山东大学电镜技术作业b

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1、电镜技术　作业Ｂ1.　制备过程：制刀→修块→切片→粘片→染色注意事项：选择合适的固定剂、固定条件和固定方法，尽量使固定相保持材料的生理状态图像，避免造成赝像；做好基础显微观察，适当选择材料，准确定位；正确选择刀具，避免划痕等损伤；避免染色过程中的污染。2.超薄切片(薄切片ultrathinsection)是指厚度小于100nm(一般在20-80nm)的切片。薄切片(半薄切片thinsection)厚度0.5-3μm。电镜半薄切片通常用于电镜超薄切片前的定位观察,我们在定位观察时发现,由于切片薄,结构显示清晰,可用于光镜研究,其观察结果优于石蜡切片。3.常规

2、电子染色：以显示细胞中所有结构为目的的染色。用于超微形态结构的观察。常用柠檬酸铅和醋酸双氧铀进行复染色。技术要点：醋酸双氧铀染色、清洗、柠檬酸铅染色、清洗晾干注意事项：柠檬酸铅染色之前保持铜网湿润是减少铅染色中污染的有效方法。4.放射自显影技术(autoradiography)是指用放射性物质标记某种物质，使生物体吸收(放射性示踪radioactivetracing)，或是用放射性同位素间接或直接标记细胞内物质(放射性染色)，观察其静态或动态变化，对细胞物质进行定位、定性和定量研究的方法。免疫电子显微技术(immunoelectronmicroscopy,

3、IEM)就是使抗原与已经标记了电子致密物的抗体结合，在细胞内发生免疫化学专一反应，从超微水平研究抗原的定位、抗体合成过程中免疫球蛋白的分布、抗原-抗体复合物的精细结构和形态、鉴定免疫损伤引起的细胞病理变化等。固定是免疫电镜较关键的一步，免疫电镜中的固定与一般超薄切片中的固定的不同之点在于既考虑保存细胞的超微结构,又要考虑到抗原的失活性问题。