醋酸菌培养基.doc

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1、培养醋酸菌用1.醋酸菌斜面培养基：葡萄糖1克，酵母膏1克，碳酸钙1克，琼脂2.5克，水100毫升。2.斜面培养斜面制作：培养基按配方调配好（碳酸钙先不加入），分装试管，灭菌备用。碳酸钙按比例分装、灭菌。摆斜面前将培养基和碳酸钙混合，用手搓均匀，然后摆斜面，备用。3.AcetobacterMedium(醋酸菌培养基)Glucose(葡萄糖)100gYeasstextract(酵母膏)10gCaCO320gAgar(琼脂)15gDistilledwater(蒸馏水)1000mlAdjust(调)pHt

2、o6.8适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种3.1斜面培养基　　葡萄糖8g，酵母粉10g碳酸钙5g琼脂15~20g水1000mLpH5.5，分装试管。0.IMPa灭菌20min。95％酒精(食用级)40mL。摆斜面，3.2液体增殖培养基　　葡萄糖10g酵母粉10gpH5.5水1000mL灭菌后加入酒精(食用级)40mL0.1MPa灭菌20min。3.3醋酸菌种的制备　　扩大培养过程：安瓿管，液体试管1．液体试管2，100mL三角瓶，500mL三角瓶，1000mL三角瓶，种子罐。3.3.1安瓿管开启：酒精

3、棉球擦抹三次，用重器撞击，打开，注入0.5mL无菌水，将菌球溶解，全部注入装有10mL液体培养基的18×180试管1内，30℃培养72h，每2h摇动—次3.3.2菌体生长：培养基变混浊后，颜色变浅，对光观察摇动时有云雾状金属光泽。每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或0.5mL菌液，30℃培养48h，每2h摇动—次。3.3.3三角瓶三级扩培，三角瓶中培养基的装量为50％，每级按种量在10％左右，在转换振荡器上恒温培养，培养温度均为30℃，时间依次缩短为36、36、24h，3.3.4种子罐培

4、养基同前配料后种子罐夹套加热灭菌100℃保持15min，冷却后，先加入4％食用酒精，无菌操作接入菌种。接种量为10％~12％，温度保持在30℃±1℃，通无菌空气，菌体生长时间为24~36h．视菌体生长情况及镜检结果而定3.3.5每次接种前，先将菌种进行外观观察。有异样情况者，作涂片、染色、镜检观察，菌体生长不正常或染菌的三角瓶不得使用。外观正常者抽检2—3个样品，在确保菌株纯度、无污染的情况下转入下一级菌种扩培。培养醋酸菌时，需要用含糖或酵母膏（维生素B）的培养基，在肉汤蛋白胨培养基上生长不良。大

5、多数菌株可用六碳糖和甘油作为碳源，对甘露醇和葡萄糖酸盐很少能利用或不能利用，不分解乳糖、糊精和淀粉。醋酸菌不形成芽孢，一般为形态近于球菌的短杆菌。醋酸菌可在PH4.3以下繁殖，增殖时多在液面成膜。幼龄细胞呈G-，老龄细胞呈可变性，因而染色只用来作为鉴定时的参考因素。醋酸菌增殖时生成挥发性酸臭。感官判断类似于一种丁香成分，和纯醋酸的嗅感不同。防止方法不外呼改善工厂的环境卫生，加强卫生管理什么的。但是它也是很好控制的：1好气性菌，尽可能降低密封容器的溶解氧（效果明显）2.降低PH值基本无效。3.污染主

6、要在5，6月份发生。4.与容器有关，塑料容器要比玻璃瓶容易感染，可能与塑料容器的透氧性有关。5.醋酸菌不形成芽孢，故耐热性不强，65℃5~10分钟即可杀死。所以综合来看醋酸菌不是很难控制的。