高分辨率溶解曲线和TEAL-TIME PCR.doc

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1、目前，有不少人把高分辨率熔解曲线(HRM)和Real-time的熔解曲线混为一谈，只要一听到熔解曲线4个字就和荧光定量联系在一起了，再加上现在市面上有些仪器兼具荧光定量和HRM的功能，使一些同行更加迷惑。今天去给大家讲一下两者之间的区别。（一）.两者的原理HRM：不同核酸分子的片段长短、GC含量、GC分布等是不同的，因此任何双链DNA分子在加热变性时都会有自己熔解曲线的形状和位置。HRM技术的基本原理就是在PCR反应之前加入饱和染料，在PCR反应之后进行升温变性，采集荧光信号，根据熔解曲线的不同即Tm值的不同来对样品来进行区分。Real

2、-time：是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监控整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。（二）.两者的采集过程HRM：高分辨率熔解曲线（HRM）是在PCR反应之后，对PCR产物进行升温变性，采集荧光信号的变化，绘制成不同形状的曲线。Real-time：是在PCR过程中采集荧光信号。（三）.两者的应用HRM：筛查未知突变和针对已知位点进行基因分型。基因分型的方法为非标记探针法和小片段法。Real-time：定量及基因分型。基因分型的方法是：Taqman探针，水解探针等。（四）.基因分型方法的费

3、用HRM基因分型方法的费用远低于Taqman探针和水解探针。（五）.两者所用的染料HRM：LCGreen饱和染料，能与DNA双链的碱基紧密结合，不抑制PCR反应，在PCR反应过程中是过饱和的状态。Real-time：SYBRGreen不饱和染料，不能与DNA双链的碱基紧密结合，浓度高时会抑制PCR反应，只能少量加入。广州誉维生物科技仪器有限公司上传