动物细胞工程—动物细胞与组织培养.ppt

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1、动物细胞工程—动物细胞与组织培养烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，自身的健康皮肤很有限，使用他人的皮肤来源不足，而且会产生排异反应。怎样才能获得大量的自身健康细胞呢？许多动物的细胞能分泌蛋白质，如抗体、细胞因子等，但是单个细胞产生的蛋白质量很少，怎样才能获得大量的分泌蛋白呢？1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？2、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？3、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？4、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？5、胰蛋白酶的作用是什么呢？成块的组织细胞靠在一起,

2、彼此限制了细胞的生长和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质思考题6、细胞间的物质是什么成分呢？没有有8、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？9、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？能注意时间的控制胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛思考题不能，因为两的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近7、能不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液10代细

3、胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液（分解弹性纤维蛋白）原代培养胰蛋白酶剪碎过程：细胞株细胞系动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。遗传物质未改变遗传物质已改变10代以内，保持正常二倍体核型细胞增殖缓慢，核型可能变化培养器皿小常识1、贴壁生长指大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长。要求细胞培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒，易于贴附。2、接触抑制指贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停止分裂增殖，逐渐走向死亡。要求传代培养细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细

4、胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。解答概念原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。（一般繁殖到一定代数后停止生长，需要重新更换培养基）传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代

5、培养。解答概念动物胚胎或幼龄动物的组织、器官剪碎组织单个细胞细胞悬液10代细胞细胞株细胞系细胞增值无限传代培养液一、细胞培养的基本过程胰蛋白酶原代培养传代培养50代细胞动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液10代细胞50细胞剪碎胰蛋白酶洗涤、稀释、分离原代培养用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。动物细胞培养不能最终培养成生物体

6、细胞增殖缓慢，核型可能变化动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。贴壁生长接触抑制10代以内，保持正常二倍体核型传代培养1、无菌、无毒的环境二、细胞培养的基本条件添加一定量的抗生素定期更换培养液??防止培养过程中污染防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害2、营养物质葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核苷酸促生长因子动物血清3、温度和PH哺乳动物多为36.5±0.5度,多数细胞生存的最适pH为7.2～7.44、气体环境O2和CO2（95%空气和5%CO2）天然成分，补充合成培养基中缺乏的物质可保

7、证细胞顺利地生长增殖CO2可维持培养基的pHO2:细胞代谢所必须合成培养基合成培养基成分已知，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。天然培养基直接采用取自动物体液或从组织中提取的成分作培养液，主要有血清、组织提取液、鸡胚汁等。使用最普遍的天然培养基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及其多种活性物质。与合成培养基合用，能使细胞顺利增殖生长。无血

8、清培养基动物血清成分复杂，各种生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效，但后期对培养产物的分离