细胞培养综述

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1、..-细胞培养综述摘要：为了模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进展细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。培养出的活细胞具有量大、均一和可重复性的特点，可以通过各种物理、化学、生物等因素进展调控，并且可以通过倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等多样的方法进展研究，已广泛运用在不同科学研究领域。关键词：分化，细胞分型，生长增殖过程，传代一、体内、外细胞的差异和分化1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动

2、态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系[1]。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞一样的根本构造和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开场发生了。-.word.zl-..-虽然体外细胞与机体细胞存有差异，但并未失去研究的意义。且不管其有许多性状仍与体内一样〔如体外培养的心肌细胞仍可博动〕，只从细胞遗传学〔Cyto－gen

3、etics〕的角度看，离体细胞仍带有全套的二倍体基因。细胞在培养中的表现，只不过是相应基因关闭／开启引起的现象，这并非是绝对缺陷。恰恰相反，在培养的细胞中某些特定功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供线索。 2、分化；体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的政变，细胞分化的表现和在体内不同。细胞是否表现分化关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞〔小鼠红白血病细胞〕在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状构造，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为[

4、2]。二、体外培养细胞的分型〔一〕贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞，判断细胞形态时不能接体内组织学标推判定，仅大致分成以下四型：1、成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规那么三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。  2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规那么多角形，中央有圆形核，细胞彼此严密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行

5、动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态[3]。 -.word.zl-..-3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活泼游走或变形运动，方向不规那么。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。4、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。〔二〕悬浮型；见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。三、培养细胞的生长和增殖过程 (一〕在细胞全生存过程中，大致都经历以下三

6、个阶段：1．原代培养〔PrimaryCulture〕期：也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周。此期细胞呈活泼的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态构造和功能活动上相似性大。初代培养细胞多呈二倍体核型；由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很好的实验对象。2．传代期：初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系〔CellLine〕。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系〔DiploidCe

7、llLine〕。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。如不冻存，那么需反复传代以维持细胞的适宜密度，以利于生存。但这样就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停顿，细胞进入第三期。-.word.zl-..-3．衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点〔多发生在传代末或衰退期〕，由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化〔SpontaneousTransformatio

8、n〕。转化的标志之一是细胞可能获得永生性〔Immortality〕或恶性性〔Malignancy〕。细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系〔InfiniteCellLine〕，也称连续细胞系〔ContinuousC