结膜印迹细胞学.ppt

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1、结膜印迹细胞学陈辉美国DEANAMCGEE眼科研究所博士后四川省人民医院眼科副主任医师.原理方法CIC的结果判定标准CIC的临床意义.原理由于在各种致病因素（如：vita缺乏，感染，过敏损伤等）的影响下，眼表细胞（结膜、角膜上皮、杯状细胞）在细胞间连接和细胞的形态、细胞的炎性标志的表达等方面将发生相应改变，这就为对眼表疾病的检测提供了病理学基础，传统的思维是对眼表进行刮片等侵入性方式作病理检查，但其敏感性、特异性均不令人狻Ｗ1977年，Egbert在眼科使用醋酸纤维膜（AcetateCellulose）以来，结膜印迹细胞学（ConjunctibaiImpressionCytology）得以

2、迅速发展。①.原理由于醋酸纤维膜为惰性物质，不与组织反应，无毒性，但具有粘附性，使其成为一种对眼表疾病进行非侵入性病检的理想工具，然后将所有取下的标本与传统的染色、免疫荧光、过氧化物酶染色、电泳等技术相结合，使眼科工作者能够对相关疾病作出早期诊断、治疗、预防。②.方法（一）传统细胞学检查：（二）免疫过氧化物酶染色：（三）免疫荧光染色：.目前，传统的细胞学染色方法甚多，染色原理基本相同，现仅简介其中的一种细胞学染色方法：1，用醋酸纤维膜印取结膜、角膜细胞、分泌物并固定。2，按序使用过碘酸、Shiff’s试剂、Mayer’s苏木精、95%乙醇、100%乙醇进行细胞染色。（一）传统细胞学检查：①.

3、（一）传统细胞学检查：3，使用透明液（10%乙醇：冰醋酸=7:3体积比）对纤维膜进行透明。4，载片镜检。②.（二）免疫过氧化物酶染色：1，用纤维膜印取标本并固定。2，以磷酸缓冲盐为浴液，将标本先后置于抗体浴液（免抗HSV-1抗体，鼠抗VZX抗体）和商业用过氧化物酶—抗过氧化物酶试剂盒中培育。3，镜检。.（三）免疫荧光染色：1，用纤维膜印取标本。2，将标本先后置于第一抗体（鼠抗-VZX抗体）和第二抗体（FITC标记的山羊抗鼠IgG抗体中。3，荧光显微镜下镜检。4，相对应，以HLADR的单克隆抗体，IgE受体的单克隆抗体为第一抗体，以fluroresccinisothlecyanate标记的抗鼠

4、免疫球蛋白抗血清为第二抗体，可检测细胞炎性表达物。.CIC的结果判定标准一、细胞学评价：二、免疫过氧化物酶染色（+）：三、免疫荧光学评价：.一、细胞学评价1、评价内容:2、Tseng的六级分类标准:.1、评价内容(1)视野（1-3个）中杯状细胞存在与否及密度。(2)上皮细胞核形态改变情况。(3)上皮细胞核浆(N/C)比值。(4)胞浆染色后颜色变化情况。.2、Tseng的六级分类标准:0级：为正常细胞，上皮大小基本一致，胞浆呈蓝绿色，上皮细胞散在中等量杯状细胞，N/C=1:1但需注意杯状细胞密度随取材部位不同而存在生理分布差异。（高-）低：鼻侧睑结膜>颞侧>穹隆>角巩膜缘)Ⅰ级：杯状细胞开始减

5、小，但无角化，杯状细胞密度下降，结膜上皮细胞轻度扩大，胞浆仍呈蓝绿色，N/C=1/2～1/3.Ⅱ级：杯状细胞全部丧失，但无角化，所有结膜上皮细胞均扩大变扁，胞浆蓝绿色或粉红色，N/C=1/4.①.2、Tseng的六级分类标准:Ⅲ级：早期轻度角化。所有上皮细胞胞浆均呈粉红色，上皮明显角化，部分胞浆内可见角蛋白，N/C=1/6.Ⅳ级：中度角化，除上述Ⅲ级改变外，许多细胞内见大量堆积的角蛋白及角质透明蛋白颗粒，胞核固缩或崩解成碎片。Ⅴ级：严重角化，上皮胞浆浓缩，可见大量角蛋白、胞核固缩或崩解成碎片。②.三、免疫荧光学评价：1，正常人：针对Ⅱ类抗原HLADR和IgE受体CD23的免疫细胞学为阴性，但

6、少数人孤立的树突细胞和抗-HLADR单克隆抗体强反应，但不和抗CD23单克隆抗体反应，有<10%的人的标本对抗-HLADR抗体和/或抗CD23抗体产生小部分细胞弱反应。2，慢性结膜炎：在大部分结膜炎中都和单克隆抗体强烈反应。在大部分标本中，两种抗体皆反应，但HLADR阳性细胞反应更常见，在应用激素的患者因免疫抑制作用，标本可呈阴性。①.三、免疫荧光学评价：3，泪液缺陷患者：24名临床干燥角化异物患者两种抗体(一).2名Sjogren’sSyndrome患者HLADR(+)(90-10%的结膜细胞)：IgE受体(一)，（<10%结膜细胞阳性Stevens-JohnsenSyndrome患者HL

7、ADR(+),IgE受体（+）（95%的结膜细胞阳性）。8个标本泪液缺陷者对HLADR,IgE受体示若阳性。4，在HSV,VZV,腺病毒感染者，免疫荧光99.5～100%阳性，具有高度特异性、敏感性。②.CIC的临床意义目前运用CIC对眼表各种疾病的检测结果显示其异常改变如下：1，VitA缺乏病：CIC分级多在3-4级，该法敏感特异，而传统的VitA缺乏主要依靠血清测定VitA含量，繁琐、昂贵，难以广泛开展，