Restrictive endonuclease及其保护碱基

《Restrictive endonuclease及其保护碱基》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxxRestrictiveendonuclease及其保护碱基【精品文档】引物设计保护碱基表克隆PCR产物的方法之一，是在PCR产物两端设计一定的限制酶切位点，经酶切后克隆至用相同酶切的载体中。但实验证明，大多数限制酶对裸露的酶切位点不能切断。必须在酶切位点旁边加上一个至几个保护碱基，才能使所定的限制酶对其识别位点进行有效切断。有研究者使用了15种限制酶，分别比较了各种限制酶在其酶切位点旁边分别加0、

2、1、2、3个保护碱基后的切断情况。结果显示，基本上所有限制酶，在其酶切位点旁边加上3个以上的保护碱基后，可以对其酶切位点进行有效切断。 一般来讲，在酶切位点前加入两个GC碱基，因为如果保护碱基为AT的话,保护碱基在PCR产物的末端,AT之间只有两个氢键,结合力差,容易在末端产生单链,这样的话限制性内切酶就无法作用。 其实加保护碱基的多少，是具体情况具体讨论，比如HindIII、BamHI等就得有三个保护碱基。少了一个就无法切动。ApaI （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'GGGCC^C3'BamHI（类型：TypeIIrestrictionenz

3、yme ）  识别序列： 5'G^GATCC3'BglII （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'A^GATCT3'EcoRI （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'G^AATTC3'HindIII（类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'A^AGCTT3'KpnI （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'GGTAC^C3'NcoI  （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'C^CATGG3'NdeI  （类型：Ty

4、peIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'CA^TATG3'NheI  （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'G^CTAGC3'NotI  （类型：TypeIIrestrictionenzyme ）  识别序列：5'GC^GGCCGC3'【精品文档】【精品文档】SacI  （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'GAGCT^C3'SalI  （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'G^TCGAC3' SphI  （类型：TypeIIrestrictionenzym

5、e ） 识别序列：5'GCATG^C3'XbaI  （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'T^CTAGA3'XhoI （类型：TypeIIrestrictionenzyme ） 识别序列：5'C^TCGAG3'  【精品文档】【精品文档】 【精品文档】【精品文档】 【精品文档】