长度约为试管的2/3高层、半固体、液体：分装量为试管长度的1/3一、培养基6．灭菌高压蒸汽灭菌无糖：103．4kPa121．3℃维持15~20min有糖：68．95kPa115℃维持15mi