elisa自动化检验影响因素探析

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1、ELISA自动化检验影响因素探析　　进入21世纪以后，我国血液ELISA检验逐步由手工操作过渡为更方便、准确的自动化仪器检测。但在血液ELISA自动化检测过程中，如果一些细微之处注意不到就可能造成假阳性、假阴性的产生，影响实验结果的准确性。作者根据实际工作经验就ELISA试验检测结果出现偏差的常见原因进行总结分析，以确保结果的准确，提高血液检测质量。1人员与环境1.1操作人员素质自动化仪器检测操作人员应具备扎实、过硬的血液ELISA检验基础知识和操作技能，对计算机、机械、电子与光电技术和仪器的工作原理、程序有一定的了解，以便出现问题时及时应对。1.2熟读全自动仪器的说明书

2、彻底了解仪器的工作原理和使用注意事项，仪器和用户软件的使用方法、仪器的维护程序与方法、使用中可能出现的故障及可能的原因等。1.3室温保证实验室需配备空调、暖气、加湿器等设备，保证室温在规定的范围内，每天测量并记录室内温湿度，以防过冷或过热造成仪器报警不运行。2血液标本的处理2.1ELISA检验多用血清（血浆）标本，4标本的处理直接影响仪器的运行和检测结果，应控制离心转速和离心时间，使血清（血浆）标本离心分离彻底。2.2血液标本离心后，应检查标本的离心情况，防止血凝块、血细胞、纤维蛋白悬浮在血清（血浆）中，避免全自动加样器向酶标板微孔中加入上述物质，造成洗板头的吸液针堵塞而

3、出现假阳性结果。2.3不能立即检测的血液标本放在2～8℃冰箱储存，最好使用可监控报警的专用冰箱，以防温度过高或过低对血液标本造成影响。3检验试剂的准备3.1查看试剂应检查试剂的包装是否破损，污染、潮湿；试剂是否浑浊、变色；试剂是否在有效期。遇到这些情况均应重新更换新的试剂。3.2试剂平衡取出试剂盒中的酶标板和各组分，在室温平衡30min后，再开启酶标板和各组分的包装，开始使用。试剂是否平衡、平衡时间是否足够将直接影响试剂对弱阳性标本的检出。3.3酶标板检查如果酶标板框架不规整、微孔条不平整，微孔内有塑料屑、泡沫屑等异物，将影响洗板，导致出现假阳性结果。3.4试剂盒清洗全自

4、动仪器使用的试剂盒应每周用刷子刷洗干净，蒸4馏水冲洗后晾干备用。阴阳对照及质控品也要及时更换，以防时间过久影响实验结果。4标本加样4.1自动化仪器使用的一次性加样针要把针盒和一次性针放置到位，要注意检查一次性针是否变形或不通。4.2注意观察加样针进入酶标板微孔的深度和分配速度，保证加样时液体不溅出、不挂珠，确保加样准确。4.3加样后，及时检查酶标板的加样情况，查看微孔中有无血细胞、血凝块、纤维蛋白；标本量是否足够；应变色的微孔是否都已变色。如有异常，应手工处理。5酶标板洗板5.1各厂家的洗液是根据各自试剂的条件配制的，因此采用不配套的洗液常会得到不正常的反应结果，包括本底

5、升高，所以不同厂家的洗液不能混用。5.2洗液应按规定的倍数稀释使用。试剂盒提供的洗液是浓缩的，过多稀释洗液，会影响洗液的效果，而使反应的本底升高。反之造成假阴性。5.3稀释洗液的水应该是新鲜的蒸馏水，如果存放时间过长或受到灰尘等污染，水中含钙镁离子增多使实验本底增高，灰尘等异物容易堵塞洗板针孔造成花板。5.4洗板时，洗液应注满每孔，如果加入的洗液液量不够，极易产生高值阴性和假阳性。不同试剂厂家的酶标板孔规格不一样，4洗板时一定要选择配套的板模式进行洗板，以保证洗板效果。5.5严格按照说明书规定的次数，浸泡时间进行洗板。如果次数少于规定要求，没有按设洗板浸泡时间，会使孔内多

6、余的抗原（抗体）或酶结合物不能彻底去除，引起本底升高和假阳性。优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA试验检测结果准确可靠的必要条件。实际操作中，除了选择的优良试剂、保证仪器设备的正常运转外，必须严格执行试剂操作说明，认真做好ELISA实验的每一步，掌握影响实验检测结果的各类因素以及解决办法，做好仪器设备的日常维护保养工作。必须以严谨的工作作风对待每一份检测标本，才能保证检测质量和血液产品的安全。4