薄膜过滤法微生物限度检查操作要点.doc

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1、平安行药业有限公司GMP文件薄膜过滤法微生物限度检查操作要点1.设备、仪器1.1无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室,每个无菌室应有独立的净化空气系统。1.1.1操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级,局部洁净度为100级(或放置同等级净化工作台)。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压,不低于4.9Pa。操作台上备有电子天平,乙醇灯,火柴,乙醇棉球,大、小橡皮乳头等。1.1.2缓冲间缓冲间内应有洗手盆,无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。1.1.3在每次操作前、后,用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然

2、后启动层流净化装置,同时用紫外杀菌灯照射30min。1.1.4无菌室操作台消毒擦拭后,先启动层流净化装置30min,将备妥的营养琼脂平板3个(经30~350C预培养48h,证明无菌落生长),以无菌方式移入操作间,置净化台左、中、右各1个,开盖,暴露30min后将盖盖上。在30~350C培养箱内倒置培养48h,取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。1.2仪器1.2.1恒温培养箱(30~350C)、生化培养箱(23~280C)、电冰箱、蒸汽灭菌器。1.2.2玻璃器皿第3页共8页平安行药业有限公司GMP文件烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管。玻璃器皿用前应洗涤干净,吸管、量筒不挂水滴,无

3、残留抗菌物质。玻璃器皿均应用牛皮纸(或双层报纸)严密包裹置蒸汽灭菌器高压蒸汽121℃灭菌30min,烘干。或于160℃干热灭菌2h,备用。2培养基及其制备方法2.1营养琼脂培养基:取营养琼脂培养基34g,加1000ml蒸馏水,加热溶解,分装,121℃高压灭菌15分钟。2.2玫瑰红钠琼脂培养基:取玫瑰红钠琼脂培养基30.5g,加1000ml蒸馏水,加热溶解,分装,121℃高压灭菌15分钟。2.3胆盐乳糖培养基:取胆盐乳糖培养基36g,加1000ml蒸馏水,加热溶解,分装,121℃高压灭菌15分钟。3稀释剂3.10.9%无菌氯化钠溶液:取氯化钠9.0g,加水溶解使成1000ml,121℃灭菌2

4、0分钟。3.2PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液:取磷酸二氢钾3.56g,磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g,蛋白胨1.0g,加水1000ml,微温溶解,分装,过滤,灭菌。4供试液的制备4.1取供试品10g,加经干热灭菌的5%吐温-800.2ml,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml,边加边振摇使成混悬液,静止5分钟使分层,倾取上清液置离心机中500r/min离心5分钟,取上清液作为供试品溶液。5检查方法采用薄膜过滤法,滤膜孔径为0.45um,直径为50mm。滤膜及滤器在使用前采用121℃高压灭菌30钟。试验过程中,应保持滤膜前后的完整性。将制备好的供试液过滤,然后用1

5、00mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(注意保持供试品溶液覆盖整个滤膜表面)。冲洗后,用镊子第3页共8页平安行药业有限公司GMP文件取出滤膜,菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养。细菌于30~35℃培养48小时,霉菌于23~28℃培养72小时。第3页共8页

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