实验六肥达氏反应(胡荣)(精).ppt

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1、肥达反应（试管凝集试验）主讲：胡荣实验六一、原理用已知的标准诊断菌液【伤寒杆菌：菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原；副伤寒甲、乙、丙鞭毛（H）抗原共5种】与受检血清作试管凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价，以协助伤寒、副伤寒疾病的诊断。二、器材及试剂标准诊断菌液（5种抗原：10ml/瓶）、生理盐水（N.S）、待检血清（兔血清）、试管、试管架、加样枪或移液管（5mL、2mL、0.5mL每组3支）、一次性塑料滴管等。三、实验方法1.冰箱中取出诊断菌液平衡至室温。2.将待检血清作1：20、1：40、…..1：1280（

2、每管0.5ml，每个稀释倍数5管）稀释，对照管加N.S0.5ml,然后逐管加入混匀后诊断菌液2d，充分振荡混匀，标记（时间、班级、组号），35-37°C放置16-20h观察结果。（配液管：0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL:1：20）3.5/6个同学一组，第二天观察结果。0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL:1：20各管0.5ml余2.5ml2.5mlN.SOHABC1:205.0mL:1：40各管0.5ml1:40余2.5ml2.5mlN.S...1:801:1601:3201:6401:1

3、280四、凝集结果判断（上清液、沉淀）“＋＋＋＋”：强，完全凝集，液体澄清，轻摇大片凝集块。“＋＋＋”：大部分凝集，液体轻度浑浊，凝集块小。“＋＋”：中强，部分凝集，液体半澄清，凝集块颗粒状。“＋”：弱，少量凝集，液体浑浊。“－”：不凝集，液体浑浊，和对照相同。+++++++++五、效价判断能出现明显凝集（++）的血清最高稀释度。例：测定某病人“O”凝集效价结果如下：1:201:401:801:1601:3201:6401:12804+3+3+2+2++-六、结果报告待测血清抗“O”效价；抗“H”效价；抗“A”效价；抗

4、“B”效价；抗“C”效价；七、临床意义1.正常值：正常人血清中可能有低效价的抗体存在，其值高低存在地区差异，一般伤寒沙门菌“O”≥1:80,“H”≥1:160,副伤寒沙门菌“H”≥1:80，有临床意义；或者进行疾病早期、中后期两次血清效价比较，后者增高4倍/4倍以上有诊断价值。2.“O”抗体出现早、消失快、主要为IgM类；“H”抗体出现迟、可持续阳性数年，主要为IgG类，O、H凝集效价都超过正常值，意义较大。1）、“O”高“H”不高：感染早期，伤寒沙门菌“O”抗原有交叉反应，建议一周后复查。2）、“H”高“O”不高：疾

5、病晚期、预防接种、非特异性回忆反应。3.伤寒、副伤寒甲、乙有部分共同的O抗原，如O抗体效价增高，只能推断为伤寒类疾病，不能区别伤寒或副伤寒。4.阴性反应：未感染，感染轻，应用有效抗菌药物，接受皮质激素治疗者，患者过于衰弱等。七、注意事项1.应在光亮处先观察管底凝集状态，后轻摇判定结果。2.使用前摇匀菌液，菌液有摇不散的凝集块时不能使用。