ifu-12tab检测方法

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1、果汁中环脂芽孢腐败菌的检测A.前言自从20世纪80年代发现嗜酸耐热芽胞菌会使果汁酸败以来，环脂芽孢杆菌种便成为果汁工业界可使食品败坏的主要生物体。腐败一般表现为风味的丧失和臭味的产生（愈疮木酚和苯酚盐等化合物生成）。此类事件对经济影响较大，但迄今为止，还未发现食用含有环脂芽孢杆菌的果汁或其它食品对人类健康造成危险。果汁产品中的环脂芽孢杆菌较难控制因为其芽孢在巴氏杀菌温度下仍可存活，并在加工后适宜条件下可继续生长繁殖。环脂芽孢腐败菌群生长于pH2.5～6，20℃以上，其芽孢在浓缩果汁和类似环境下可存活很长时间，而生长繁殖却需要更好的稀释环境。A.环脂芽孢杆菌是果汁和类似

2、产品腐败的最常见菌种，而其它菌种也可产生腐败，特别是低果汁含量或富含矿物质的产品。工业界面临的关注和争论是原料中环脂芽孢杆菌种的重要性,产品中不同菌种行为，合适控制方法的必要性，可检测出不同种环脂芽孢杆菌甚至其它耐热耐酸菌的各种方法。IFU方法目录揭示了工业界和各研究机构之间检测方法的巨大差异。因此IFU微生物工作组开始研究一种国际认可的环脂芽孢腐败菌检测方法以便制定微生物标准和规范。这种方法就是用来检测果汁中环脂芽孢腐败菌的IFU－方法12。本方法是IFU方法12第一版。B．原则1.环脂芽孢杆菌的数量较少因此就需要过滤和富集等灵敏技术来检测其在原料和终产品中的含量2

3、.环脂芽孢杆菌可在产品和原料中形成存活良好的芽孢3.一般来说热振是降低环脂芽孢杆菌芽孢存活和繁殖的必要过程，未经热振处理的检测会使值偏小。4.环脂芽孢杆菌需要在酸化环境（肉汤和琼脂）下生长。目前已知的各类环脂芽孢杆菌都可在YSG和BAT培养基上生长。K板（45℃培养时），主要生长A.耐热耐酸菌，也有其它菌类的限量生长如A.嗜酸菌。因此K板可用来检测A.耐热耐酸菌种。这些培养基的制备说明见附录1。5.假定意义上环脂芽胞杆菌的确认需要证明其在pH＜3.8时可产生芽孢，并且在pH值为中性时不能生长。1.现知的产生愈创木酚味的环脂芽孢杆菌在过氧化酶检测中呈阳性并在低于65℃生

4、长。在65℃或65℃以上生长的环脂芽孢杆菌菌种不会引起果汁酸败。2.由于芽孢可在酒精中存活，所以检测环脂芽孢杆菌时不推荐使用酒精浸渍或灼烧取样工具、接种环、平皿和容器。在此类分析检测中只能使用高温灭菌或类似高压灭菌的用具。3.有三种检测方法可供选用：方法的选择根据样品组成和加工后时间·用方法C1来检测原料（浓缩汁、糖浆、茶等），在这些材料中环脂芽孢杆菌以芽孢的形式存在。在直接平镀（可选择），过滤或富集后热振·用方法C2测定终产品（果汁、饮料、酱油、和其他可直接饮用品）直接在（热）加工后取样，不需再进行热振，只需预培养。·用方法C3测定市场终产品。样品的预培养可选择进行

5、，热振也是一样。若怀疑有腐败物，并且直接平镀后未发现环脂芽孢杆菌，建议进行热振和富集。·对于加工水和类似样品，按照C1.3和C1.5热振后过滤样品（未稀释）。如果样品不可过滤，按照C1.3和C1.6热振后在YSG和BAT肉汤富集培养。C.方法1.浓缩果汁和其他原料的检测程序1.1取样—无菌取样，使用合适的灭菌工具和容器—样品必须具有代表性，最少10克1.2样品预处理—把样品用灭菌蒸馏水、YSG肉汤或BAT肉汤以1：10的比例稀释，并完全搅匀注：检测浓缩汁时一般选用灭菌蒸馏水，它可以提供和终产品相似的环境。检测糖水等时需要外加氮源和碳源来支持微生物生长，YSG和BAT肉

6、汤不但可以提供这些营养成分，还会提供大多数果汁中含有的矿物质。1.3热振—将稀释后的样品在80℃±1℃的水浴中热振10分钟，并确保水面高于样品。样品温度上升至79-80℃所用时间不能超过5分钟。热振后，取出样品，并冷却至40-45℃。在冷却水中可以加冰。注：热振处理的目的是激活细菌芽孢，抑制植物细胞。也可见IFU方法6“嗜温&耐热芽孢菌计数”1.4过滤（可选用）—如果稀释加热的果汁可以过滤，则用0.45微米孔径的膜过滤。通过这一过程可以数出菌落数，并为1cfu/100ml的稀释样品或1cuf/10g的原样提供检测限值。准备稀释样品和热处理样品各100ml和两个滤膜。将

7、这两种溶液分别过滤培养，用20ml的溶液（如：无菌蒸馏水）冲洗过滤器。将第一个滤膜放到K板上，将第二个滤膜放到YSG或BAT板—B7中的注释讲解了如何使用酒精浸渍和烧灼的镊子以确保滤膜下无气泡存在—在A.耐热耐酸菌和A.嗜酸菌.的培养基上划线1.1富集建议将不能过滤的样品进行富集培养，即使样品已经过平镀检测。在45±1℃培养剩下的热处理样品（大概100ml）。1.2直接平镀（可选用）—使用平板技术，将0.1ml的热振样品直接涂到K板，和YSG或BAT板上培养（附录1）。—在A.耐热耐酸菌和A.嗜酸菌.的培养基上划线注：这个检测的检测限值是100个菌落