甘草中甘草酸含量测定论文

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1、甘草中甘草酸含量测定论文【关键词】甘草甘草为豆科植物甘草(glycyrrhizauralensisfisch)、胀果甘草（glycyrrhizainflatabat）或光果甘草(glycyrrhizaglabral)的干燥根及根茎，始载于《本经》，药用历史悠久。其功能补脾益气、润肺止咳、缓急止痛、清热解毒、缓和药性。主要含有甘草酸及甘草苷类成分，其中甘草酸为现代药理应用研究证实具有抗纤维化、抗炎、抗病毒和保肝解毒及增强免疫功能等作用［1］。目前针对甘草的内在质量控制，主要围绕甘草酸成分进行定性、定量一类的检查。

2、2005版《中国药典》收载了RP-HPLC三元等度洗脱法测定甘草酸的方法，规定甘草酸含量不得低于2%［2］。本实验依托2005版《中国药典》一部甘草酸含量测定（附录VID）项下操作主线，采用RP-HPLC法测定甘草酸的含量，方法简便、快速，重现性好，结果稳定，用于甘草酸的检测专属性强，1仪器与试剂1.1仪器Agilend1100系列液相色谱仪、四元泵、在线真空脱气、DAD检测器、化学工作站、1200型自动进样器。1.2试剂第5页共5页甘草酸单铵盐（monoam0niumglycyrrhitinate）对照品（中

3、国药品生物制品检定所）；甘草(glycyrrhizainflatabat)样品，产地新疆（华东医药股份有限公司）；甲醇（色谱纯）、醋酸铵（分析纯）、冰醋酸（分析纯）、水（双蒸水）。2实验方法与结果2.1色谱条件美国ZORBAXExundC18分析柱（4.6mm×250mm,5μm）为固定相；甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）为流动相；检测波长250nm；流速1ml·min-1；柱温为室温。柱效以甘草酸计，理论塔板数不应低于2000。结果被测成分于7min内即可出完，三元等度洗脱全程为0～

4、20min。记录的色谱图结果见图1，2。2.2对照品溶液的制备精密称取80℃干燥至恒重的甘草酸单铵盐0.1g对照品，置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，使成每ml含有甘草酸单铵盐1mg对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取甘草，研细（过3号筛），置烘箱内80℃干燥至恒重，精密称取0.3g，置100ml量瓶中，加流动相约45ml，超声处理（功率250W，频率20KH2）30min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。2.4测定方法第5页共5页精密吸取

5、对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液色谱图中甘草酸的峰面积（3次平均）外标法计算甘草中甘草酸的含量（%，W/W）。2.5线性关系精密吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml于100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，分别进样10μl，记录峰面积。以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积(A)为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。甘草酸回归方程为Y=3.00029X+1.23099r=0.99989，线性范围0.1033～1.0330μg。2.6精密度试验精密吸取供试品

6、溶液与上述色谱条件下进样10μl，重复5次，以被测成分峰面积分别计算，结果甘草酸RSD=1.21%。2.7稳定性试验精密吸取供试品溶液10μl，分别于0、2、4，6、8h进样，记录峰面积，结果甘草酸RSD=1.45%。(n=5)。2.8重现性试验取同一批次甘草药材按2.3项下提取制备5份供试溶液，分别精密吸取10μl进样，记录峰面积，结果甘草酸RSD=1.32%。2.9回收率测定取已知含量的甘草样品粉末约0.2g，精密称定9份，置10ml的量瓶中，样本中添加1mg/ml甘草酸对照品溶液1ml，按2.3项下操作，

7、进样10μl，依2.4法测定,记录峰面积并计算回收率，甘草酸平均回收率为99.04%RSD=0.79%，结果见表1。表1甘草酸加样回收率实验结果（略）第5页共5页2.10样品测定取6批样品，按2.3项下提取制备，依2.4项方法测定，重复测定3次，结果生药甘草的平均含量为7.85%RSD=0.85%。3讨论3.1洗脱溶剂系统的选择本实验为RP-HPLC三元等度洗脱法。选择甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67：33：1）作为洗脱溶剂，是基于甘草酸对三元等度洗脱系统的适应性的考量。胀果甘草中含有甘草酸、甘草

8、苷等成分，因此只要选择适宜的洗脱溶剂系统，以促使各组分的分配系数较大，达到基线分离的效果。实验证明该方法简单、易行，设备要求相较梯度洗脱为低，早期一类设备都可用于检测，且抗干扰性强，具有专属性特点。3.2关于甘草酸由生药甘草中提取的甘草酸，通常称之天然甘草酸，天然甘草酸存在顺反异构，且以顺式甘草酸含量为高，反式甘草酸含量极低。本实验未能揭示该异构体基线分离，可能与该异构体化学结构相似抑