薄膜过滤法微生物限度检查操作要点.doc

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1、平安行药业有限公司GMP文件薄膜过滤法微生物限度检查操作要点1.设备、仪器1.1无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。1.1.1操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。1.1.2缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和

2、其他杂物。1.1.3在每次操作前、后，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。1.1.4无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～350C预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上。在30～350C培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。1.2仪器1.2.1恒温培养箱（30～350C）

3、、生化培养箱（23～280C）、电冰箱、蒸汽灭菌器。1.2.2玻璃器皿第3页共8页平安行药业有限公司GMP文件烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。玻璃器皿均应用牛皮纸（或双层报纸）严密包裹置蒸汽灭菌器高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干。或于160℃干热灭菌2h，备用。2培养基及其制备方法2.1营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基34g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。2.2玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂

4、培养基30.5g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。2.3胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基36g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。3稀释剂3.10.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟。3.2PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。4供试液的制备4.1取供试品10g，

5、加经干热灭菌的5%吐温-800.2ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml，边加边振摇使成混悬液，静止5分钟使分层，倾取上清液置离心机中500r/min离心5分钟，取上清液作为供试品溶液。5检查方法采用薄膜过滤法，滤膜孔径为0.45um，直径为50mm。滤膜及滤器在使用前采用121℃高压灭菌30钟。试验过程中，应保持滤膜前后的完整性。将制备好的供试液过滤，然后用100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（注意保持供试品溶液覆盖整个滤膜表面）。冲洗后，用镊子第3页共8页平安行药

6、业有限公司GMP文件取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养。细菌于30～35℃培养48小时，霉菌于23～28℃培养72小时。第3页共8页