gxkAAA2.2.1动物细胞培养和核移植技术.ppt

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1、2.2动物细胞工程生产单克隆抗体等动物细胞工程常用的技术动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合是其他动物细胞工程技术的基础。一.动物细胞培养如何进行细胞培养?2.2.1动物细胞培养和核移植技术从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。(一)概念阅读P44-P45页回答问题问题1：试说动物细胞培养大致过程、原理(二)动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的器官、组织细胞悬液10-50代细胞剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶处理分瓶培养原代培养动物细胞培养不能最终培养成生物体细胞增殖缓慢，核

2、型可能变化贴壁生长接触抑制10代以内，保持正常二倍体核型传代培养单个细胞培养液原理：有丝分裂问题4：为什么用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理？问题2：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。问题3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的营养容易供应，其代谢废物容易排出动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。问题5：为什么用胰

3、蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。问题6：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。当原代培养的细胞处于接触抑制后,用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程）②传代培养①原代培养定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。强调一：

4、原代培养与传代培养细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养（一般）传代培养原代培养和传代培养、细胞株和细胞系（了解）▲细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。▲细胞系：传代50代以后，部分细胞遗传物质发生了改变，能无限增殖，获得不死性，叫细胞系。强调二：细胞贴壁过程■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。强调三：接触抑制多

5、细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？P46讨论充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。）适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境(三)动物细胞培养的条件P461、无菌、无毒环境（无菌处理和添加抗生素目的？更换培养液的好处？）2、营养:与体内相同，液体合成培养基：糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。3、温度和PH4、气体环境9

6、5%空气、5%CO2--维持培养液PH适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等P47最上面1、大规模的生产生物制品。2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。3、检测判断物质的毒性。4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于等，为及其他疾病提供理论依据。(四)动物细胞培养技术的

7、应用筛选抗癌药物治疗和预防癌症植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的全能性细胞增殖培养基性质固体培养基液体培养基培养基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖动物血清培养结果植物体细胞株、细胞系培养目的快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白我收获了什么？背诵1、动物细胞培养的过程、注意问题2、动物细胞培养的条件、注意问题3、动物细胞培养和植物组织培养的比较相互接触接触抑制单层胰蛋白酶衰老或死亡不死性降低减少活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入细胞，故不染色。中低温新陈代谢酶抗原二.动物细胞核

8、移植技术和克隆动物将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）分类胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度高，恢复全能性不容易(一)、动物细胞核