利用Sepine全自动固相萃取仪.doc

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1、利用SepLine全自动固相萃取仪测定食用油中的黄曲霉毒素北京莱伯泰科仪器股份有限公司前言：黄曲霉毒素对人和动物健康具有极大的危害，其中以黄曲霉毒素B1毒性最大，属特剧毒的毒物范围。引起人的中毒主要是损害肝脏，发生肝炎肝硬化，肝坏死等，急性中毒严重者会出现水肿昏迷，以至抽搐而死。黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质，主要诱使动物发生肝癌，也能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的癌症。本文建立了SepLine-S4全自动固相萃取仪测定食用油中的黄曲霉毒素B1的方法。系统的密闭性及溶剂回收功能，可保护操作人员免

2、受有毒有害物质的危害。同时降低了实验室工作量，提高了工作效率，保证结果的平行性和准确性，具有较高的回收率。1.实验部分：1.1仪器与试剂SepLine-S4全自动固相萃取仪（莱伯泰科有限公司，美国）；ACQUITYUPLC超高效液相色谱仪，配备荧光(FLR)检测器（沃特世，美国）；黄曲霉毒素B1标准溶液，浓度2.0μg/ml，溶于苯-乙腈（98:2）溶液；甲醇（色谱纯），超纯水；AflatoxinB1Columns(1ml)免疫亲和柱（Beacon，美国）。1.2标准物质的处理1.2.1标准储备液：移取1.5ml黄曲霉

3、毒素B1标准溶液，用甲醇定容在10ml容量瓶中，配置成300ng/ml的标准储备液，于4℃冰箱中避光保存。1.2.2标准使用液：移取标准储备液0.2ml，用甲醇-水（1:1）溶液定容在10mL容量瓶中，配置成6ng/ml的标准使用液，现配现用。1.3样品的处理1.3.1样品的提取选取市售的菜籽油，香油各一份。另有已知含黄曲霉毒素B1的花生油一份（含量已知）。称取5g食用油于50ml离心管中，加入25ml甲醇-水（7:3）溶液，涡旋震荡约1min，待震荡均匀后超声提取10min。将提取液通过滤纸过滤，吸取5ml滤液至Se

4、pLine进样瓶，再加入10ml的水，混合均匀等待净化上样。1.3.2加标样品的提取同样称取1.3.1中选用的菜籽油及香油5g，向离心管中加入1ml黄曲霉毒素B1的标准使用液(加标标准为1.2ng/g)，之后的提取过程与1.3.1完全一致。1.3.3样品的净化将AflatoxinB1免疫亲和柱的两端盖子去掉，倾倒出里面的保护液，放入SepLine萃取柱架中。注意随用随放，不可提前倒掉保护液使柱子干掉。固相萃取方法编辑如下：步骤溶剂体积(ml）流速(ml/min)干燥时间(sec)是否收集上样Sample12.01.00

5、.0N淋洗甲醇-水（3:7）2.01.00.0N淋洗水10.01.030.0N洗脱甲醇1.01.010.0Y洗脱水1.01.060.0Y经SepLine固相萃取仪净化后的样品，再经过滤膜过滤，待检测。1.4UPLC检测条件色谱柱：C18(50mm*2.1mm1.7μm)；柱温：35℃；流动相：甲醇-水（1:1）流速：0.5ml/min；FLR检测器激发波长：360nm；发射波长：440nm；进样量：5μL。1.结果与讨论2.1黄曲霉毒素B1标准使用液（6ng/ml）的液相色谱图1.2菜籽油样品色谱图未检出1.3菜籽油加

6、标样品色谱图1.4香油样品色谱图未检出1.5香油加标样品色谱图1.6已知黄曲霉毒素B1含量的花生油样品色谱图2.7计算菜籽油和香油样品的加标回收率及相对偏差，回收率均在86.88%～102.08%之间，RSD均在5%以下，具体见下表：样品黄曲霉毒素B1的加标回收率（%）标准偏差一二三平均菜籽油97.91102.0895.2198.403.52%香油95.0086.8890.2190.704.50%已知黄曲霉毒素B1含量的花生油检测结果为：样品黄曲霉毒素B1的浓度（ng/g）已知含量(ng/g)偏差一二三平均花生油22.

7、7423.1722.8222.9123.000.39%结论：本方法采用SepLine全自动固相萃取仪，利用AflatoxinB1免疫亲和柱对菜籽油、香油及花生油进行提取净化，采用配备荧光检测器的UPLC检测黄曲霉毒素B1，平均回收率达到90%以上，RSD均小于5%。实验过程自动化程度高，平行性好，结果数据理想，且能最大限度的保护操作人员免受有毒有害物质的危害，能够完全满足食用油中黄曲霉毒素的检测要求。参考文献：1.GB/T18979-2003食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法2.GB500

8、9.24-2010食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定3.GB/T5009.23-2006食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定撰稿人：康锐