医学检验实验指导.doc

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1、《临床检验基础》实验指导（供医学检验专业五年制本科使用）遵义医学院医学检验系组编2005年12月第一章外周血常规检验综合评价实验【检验流程】熟悉检验方法及原理试剂配制及准备标本采集及处理白细胞计数及分类计数红细胞计数及血红蛋白测定血小板计数检验结果综合评价及临床意义探讨实验一红细胞计数【目的】掌握显微镜红细胞计数（redbloodcellcount）方法。【原理】用等渗稀释液将血液稀释一定的倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。【器材】显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒。

2、【试剂】红细胞稀释液（Hayem液）：氯化钠1.0g，结晶硫酸钠5.0g（或无水硫酸钠2.5g）蒸馏水加至200ml。溶解后加20g/l伊红溶液1滴，过滤后使用。【标本】外周血或抗凝血（EDTA抗凝）。【操作】1．稀释液取小试管1支，加红细胞稀释液2ml。2．加血用清洁干燥微量吸管采集末梢血或抗凝血10ul，檫去管外余血，轻轻加至红细胞稀释液底部，再轻吸上清夜清洗吸管2~3次，立即混匀。3．充池混匀或用微量吸管或玻璃棒将红细胞悬液充入计数池，室温下平放3~5min，待细胞下沉后于显微镜下计数。4．计数用高倍镜依次计数中央大方格内4角和正中5个方格内

3、的红细胞数。5．计算红细胞/L=N×25/5×10×106×200=N×1010=N/100×1012N：表示5个方格内数得的红细胞数。25/5：将5个大方格内数得的红细胞数换算成1个大方格的红细胞数。×10：将1个大方格红细胞换算成1ul血液内红细胞。×106：1L＝106ul200：为血液的稀释倍数。【注意事项】　1．采血时不能过分挤压采血部位，针刺部位深度必须适当。2．采血应顺利、准确，采血部位不得有水肿、发绀、冻疮、炎症等。红细胞数量增高时可适当加大稀释倍数。3．大小方格内压线细胞的计数遵循数上不数下、数左不数右的原则。避免多数或漏数。4．

4、稀释液要过滤，小试管、计数板均须清洁干燥，以免杂质、微粒等被误认为是细胞。5．如无上述稀释液时，也可用新鲜配制的等渗盐水代替。6．将细胞悬液充入计数池时要一次完成，不能产生满溢、气泡、或充池不足的现象。7．红细胞在计数池中若分布不均，每个方格之间相差超过20个以上时要重新充池计数。正常数值范围内，2次红细胞计数相差不得超过5%。【方法学评价】目视计数法是传统的的红细胞计数法，不需要特殊设备，但操作复杂、费时。【质量控制】1．计数评价　在细胞计数的评价中，多采用两差比值（r）评价。2．稀释　造成稀释倍数不准确的常见原因有：①稀释液或血液加样不准确。②

5、吸血时吸管内有气泡。③未檫去吸管外血。④血液加入稀释液时使上清液浑浊，血液被吸管带出。⑤稀释液放置的时间过长，蒸发浓缩。【参考值】①成年男性：（4.0～5.5）×1012／Ｌ。②成年女性：（3.5～5.0）×1012／Ｌ。③新生儿：（6.0～7.0）×1012／Ｌ。实验二血红蛋白测定氰花高铁血红蛋白测定法【目的】掌握氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定方法。【原理】在血红蛋白转化液中，除硫化血红蛋白外，其余血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与氰离子（CN-）结合，生成稳定的复合物氰化高铁血红蛋白（hemoglobincyanide，HiCN

6、）。棕红色的氰化高铁血红蛋白在波长540nm处有吸收峰，可用校正的高精密分光光度计进行直接定量测定，或用HiCN参考液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。【器材】一次性消毒采血针，微量吸管，试管。5ml移液管，75%（V/V）乙醇棉球，无菌干棉球，分光光度计，试管。【试剂】1．HiCN转化液（文齐液）氰化钾（KCN）50mg，高铁氰化钾[K3Fe（CN）6]200mg，无水磷酸二氢钾（KH2PO4）140mg，TritonX–1001.0ml，蒸馏水加至1000ml，纠正pH至7.0~7.4。此液淡黄色透明溶液，用蒸馏水调零，比色

7、杯径1.000cm，波长540nm处的吸光度应<0.001。贮存在棕色有塞玻璃瓶中，放4℃冰箱保存，一般可保存数月。如发现试剂变绿、浑浊不能使用。2．HiCN标准液（200g/L）商品试剂。【标本】外周血。【操作】1．直接定量测定（1）加转化液：试管内加5mlHiCN转化液。（2）采血与转化：取全血20ul，加到盛有转化液的试管底部，用上清液反复冲洗吸管3次，充分混合，静置5min。（3）测定：以符合WHO标准的分光光度计（常规测定时带宽应小于6cm）。波长540nm处，光径（比色杯内径）1.000cm，HiCN转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A）

8、。（4）计算：根据标本的吸光度（A）直接计算出血红蛋白浓度（g/L）。血红蛋白（g/L）=A×64458/44000×25