沙门氏菌的检验

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1、.-沙门氏菌的检验食品学院14食品质量与安全1班X文敏柳基炜卫杰恒温紫君201430520115201430520116201430520121201430520122摘要：本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定前言沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一

2、个统称，泛指2000多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界范围内的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。1材料与方法..word.zl-.-1.1实验材料1.1.1仪器设备均质器、三

3、角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度或微量移液器及吸头电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（）；手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，XX申安医疗器械厂1.1.2试剂药品鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI生化鉴定卡1.1.3培养基蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸

4、脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基1.2实验方法1.2.1培养基的制备1.2.1.1培养基的配制步骤蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，煮沸溶解，调节pH，高压灭菌121℃，15min。分装10瓶，每瓶90ml四硫磺酸钠煌绿（TTB）：高压灭菌121℃，15min灭菌冷却后至30℃..word.zl-.-，每100ml基础培养液加碘液2ml，煌绿液1ml1.2.1.2配制培养基的注意事项（1)按照说明书上的用量进行换算，

5、称取准确分量的合成培养基粉末；（2）加热煮沸溶解培养基时，留意锅内水位的变化，水位下降可再添加适量的水，以免水分蒸发过多，导致后面分装不够量；（3）往试管中放小导管时，注意处理气泡。1.2.2沙门氏菌群检测1.2.2.1沙门氏菌检测程序..word.zl-.-..word.zl-.-1沙门氏菌检测操作步骤2.1前增菌称取10g（mL）样品放入盛有90mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置于盛有90mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8

6、h～18h。2.2増菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mLTTB，于42℃±1℃培养18h～24h。同时，另取1mL，转种于10mLSC内，于36℃±1℃培养18h～24h。2.3分离分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个HE琼脂平板。于36℃±1℃分别培养18h～24h（HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表12.4生化试验..word.zl-.-2.4.1三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三

7、糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36℃±1℃培养18h～24h，必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。在三糖铁琼脂内斜面产酸，底层产酸，同时赖氨酸脱羧酶试验阴性的菌株可以排除。其他的反应结果均有沙门氏菌属的可能，同时也均有不是沙门氏菌属的可能。2.4.2系列生化反应试验接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（K）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接

8、种。于36