实验一总氮量的测定.doc

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1、实验一总氮量的测定——凯式定氮发一、实验目的1.掌握凯式定氮发的原理2.天然有机物测定及操作技术二、实验原理含氮有机物与浓硫酸共热时，其中氮转化成氨，进一步与硫酸作用生成硫酸铵，称“消化”，例：NH2CH2COOH+3H2SO4→2CO2+3SO2+4H2O+NH32NH3+H2SO4→(NH4)2SO4浓碱可使其中硫酸铵分解，游离出氨，借蒸汽蒸馏到硼酸中，用标准盐酸滴定，恢复原来氢离子为止，算出总氮量。总氮量=c(V1-V2)×0.014×100/m×消化液总量(ml)/测定时消化液用量(ml)

2、×100%c为标准盐酸溶液物质的量浓度，V1为滴定样品用去盐酸溶液平均体积，V2为滴定空白消化液用去盐酸体积，m为样品质量。若测定的样品中含氮部分只是蛋白质，则：样品中蛋白质含量=总氮量×6.25×100%三、实验器材与使用装配电子天平：精确称量实验样品与催化剂电炉：加热凯氏烧瓶进行消化；加热蒸馏烧瓶，产生水蒸汽石棉网：加热时垫于烧瓶与电炉之间，避免烧瓶直接受热破裂铁架台：固定装置（铁夹）凯氏烧瓶2个：装实验样品、催化剂等，放于电炉上消化漏斗2个：接于凯氏烧瓶口，导出消化时产生的气体玻璃珠若干个：

3、防止暴沸0.1ml移液管：精确量取0.1ml蒸馏水，做空白组的试剂10ml移液管：精确量取10ml实验组与对照组的溶液至玻璃杯中纸槽：将固体药品倒入凯氏烧瓶中50ml容量瓶2个：定容50ml的样品组溶液与空白组溶液2000ml蒸馏烧瓶：作为蒸汽发生器，产生蒸汽安全管：保证蒸馏烧内外的气压稳定弯管：连接烧瓶和反应管反应管：消化液与浓碱反应产所橡皮管：连接蒸馏烧瓶和反应管；连接水源和冷凝管；导出废液冷凝管：将产出的蒸汽冷凝为液体皮管夹：夹住橡皮管，防止漏气镊子：捏住接通蒸汽发生器与反应管之间的橡皮管，

4、避免被烫伤棒状玻璃塞：通过磨口与反应管的玻璃杯接合，防止漏气表面皿：盖住装有硼酸溶液与田氏试剂的锥形瓶，防止挥发10ml量筒：量取硼酸溶液、NaOH溶液和蒸馏水锥形瓶4个：装硼酸与5ml田氏试剂大烧杯：收集废液胶头滴管：保证准确量取溶液酸式滴定管：装标准盐酸，用于滴定反应产物四、实验试剂助消化液（过氧化氢∶浓硫酸∶水=3∶2∶1）5ml粉末硫酸钾-硫酸铜的混合物（催化剂）200mg4%硼酸溶液5ml×6标准盐酸溶液（0.01mol/L）300g/LNaOH溶液（10ml×4）田氏试剂1~2滴（每一

5、份）稀硫酸1~2滴市售标准面粉0.1g五、实验操作与步骤1.消化取2个100ml凯氏烧瓶→一瓶加面粉0.1g、催化剂200mg、助消化液5ml；另一瓶加蒸馏水0.1ml，等量催化剂与助消化液，各加1~2颗玻璃珠→烧瓶口放漏斗，放电炉上加热消化→冒烟后加火→记录颜色变化→消化液呈透明淡绿色，停止加热→冷却后定容至50ml容量瓶，标注“空白”与“样品”2.安装凯氏定氮仪蒸馏烧瓶加2/3蒸馏水、1~2滴稀硫酸、几颗玻璃珠，至于电炉上→塞上安全管和弯管的橡皮塞→用橡皮管连接烧瓶与反应器→反应管与冷凝管磨口

6、相连→冷凝管接上橡皮管，与水源相连（上出下进）→反应管玻璃杯接棒状玻璃塞3.蒸馏①蒸馏器洗涤打开电炉开关→水烧开后，使蒸汽通过整个装置→冷凝管滴下第一滴水滴，过15min→冷凝管下放装硼酸和田氏试剂的锥形瓶→溶液不变色（说明洗涤干净）→捏紧橡皮管，打开皮管夹排水②空白组蒸馏在冷凝管先放置装有硼酸与田氏试剂的锥形瓶→用移液管移10ml标“空白”容量瓶的液体→从玻璃杯注入反应管→量取10mlNaOH溶液从玻璃杯注入反应管，尚未流入时加5ml蒸馏水→手提棒状玻璃塞，蒸馏水一半流入反应管，一半留作水封→锥

7、形瓶内溶液由紫色变绿色时计时5min→使液面离开冷凝管下端1cm，等1min后移开锥形瓶→用表面皿覆盖锥形瓶等待滴定→用镊子捏紧橡皮管，将玻璃杯中蒸馏水流入反应管，打开皮管夹，放出废水→重复以上实验步骤→多次洗涤反应管③样品组蒸馏在冷凝管先放置装有硼酸与田氏试剂的锥形瓶→用移液管移10ml标“样品”容量瓶的液体→从玻璃杯注入反应管→量取10mlNaOH溶液从玻璃杯注入反应管，尚未流入时加5ml蒸馏水→手提棒状玻璃塞，蒸馏水一半流入反应管，一半留作水封→锥形瓶内溶液由紫色变绿色时计时5min→使液面

8、离开冷凝管下端1cm，等1min后移开锥形瓶→用表面皿覆盖锥形瓶等待滴定→用镊子捏紧橡皮管，将玻璃杯中蒸馏水流入反应管，打开皮管夹，放出废水→重复以上实验步骤→多次洗涤反应管4.滴定将四个锥形瓶中的溶液分别用标准盐酸滴定→锥形瓶中的溶液有点变色时，注意控制滴定的速率→锥形瓶中液体由绿变淡紫时为滴定终点→记录四组滴定时标准盐酸的用量→取平均值→计算六、注意事项1.用纸槽把面粉和样品送入烧瓶底部，不要残留在瓶口周围2.凯氏烧瓶装完反应物后，在瓶口放漏斗，是气体容易散发出来3.发生器的玻