第05章-体内药物分析1.ppt

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1、第五章体内药物分析1概述一、体内药物分析的性质及重要性二、体内药物分析的对象和任务1.分析方法学的研究和完善2.体内药物的测定和研究3.内源性物质的测定和研究2三、体内药物分析的特点——由分析对象的特点所决定：1．干扰物质多2．样品量少、不能重复取样3．被测成分浓度低4．药物浓度监测和药物滥用3体内药物分析采用的生物样品包括各种体液和组织，常用的是血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液、头发、脏器组织、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、粪便等样品。第一节常用体内样品的制备与贮藏一、体内样品的种类、采集和制备4（一）血液1.血样的采集

2、(1)血浆(plasma)的制备(2)血清的制备(3)全血的制备5（二）尿液优点：易得，属非损伤性取样，样品量大；尿中药物浓度高，含有缀合物或代谢物，是研究代谢物结构的首选样品；蛋白含量极低，不需去蛋白处理。缺点：与血药浓度不相关，难以反映药物作用过程；受肾功能、pH影响；难以定时定量取样，易污染；所含成分复杂，已知其中有紫外吸收的化合物就达数十种。尿样测定多用于药物剂量回收、尿清除率研究。6（三）唾液唾液是无损伤性采样，易采集。一些药物的唾液药浓（S）与血浆游离药浓(P)密切相关，因此，在TDM中可利用测定S代替P监测；唾液样品也可用于药代动力学

3、研究。7优点：不受时间和地点的限制，可反复采集，采集时无痛苦、无感染危险；唾液成分比血液、尿液简单，提取方便，有时可直接上样测定；有些唾液中药物浓度可以反映血浆中游离型药物浓度。8缺点：唾液是各腺体分泌的的混合液体，其组成发生经时变动。S/P只有少数药物是恒定值。蛋白结合率较高的药物，药物在唾液中的浓度低。对有些患者（昏迷）不能采集唾液样品。9二、生物样品的贮存与处理（一）冷藏或冷冻采样后除立即分析外，为防止药物发生变化，应：短期保存，可4℃冷藏长期保存，可―20℃冷冻，不要反复冻融。小技巧：按测定时需要的体积分装一支！10（二）有时，还应考

4、虑加入稳定剂：酶抑制剂：一些酯类药物，如普鲁卡因、阿糖胞苷，易受血浆酯酶作用而发生水解，则应在采样后立即加入酶抑制剂如氟化钠等。抗氧化剂：一些易氧化的药物，可加入维生素C或其它抗氧化剂。如血浆中儿茶酚类药物常规保存仅4周，若加入适量VC，则能保存10周。11第二节生物样品的预处理与制备30%以上工作和费用用在样品前处理上12（一）将药物从缀合物（尿）或结合物中释放出来，以测定药物的总浓度（二）将微量药物从复杂的介质中纯化、富集出来（三）防止分析仪器的污染，提高测定灵敏度和选择性等一、生物样品预处理的目的13（一）经有机破坏的方法1.湿法破坏硝酸-高

5、氯酸法；电热消化器法；电热板消化法；烘箱消化法。2.干法破坏高温电阻炉灰化法；低温等离子灰化法3.氧瓶燃烧法二、生物样品的预处理技术以上方法将有机物破坏，只能进行元素分析14（二）去除蛋白质目的：去除蛋白质可使结合型的药物释放出来，以便测定药物的总浓度；去除蛋白质也可预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成，以及可以保护仪器性能，延长使用期限15去除蛋白质有以下几种方法1.溶剂沉淀法---加入与水相混溶的有机溶剂操作简单，快速，精密度好常用，特别在LC-MS法中√乙腈∶血浆=1.5∶1，99.4%蛋白沉淀，颗粒大，易离心除去甲醇∶血浆=3.0∶1

6、，98.9%蛋白沉淀，颗粒小，不易离心除去2.加入中性盐常用饱和硫酸铵、硫酸钠163.加入强酸10%三氯醋酸、6%高氯酸4.加入含锌盐及铜盐的沉淀剂5.超滤法蛋白质大分子不能通过半透膜游离药物6.酶水解法枯草杆菌酶，贵，时间长少用7.加热法少用17（三）分离、纯化与浓集有差别才有可能分离！生物样品含有大量可影响测定的内源性杂质，加上服用的药物、代谢物、同时服用的其他药物，组成一个极其复杂的混合物。如何将微量的药物从如此复杂的混合物中分离出来？181.液-液萃取法（LLE）原理：多数药物是亲脂性的，在适当的有机溶剂中的溶解度大于在水相中的溶解度，而生

7、物样品中的大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质（差别）。因而用有机溶剂萃取一次即可除去大部分杂质，从大量的样品中提取药物经浓集后测定。19采用LLE要考虑的几个问题（1）溶剂的选择与纯度要求纯度AR以上①了解药物与溶剂的化学结构与性质，按相似相溶原则选用②对药物的未电离分子可溶，而对电离形式的分子不溶（光谱分析法）③沸点低、易挥发、浓集④与水不相混溶⑤无毒，不易燃烧⑥不易形成乳化（氯仿易乳化，毒性大）⑦具有较高的化学稳定性和惰性⑧不影响紫外测定表5-1毒性大的尽量不用20（3）水相的PH值主要由药物的pKa决定！（丙戊酸的pKa4.95）（2）有机

8、溶剂相和水相的体积比1∶1或2∶1由实际情况决定，文献中有的10∶1以上生物样品一般多在碱性下提取！21由于血药浓度较低，