镉对小鼠肝脏毒性作用探讨

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1、镉对小鼠肝脏毒性作用探讨摘要：目的了解镉对小鼠肝脏的毒性作用，并探讨其对肝脏组织的毒作用机理。方法健康成年清洁级昆明种小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，临用前以生理盐水配制CdCl2溶液，CdCl2染毒剂量分别为0.05、0.1、0.2mg/kg，染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液（10mg/kg体重），对照组注射生理盐水（10mg/kg体重），连续染毒三天，处死，取肝称重并制备肝匀浆，测量其肝脏系数、匀浆蛋白浓度、天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）和超氧化物歧化酶活性（SOD）及肝脏过氧化脂质讲解产物丙二醛（MAD）的活性。结果染毒组小鼠上述各指标与对照

2、组相比均有差异，但无统计学意义。结论尚不能论证镉对肝脏组织有损伤作用。关键词：镉；肝脏；毒性作用；小鼠引言：镉在环境中广泛持久存在,对人和动物造成极大的健康危害。急性镉暴露可损害机体多种靶器官组织。肝脏是镉急性中毒损伤的主要靶器官之一。鼠急性中毒后，镉主要蓄积于肝脏。镉有很强的亲硫性。在肝脏中，镉易与巯基结合而诱导金属硫蛋白生成镉-硫蛋白，因而金属硫蛋白对急性镉中毒有应急保护作用，但若镉在短期内大量转运到肝脏，便导致肝内金属硫蛋白相对不足，不能与镉有效结合而引起肝功能障碍，这可能是镉引起血清AST、ALT活性及MDA升高的原因之一【1】。通过本次实验了解镉对小鼠肝脏

3、的毒作用，并探讨其对肝脏组织的毒作用机理，从而对镉的毒性损害作用做出评价。1、材料与方法1.1实验试剂氯化镉（CdCl2、AR、中国上海新化工厂生产，GB1285-77，批号）、蒸馏水、0.9%生理盐水、蛋白浓度试剂（南京建成）、GOT测试剂盒（南京建成）、GPT测试剂盒（南京建成）、MDA测试剂盒（南京建成）、SOD测试剂盒（南京建成）。1.2实验仪器电子天平（感量0.1g）、SIGMA2K15型冷冻高速离心机、注射器、剪刀、镊子、滤纸、玻璃匀浆器、冰浴容器、水浴箱、量筒、烧杯、试管、移液管、移液枪、VIS-7220N型分光光度计。1.3实验动物健康成年清洁级昆明

4、种小鼠40只，雌雄各半，体重20～27g，由福建医科大学动物实验中心提供。1.4实验方法1.4.1分组与染毒将40只小鼠随机分为4组，临用前以生理盐水配制CdCl2溶液，CdCl2染毒剂量分别为0.05、0.1、0.2mg/kg，染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液（10mg/kg体重），对照组注射生理盐水（10mg/kg体重），每天定时称量体重后染毒，连续染毒三天。1.4.2处死与肝脏提取第4天分别称量小鼠体重后颈椎脱臼法处死，处死后立即取出肝脏并剥离周围脂肪及结缔组织，用生理盐水洗净后用滤纸吸干，称肝重，记录数据并计算脏器系数。1.4.3肝匀浆制备取肝组织0.2g，置于

5、玻璃匀浆器中并加入2ml0.9%生理盐水，在冰水浴下研磨成10%肝匀浆，移至试管中并按小鼠编号分别标号备用。1.4.4蛋白浓度、ALT、AST、MDA及SOD活性测定1.4.4.1取上述所制的肝匀浆用3000r/min离心15分钟，取其所得上清液备用0.1ml与0.9ml0.9%生理盐水混合均匀备用。1.4.4.2蛋白浓度测定：采用Lorry法；ALT、AST测定：GOT、GPT检测试剂盒，比色法；MDA测定：采用硫代巴比妥酸（TBA）法即MDA检测试剂盒，比色法；SOD测定：SOD检测试剂盒，比色法；脏器系数：称重法。1.5计算1.5.1肝匀浆蛋白浓度计算：蛋白质

6、浓度=（测定管-空白管）/（标准管-空白管）×标准管浓度（0.563g/L）1.5.2组织匀浆中总SOD活力计算：定义：每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）。计算公式：组织匀浆中SOD活力（U/mgprot）=｛（对照管吸光度-测定管吸光度）/对照管吸光度｝÷50%×（反应液总体积/取样量（ml））÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml）＊mgprot为毫克蛋白数1.5.3组织中AST、ALT活力计算：组织中AST、ALT活力（U/mgprot）=通过标准曲线得的匀浆活力÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml

7、）1.5.4组织中MDA含量计算：组织中MDA含量（nmol/mgprot）=（测定管OD值-标准空白管OD值）/（标准管OD值-标准空白管OD值）×10(nmol/ml)÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml）1.5.5肝脏系数的计算：肝脏系数=[肝脏重量（g）/体重（g）]×100%1.6实验数据处理与结论建立Excel数据库，分别输入各组实验数据，运用SPSS16.0统计软件,采用方差分析法进行统计处理。表1小鼠染毒前后体重差CdCl2(mg/kg)生理盐水合计0.0500.1000.2001-0.35-1.30-2.60-2.702-0.70-2.70-