产品信息和操作指南

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1、产品信息和操作指南HumanPerforin预包被ELISAkitCat#:DKW12-1830-048/DKW12-1830-096本试剂盒专用于科研，而非用于诊断HumanPerforinDKW12-1830目录产品简介……………………………………………………………1知识背景……………………………………………………………1试剂盒提供的试剂…………………………………………………2需要实验者自行准备的试剂与仪器………………………………2注意事项……………………………………………………………3试剂的配制…………………………………………………………5操作过程………………………………………

2、……………………7结果分析……………………………………………………………9试剂盒的保存………………………………………………………9操作步骤一览表……………………………………………………10参考文献……………………………………………………………11ELISA测定中可能会出现的问题及解决方法……………………12预包被ELISA试剂盒系列产品…………………………………151、产品简介：QuickEIATM人PerforinELISA试剂盒是通过酶联免疫吸附技术，体外定量检测人血清、血浆、缓冲液或细胞培养液中的Perforin，可同时检测天然的和重组的Perforin。本试剂盒为预包被板，整

3、个过程孵育时间不超过3hr，洗涤6次。本试剂盒专用于科研，而非用于诊断。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分，若有任何疑问请与达科为生物技术有限公司联系，E-mail：RD@dakewe.com.检测范围：4000-62.5pg/ml灵敏度：40pg/ml重复性：板内、板间变异系数均＜10％。2、知识背景：Perforin又称成孔蛋白(pore-formingprotein，PFP)、溶细胞素(cytolysin)，是一个70kDa的溶细胞蛋白，在NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞的胞浆颗粒里表达，是NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞介导靶细胞溶解的主要效应分子之一（1，2）。-1-1、试剂盒

4、提供的试剂：试剂规格配制Cytokinestandard2/1瓶*干粉状，按瓶上说明操作Biotinylatedantibody2/1瓶*1：50用DilutionbufferR（1×）稀释Streptavidin-HRP2/1瓶*1：100用DilutionbufferR（1×）稀释DilutionbufferR（1×）3/2瓶*即用型Washingbuffer（50×）1瓶1∶50用蒸馏水稀释TMB1瓶即用型Stopsolution1瓶即用型PrecoatedELISAplate8×12或8×6*即用型封板膜2/1张*即用型说明书1份*：96/48Tests2、需要实验者自行准备

5、的试剂与仪器：1．酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2．微量加液器及吸头：P10，P50，P100，P200，P10003．蒸馏水或去离子水4．全新滤纸5．旋涡振荡器和磁力搅拌器-2-1、注意事项：1．试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡20-30min。实验前室温平衡对Washingbuffer（50×）、DilutionbufferR（1×）、PrecoatedELISAplate和TMB有重要意义。2．冻干标准品冰上操作，按照标签说明溶解干粉，充分混匀，按照一次使用量分装，-20℃贮存，避免反复冻融。3．预包被板条使用前，请恢复到室温后再打开外包装袋，实验中不用的板条立

6、即放回包装中，密闭封口，4℃可保存1个月。其余不用试剂应包装好或盖好。4．Washingbuffer（50×）在4℃保存可能有结晶析出，使用前务必使结晶完全溶解后（如加热、平衡温度后混匀等）再配置成Washingbuffer（1×）工作液。5．HRP和检测抗体体积量很小，使用前请高速短暂离心管子，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。6．实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。7．使用前检查试剂盒内各种试剂；试剂稀释、加样和中止反应充分混匀或者摇匀对实验结果尤为重要，最好使用低速频率振荡器或者反应过程中每15分钟手工摇匀一次。8．实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间

7、一致。9．使用洁净的塑料容器盛装洗涤液。-4-1．洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，滤纸上看不到水印。勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。2．TMB对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免金属接触影响结果。有毒，避免用手接触！准备使用的TMB若变为蓝色，表明TMB已经污染，请丢弃。请在终止反应后10min内读取OD值。3．请严格按照说明书标明的时间和温度进行孵育。冬季室内温度偏低，请使用恒温箱或培养箱孵育为好。4．试剂盒在保质期内使用，且不同批号试剂