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分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学兽医硕士学位论文民乐县牛羊布鲁氏菌病流行情况调查和防控建议InvestigationintotheprevalenceandAnalysisofanti-systemeffectofbrucellabrucellainMinLeCounty宋虹指导教师姓名孙晓林教授（甘肃农业大学兰州730070）学位名称专业硕士专业领域兽医学论文答辩日期2017年12月2日学位授予日期2018年1月答辩委员会主席余四九教授评阅人权富生教授杨琨副教授李勇生高级兽医师年月日 GansuAgriculturalUniversityDisserSATionfortheMasterDegreeinAgricultureInvestigationintotheprevalenceandAnalysisofanti-systemeffectofbrucellabrucellainMinLeCountyCandidate：HongSongAdvisor：Prof：XiaolinSunAcademicDegreeAppliedfor：MasterofVeterinarySpecialty：ClinicalVeterinaryScience 摘要布鲁氏菌病是人兽共患的全身性感染性传染病，对牛羊养殖业健康发展造成巨大威胁并造成经济损失。为了解布鲁氏菌病在民乐县牛羊中的流行情况，并为预防本病提供参考，本研究在2015年5月~2016年6月间，采用国家标准方法，对民乐县牛羊进行抽样检疫，采用走访并发放调查问卷形式，收集2011年~2015年全县布病发生情况，进行了流行病学调查；同时根据民乐县布病的实际情况，分析布病防控工作的现状和存在的问题，并提出了具有针对性的防控措施。流行病学调查结果表明，2011年~2016年民乐县牛羊布病阳性率分别为1.86%、1.98%、2.32%、2.97%、3.63%、3.37%，开始逐年增高，在2015年到达最高后又降低的趋势；从2011年~2016年牛布病平均阳性率为1.24%、1.51%、1.76%、1.93%、2.78%和2.03%，羊的布病平均阳性率为2.26%、2.30%、2.66%、3.52%、4.22%和4.06%，羊布病阳性率普遍高于牛；南丰乡、永固镇牛羊布病阳性率普遍高于其他各乡镇，分别为6.12%、5.91%，其他乡镇在3.08%~3.58%之间；2011年~2016年间规模化养殖场牛羊布病检疫平均阳性率为3.14%，明显高于散养户2.33%。民乐县牛羊布病疫情呈现波动态势，南丰乡、永固镇活畜交易比较频繁，牛羊布病阳性率相对较高；感染动物的品质以绵羊和山羊居多；规模化养殖场阳性率明显高于散养户。布病防控工作存在的主要问题有兽医队伍建设不强、机构体制管理不严、牛羊布病检疫检测标准存在漏洞、检疫监管力度不强和养殖户防控意识淡薄等，根据上述问题，提出加强政府重视、强化动物检疫监督、制定并实施防控方案、依法扑杀阳性病畜、合理注射疫苗、做好工作人员的防护、进一步加强流行病学调查、加大布病防控知识宣传力度和加强消毒灭源等九个方面的拟解决对策，对辖区内牛羊布病进行全面防控。关键词：牛；羊；流行病学调查；布鲁氏菌；民乐县I SummaryBrucellosisisazoonoticinfectiousdiseaseofsystemicinfectiousdiseases,posingatremendousthreattothehealthydevelopmentofcattleandsheepfarmingandcausingeconomiclosses.InordertounderstandtheprevalenceofbrucellosisinMinleCountycattleandsheep,andtoprovidereferenceforthepreventionofthisdisease,thisstudyfromMay2015toJune2016,usingthenationalstandardmethod,Samplingandquarantinewereconductedbymeansofvisitsandquestionnairesdistributedtocollecttheincidenceofbrucellosisintheentirecountyfrom2011to2015andcarryoutepidemiologicalinvestigation.Atthesametime,accordingtotheactualsituationofbrucellosisinMinleCounty,thestatusandexistingproblemsofbrucellosispreventionandcontrolwereanalyzedProblems,andputforwardtargetedpreventionandcontrolmeasures.Theepidemiologicalsurveyresultsshows:Thepositiveratesofcattle,goatandbrucellosisinMinleCountywere1.86%,1.98%,2.32%,2.97%,3.63%and3.37%respectively,andbegantoincreaseyearbyyearfrom2011to2016,Theaverageprevalenceratesofbrucellosisinyear~2016were1.24%,1.51%,1.76%,1.93%,2.78%and2.03%,respectively.Thepositiveratesofbrucellosiswere2.26%,2.30%,2.66%,3.52%and4.22%And4.06%respectively.Thepositiverateofgoat'sbrucellosiswasgenerallyhigherthanthatofcattle.Thepositiveratesofcattle,goatandbrucellosisinNanfengTownshipandYongguTownwere6.12%and5.91%respectively,whilethoseinothertownshipsrangedfrom3.08%to3.58%;Between2011and2016,theaveragepositiverateoflarge-scalebreedingcattleandsheepclothdiseasequarantinewas3.14%,significantlyhigherthanthefree-breedinghouseholds2.33%.Theepidemicsituationofcattle,sheepandmuttoninMinleCountyfluctuated.LivestocktransactionsinNanfengTownandYongguTownwererelativelyfrequent,andthepositiveratesofcattleandsheepclothwererelativelyhigh.Thequalityofinfectedanimalswasmostlyinsheepandgoats.Thepositiverateoflarge-scalefarmsSignificantlyhigherthanthefree-breedinghouseholds.ThemainproblemsintheII preventionandcontrolofbrucellosisaretheweakvetteamconstruction,theunsoundinstitutionalmanagement,theweaknessofthequarantineinspectionstandardsforcattleandsheepbugs,theweaksupervisionandpreventionofquarantine,andtheweakawarenessoffarmersinpreventionandcontrol.Basedontheaboveproblems,Putforwardtostrengthenthegovernmentattachimportancetostrengtheningtheanimalquarantineandsupervision,todevelopandimplementpreventionandcontrolprograms,accordingtothelawcullingofpositivesickanimals,vaccinesreasonable,doagoodjobofstaffprotection,andfurtherstrengthenepidemiologicalinvestigation,increaseknowledgeofclothdiseasepreventionandcontrolEffortsandeffortstostrengthendisinfectionandothersourcesofnineproposedsolutionstotheareaofcattleandsheepclothdiseasepreventionandcontrol.Keywords：Thecows;Thesheeps;Epidemiologicalinvestigation;brucella;MinleCountyIII 外文缩略词表中文名称英文全称，缩略词布鲁氏菌病brucellosis布鲁氏菌Brucella肽聚糖Peptidoglycan，PG脂多糖Lipopolysaccharides，LPS世界卫生组织WorldHealthOrganization，WHOTheFoodandAgricultureOrganizationofthe联合国粮农组织UnitedNations，FAO马耳他型布鲁氏菌Brucellamelitensis流产布鲁氏菌Brucellaabortus猪种布鲁氏菌Brucellasuis沙林鼠种布鲁氏菌Brucellaneotomae犬种布鲁氏菌Brucellacanis绵羊附睾种布鲁氏菌Brucellaovis抗原提呈细胞antigenpresentingcell，APC肿瘤坏死因子-αTumorNecrosisFactor，TNF-α组织相容性复合体-Ⅱmajorhistocompatibilitycomplex，MHC-Ⅱ布氏小体Brucella.containingv811uole，BCV超氧化物岐化酶SuperoxideDismutase,SOD活性氧中间体reactiveoxygenintermediates，ROI外膜蛋白outermembraneproteins，OMP平板凝集试验plateagglutinationtest，PAT虎红平板凝集试验Ross-BengalPlateAgglutinationTest，RBPT试管凝集试验tubeagglutinationtest，SAT酶联免疫吸附试验enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA全乳环状试验milkringtest，MRT聚合酶链式反应polymerasechainreaction，PCR荧光定量PCRQuantiSATiveReal-timePCR肠炎耶尔森氏菌Y.enterocolitica补体结合试验complementfixationtest，CFTIV 目录摘要.............................................................................................................................ISummary.......................................................................................................................II外文缩略词表..............................................................................................................IV第一部分文献综述....................................................................................................1第一章文献综述................................................................................................11布鲁氏菌病研究进展..............................................................................12布鲁氏菌病原学特征................................................................................22.1细菌特性.......................................................................................22.2细菌分类.......................................................................................22.3细菌生长要求...............................................................................22.4细菌抵抗力...................................................................................32.5细菌抗原结构.................................................................................33布鲁氏菌病流行病学特征......................................................................33.1传染源...........................................................................................33.2传播途径.......................................................................................33.3易感动物.......................................................................................43.4人间布病流行病学特征...............................................................44布鲁氏菌病发病机理..............................................................................55细菌毒力因子............................................................................................55.1脂多糖...........................................................................................55.2Ⅳ型分泌系统...............................................................................65.3超氧化物岐化酶...........................................................................65.4BvrS/BvrR双组分调节系统........................................................76布鲁氏菌病临床症状和病理变化..........................................................76.1畜间布病.......................................................................................76.2人间布病.......................................................................................77布鲁氏菌病诊断......................................................................................87.1细菌学诊断方法...........................................................................8V 7.2血清学诊断方法...........................................................................87.3分子生物学技术...........................................................................97.4鉴别诊断.......................................................................................98布鲁氏菌病防制......................................................................................98.1健康动物防控措施.......................................................................98.2病畜防控.....................................................................................109本研究的目的和意义............................................................................10第二部分研究内容..................................................................................................11第二章民乐县牛羊布鲁氏菌病流行病学调查..............................................111材料与方法............................................................................................111.1材料.............................................................................................111.2方法.............................................................................................122结果........................................................................................................142.1虎红平板凝集试验结果.............................................................142.2民乐县2015年~2016年间牛羊布病阳性检出情况..................152.3民乐县2011年~2015年间牛羊布病发病情况........................162.4不同种类家畜布病检疫阳性率比较情况.................................172.5不同乡镇家畜布病阳性检出率比较情况.................................182.6规模化养殖场和散养户牛羊布病阳性检出率.........................193讨论........................................................................................................213.1民乐县牛羊养殖发展现状.........................................................213.2民乐县2015~2016年牛羊布病阳性率分析............................213.3民乐县2011~2016年牛羊布病流检疫情况.............................223.4不同种类家畜布病阳性率.........................................................233.5不同乡镇牛羊布病阳性率.........................................................233.6规模化养殖和散养牛羊布病阳性率.........................................244小结........................................................................................................24第三章民乐县牛羊布鲁氏菌病防控现状和拟解决对策..............................261材料与方法............................................................................................26VI 1.1材料...............................................................................................261.2方法.............................................................................................262民乐县牛羊布病防控现状....................................................................262.1兽医队伍建设现状.....................................................................262.2畜牧兽医机构和体制管理.........................................................272.3牛羊布病检疫检测标准存在漏洞.............................................272.4检疫监管力度不强.....................................................................282.5养殖户意识淡薄.........................................................................283拟解决对策............................................................................................283.1政府高度重视.............................................................................283.2强化动物检疫监督.....................................................................293.3制定牛羊布病防控方案.............................................................293.4依法扑杀检疫阳性动物.............................................................293.5牛羊布病的防控和疫苗选择.....................................................303.6做好相关工作人员的防护工作.................................................313.7进一步加强流行病学调查.........................................................313.8加大宣传力度.............................................................................323.9其他防控措施.............................................................................324小结................................................................................................32第四章结论..................................................................................................33参考文献......................................................................................................................34附表1...........................................................................................................................41致谢..........................................................................................................................43个人简介......................................................................................................................44导师简介......................................................................................................................45独创性声明............................................................................................................…..46学位论文版权认定和使用授权书..............................................................................46VII 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述第一部分文献综述第一章文献综述布鲁氏菌病（brucellosis）是由布鲁氏菌（Brucella）感染人或动物机体后引起的变态反应性人畜共患传染病，又称为“波状热”、“马耳他热”、“地中海[1]弛张热”。目前已成为世界上流行范围广、危害大的疫病之一，人畜感染该病后能够诱发不孕、流产及其他脏器病灶。成年牛羊的感染几率相对比较高，尤其是妊娠母畜感染布鲁氏菌后十分危险，该病是《中华人们共和国动物防疫法》中规定的二类疫病，《病原微生物实验室生物安全管理条例》中将布鲁氏菌列为二类动物病原微生物。目前尚未有效的控制和消灭布病的措施，因此在生产过程中[2,3]做好布病的诊断和综合防治显得尤为重要。1布鲁氏菌病研究进展人类对布鲁氏菌病的研究已有150多年的历史，母畜感染本病后能够引发流产，造成生产性能降低、繁殖障碍，影响畜产品的质量安全，对畜牧业发展和社[4]会公共卫生安全造成严重威胁。有资料显示，世界范围内已有170多个国家或地区的人、畜间存在不同程度的布病流行，每年由布病造成的经济损失高达十亿美元；随着兽医及相关工作者的不懈努力，截至上个世纪90年代初期，包括挪[5,6]威、瑞典等14个国家或地区已经宣布彻底根除了布病。布病的最早报道应追溯至1814年，由Bruce提出“地中海弛张热”疾病，并与当时大范围流行的疾病“疟疾”作了鉴别诊断；1860年Marston对布鲁氏菌[7]病进行了系统的描述，并与伤寒进行了鉴别诊断，且首次提出布鲁氏菌病；1887年有学者从发热的患者脾脏内分离出羊种布鲁氏菌，首次明确本病的病原；为纪[8]念这位英国医生，在1897年人们将本病命名为“布鲁氏菌病”。之后随着对布病病原菌研究的深入，逐渐建立血清学诊断方法，并分离出不同种的布鲁氏菌。我国古代《伤寒论》、《金匮要略》等医书典籍中均提出疑似布病症状的疾病报道；最早于1905年报道重庆发现两例疑似感染布病的患者，之后在1916年福建发现一名确诊为马尔他热的患者，1925年在河南焦作、1932年、1936先后在北京地区报道有29例布病患者，1936年首次在内蒙古地区牛流产的胎儿中分离出两株流产布鲁氏菌，由上述资料可以证实，在建国之前就存在布病发生和1 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述流行的记载。目前，我国布病流行形势与世界流行形势存在共性，呈再度肆虐的状态。在上个世纪九十年代中期，大陆多省及地区人间布病疫情大幅度上升，之后有所降低，但是根据卫生部统计，从2008年开始我国布病的分布呈老疫区重现，小规模疫区增加，疫区范围不断扩大，新发病人、畜数增多、暴发点多、典型病例增加，这对该病的防控造成巨大困难；另外，由于偏远地区的居民缺乏专业的知识，[9]往往出现感染布病不自知，仅当作普通感冒就诊，耽误病情的救治。已经报道的人间布病发生情况数据也仅仅是疾控部门统计的就诊数据，实际感染的人群数[10]据应该更大。近年来随着牛、羊养殖规模的不断扩大，动物检疫工作逐渐不能适应生产需要，畜间布病的疫情有愈演愈烈的趋势，而且该病可从畜间传至人[11,12]间，因此人间布病的发展趋势在一定程度上反应出当地畜间疫情的发展。2布鲁氏菌病原学特征2.1细菌特性布鲁氏菌为小球杆菌，无鞭毛、芽胞，强毒菌株存在菲薄荚膜。从患病动物-机体内分离出的初代菌株呈球状、卵圆状，经传代培养后呈短小杆状。G，吉姆萨染色呈紫红色，使用0.5%沙黄溶液染色加热至出现气泡，水洗后用0.5%孔雀绿或1%美蓝水溶液复染1min，布鲁氏菌在镜下观察呈紫红色，其他细菌则被染成蓝色或绿色；外膜和肽聚糖（Peptidoglycan，PG）结合组成细菌的细胞壁，细[13,14]胞外膜由蛋白质、磷脂层和脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）构成。2.2细菌分类在1985年WHO和FAO布鲁氏菌专家委员会根据细菌对不同宿主的亲嗜性分为六个种，即马耳他型布鲁氏菌（Brucellamelitensis，羊种，1~3生物型），流产布鲁氏菌（Brucellaabortus，牛种，1~7，9生物型），猪种（Brucellasuis，1~5生物型），沙林鼠种（Brucellaneotomae）、犬种（Brucellacanis）、绵羊[15,16]附睾种（Brucellaovis）各1个生物型。目前我国已成功分离到15个生物型，[17]而且以猪、牛、羊三种最为常见，而且羊种布鲁氏菌致病力最强。2.3细菌生长要求布鲁氏菌分离培养时需要较高的营养要求。实验室培养时多使用牛或羊新鲜[18]胎盘+10%兔血清制作的培养基，细菌生长良好；在存在抗生素等不利条件下2 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述培养细菌会导致细菌发生变异，如布鲁氏菌的LPS受损后生长的菌落由S型变为R型，而细胞壁的PG受损时容易形成失去细胞壁或细胞壁不完整的L型细菌，上述变异的菌体会长期存在感染动物的机体内，如果细菌的生存环境改善后极有[19,20]可能恢复原有的生物学特征。光滑型布鲁氏菌在营养丰富的固体培养基上生长呈无色半透明、表面光滑、稍隆起的圆形菌落，菌落呈均质样，中央有时会出现细小的颗粒，随着培养时间延长菌落会呈浑浊状，菌种个体差异、培养的营养状况、培养时间等诸多因素影响会出现菌落大小、颜色的差异；粗糙型布鲁氏菌培养后在固体培养基上呈灰白[21]色或褐色、表面粗糙有粘性、干燥、不透明的菌落。在液体培养基中细菌会均匀浑浊生长，无菌膜，但某些陈旧培养的粗糙型细菌会在管壁出现菌环或管底[22]出现絮状沉淀样物质。2.4细菌抵抗力自然状态下布鲁氏菌具有较强的抵抗力，可在污染的水源、土壤、患病动物分泌物中存在4个月；强光暴晒4h可杀灭细菌，60℃维持30min或70℃维持5min可杀灭细菌，1%石炭酸溶液、2%来苏尔溶液、0.2%漂白粉溶液、0.1%升汞溶液[23]和0.5%乳酸溶液可在5min内杀灭细菌。2.5细菌抗原结构布鲁氏菌外膜蛋白和脂多糖构成特异度较高的复杂抗原结构，其中外膜是在磷脂内嵌入一组特异的蛋白形成外部和细菌细胞内部的屏障，布鲁氏菌的脂多糖一般由类脂、核心多糖和多糖O抗原组成，种型不同的布鲁氏菌毒力、内毒素、[24]氧化代谢均存在不同差异。3布鲁氏菌病流行病学特征3.1传染源目前已知有超过60余种家畜、野生动物都可作为布鲁氏菌的贮存宿主，一[25]般情况下布病流行先是在野生动物或家畜中传播，然后才引起人畜共患。在生产过程中已经发生感染的猪、牛、羊是布鲁氏菌病的主要传染源，豚鼠、小白[26]鼠等啮齿类动物是布鲁氏菌的敏感试验动物，也可成为传染源。3.2传播途径布鲁氏菌可通过机体皮肤、黏膜、消化道等侵入，大多数临床发现感染布病3 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述的人多与饮食习惯、生活习惯以及职业有很大的关系。经皮肤黏膜直接接触感染的人群多为和病畜接触过的饲养、放牧人员，畜牧兽医，畜产品加工人员等，因此我国将布病划定为职业病；一般情况下下述场合容易发生布鲁氏菌接触感染：处理难产流产或正常生产的病畜，牲畜直肠检查或阴道检查，饲养放牧，接触病畜的粪便、尿液等，屠宰病畜、剥皮、切肉、分离内脏，剪毛，挤奶或加工奶制品，采集病畜血液或病理材料，从事布鲁氏菌相关[27]试验操作、制备疫苗、抗血清等生物制品的过程等。经消化道感染是由于饮食被布鲁氏菌感染过的食物或饮食，导致细菌从口腔、食道黏膜进入机体。经呼吸道感染是由于布鲁氏菌污染飞沫、尘埃后被吸入，经呼吸道感染布病的最常见人群为皮毛加工者，其次是布氏杆菌疫苗生产和菌种冻干过程中也容易发生感染，对于畜群来说病畜排出含有细菌的粪便、尿液，对圈舍环境造成污染，[28]在活动过程中尘埃飞扬，容易造成呼吸道感染。3.3易感动物不同种的布鲁氏菌易感动物存在差异，流产布鲁氏菌牛易感，马耳他型布鲁[29]氏菌羊易感，猪种布鲁氏菌猪易感。不同动物的易感性随着性成熟逐渐增加，[30]随着年龄越老而逐渐降低；对于种公畜来说感染率要高于母畜，疫区中幼畜感染率很低，大部分母畜发生感染是头胎流产以后，之后发生流产的几率会降低[31]。3.4人间布病流行病学特征人感染布病存在明显的职业特点，与病畜及产品接触较多的人群最容易感染，如兽医、牧民、皮毛加工者等；人感染布病无明显的性别差异，主要是根据接触病畜的机会，在牧区男性和女性都可从事牧业生产，发病率无明显差异，但是在农区或兼少量牧业的地区，男性从事畜牧生产活动相对较多，具有更高的发病率；各个年龄阶段的人感染布病均有报道，但是一般情况下青壮年发病率要相对于其他年龄阶段高；人间布病可在一年四季每个月都发生，北方牧区羊群布病性流产高峰期2~4月份，而人间布病高发期就集中在4~5月份，对于猪种和牛种流行区人间布病发病无明显的季节特征。4 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述4布鲁氏菌病发病机理从患有布病动物的乳液、精液、胎衣、流产胎儿、粪便中均能检测到布鲁氏菌，根据布病感染的途径可知，健康动物采食被布鲁氏菌污染的饲料、水源可通过消化道感染，其次是直接接触感染或经过受损伤的皮肤发生感染，此外，健康动物与患病动物进行自然交配时也可发生感染。布鲁氏菌进入机体后短短几天可侵入临近部位的淋巴结，被吞噬细胞吞噬后一部分细菌会被杀死，不能被杀死的细菌会在细胞内生长发自，形成原发病灶，这一阶段临床为潜伏期，主要是淋[32]巴源性迁徙阶段；大批量的布鲁氏菌在吞噬细胞内生长繁殖会引起生殖细胞发生破裂，大批细菌会进入血液形成菌血症，这一阶段的病畜会在临床表现为体温升高，经过一段时间后菌血症消失，此时体温降低恢复正常，但是经过长短不等的时间后又发生菌血症，细菌会随着血液传至各个脏器中，经过一定时间的生长繁殖后引发脏器发生病变，此时会有一部分细菌随着粪便、分泌物、尿液排出体外；细菌对绒毛膜上皮细胞有较高的侵蚀性，会在该细胞内增殖后引起胎盘炎，炎症扩散后发生子宫内膜炎，细菌会进入胎衣内，随着羊水侵害胎儿，造成胎儿和母体之间的胎盘松离，引发胎儿营养障碍或胎儿病变，从而临床出现流产的症[33]状。在布氏杆菌侵入机体的各个脏器后，网状内皮系统会因细菌、内毒素等反复刺激敏感性增高，发生变态反应性改变，有研究报道布鲁氏菌病的病机与Ⅰ、~Ⅳ型变态反应有一定的关系，在疾病发展的初期动物体内T细胞、巨噬细胞和体液免疫功能处在正常水平，上述免疫机制共同作用将侵入的细菌清扫干净后病愈，但是如果细菌不能被彻底消灭，细菌、内毒素以及相关代谢产物会不断反复侵入血液，对机体内脏器、功能产生刺激作用，造成T淋巴细胞致敏，之后由于抗原物质的束缚，致敏的T细胞会释放出如巨噬细胞活性因子、趋化因子等淋巴因子，引起以单核细胞浸润为特征的变态反应性炎症，在脏器、组织中形成[34]肉芽肿、纤维组织增生等慢性病变。5细菌毒力因子5.1脂多糖脂多糖是构成布鲁氏菌外膜的主要成分，也是产生内毒素的物质基础，对于S-型布鲁氏菌来说其缺乏O-侧链，因此和R-型细菌相比致病性存在一定的差异。5 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述对于布鲁氏菌的脂多糖来说免疫原性差，感染机体后该物质不能激活机体内的补体系统，作为细菌的毒力因子，研究发现布鲁氏菌菌体的脂多糖成分可抑制巨噬细胞中吞噬体的吞噬作用，通过阻断抗原提呈细胞（antigenpresentingcell，APC）[35]的抗原提呈和干预抗体中和发挥致病作用。有研究将猪种S-型布鲁氏菌和巨噬细胞进行相互作用，发现存在未知受体可将细胞的脂筏通道激活，从而使细菌逸入宿主细胞内，成功的避免了细菌与溶酶体的融合，这个受体被证明就是脂多[36]糖中的O-侧链。而对马耳他型和犬型布鲁氏菌进行研究时，发现即使菌体脂多糖缺失O-侧链，菌株增殖后感染试验动物，仍然能够达到持久的感染状态，由此可以证实，O-侧链能够在布鲁氏菌感染的早期逃避机体溶酶体系统的融合作用，帮助细菌在宿主细胞内建立持久的感染作用。随着对细菌脂多糖成分研究的深入，有学者证实布鲁氏菌的脂多糖的O-侧链成分能够调节肿瘤坏死因子-α（TumorNecrosisFactor，TNF-α）的依赖性来抑制宿主细胞发生凋亡，而且S型细菌还能逃避宿主的免疫监视和抑制免疫激活作用，阻碍APC递呈给组织相容性复合体-Ⅱ（majorhistocompatibilitycomplex，MHC-Ⅱ）类分子，由此可以证实脂多糖不仅有自我防御和逃避宿主杀伤的能力，还能为布鲁氏菌侵入宿主后[37]存活和复制提供物质基础。5.2Ⅳ型分泌系统布鲁氏菌菌体内有VirB鞭毛的一组多蛋白复合结构称为Ⅳ型分泌系统，其主要作用将细菌被膜和宿主的外膜进行有效的连接，布鲁氏菌在进入巨噬细胞后存在一个较为特殊的胞内转运过程，会形成一个特殊的布氏小体（Brucella.containingv811uole，BCV），其实质就是吞噬体，可逃避溶酶体的融融合。5.3超氧化物岐化酶超氧化物岐化酶（SuperoxideDismutase,SOD）是源于生命体的活性物质，可有效的消除机体内新陈代谢过程中产生的有害物质，有研究发现，布鲁氏菌在侵入细胞而发生感染的过程中可以使吞噬细胞释放的活性氧中间体（reactive[38]oxygenintermediates，ROI）失去活性，进而帮助细菌免遭氧化损伤作用。布鲁氏菌体基因组中Cu-Zn和Fe-Mn基因能够编码SOD，其中前者保护菌体免遭[39]吞噬作用，后者对宿主细胞发挥去氧化作用。6 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述5.4BvrS/BvrR双组分调节系统布鲁氏菌的BvrS/BvrR双组分调节系统能够通过感应并处理外界的信号来发挥毒力调控作用，两个基因分别编码布鲁氏菌的601和237个氨基酸蛋白，而外膜蛋白（outermembraneproteins，OMP）22和OMP25是该调控系统中最为关[40]键的两个靶基因蛋白。在研究过程中将布鲁氏菌的BvrS/BvrR双组分调节系统敲掉后进行缺失株攻毒，该菌株失去了抑制溶酶体融合和细菌胞内繁殖的能力[41]。对布鲁氏菌OMP25进行研究时发现该蛋白能够通过特殊渠道抑制巨噬细胞释放TNF-α，由此证实OMP25也与布鲁氏菌的毒力因子有关。BvrS/BvrR双组分调节系统可帮助细菌抵御外界环境的威胁、促使细菌在胞内寄生，这些作用为[42]进一步了解布鲁氏菌的致病机制奠定了基础。6布鲁氏菌病临床症状和病理变化6.1畜间布病不同动物感染不同种的布鲁氏菌后潜伏期存在差异，大多在1~3周内，有少数病例存在潜伏期数月或1年的情况，患畜发病后临床症状大多类似，多为隐性感染，在疾病初期出现体温升高、结膜炎，妊娠母畜发生流产、乳房炎，公畜发[43]生关节炎、睾丸炎。母畜在流产前精神委顿、食欲下降、阴唇肿大，阴道检查发现阴道黏膜肿胀、潮红，从阴门流出黄色、灰褐色带有恶臭的黏液，流产的胎儿多为死胎或弱胎，如果伴有子宫内膜炎会引起胎衣不下，大多数母畜在流产[44]后2个月又可怀孕，但是发生胎衣不下、子宫内膜炎、流产等症状的几率增高。动物感染布病后引起广泛的组织病理学变化。肝、脾、骨、血管、神经、生殖系统等部位的实质细胞和间质细胞发生损伤，其中单核巨噬细胞系统的病变最[45]为明显，主要以浆液性炎性渗出为主，并伴有增生性改变的肉芽肿。发生流产后排出的胎衣呈黄色胶冻样浸润，有部分会覆盖有纤维蛋白絮片和脓液，有的出现胎衣增厚遍布出血点，绒毛叶出现贫血状；剖检流产胎儿胃内存在大量黄色[46]或白色的黏液样絮状物。6.2人间布病病畜起病缓慢，大多为不规则热，临床发现的病畜很少出现典型的波浪热，根据菌种的不同动物发病后热型存在差异，其中羊种布病的动物发热比较明显，[47]牛种感染后以低热为主。人感染后出现高热症状时全身并无其他不适感，但7 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述是在体温降低后会感觉症状加重，这种与其他疾病不同的情况具有一定的临床诊断意义；出汗是人感染布病后的主要症状，大量出汗后会发生虚脱、乏力，患者能吃不爱动，因此又将此病称为“懒汉病”；患者还会出现关节炎、神经炎、睾[48-50]丸炎、子宫内膜炎等炎症病变，患者经过治疗后约有10%以上的复发率。慢性型感染的患者病程往往超过1年，主要表现为疲惫无力，有固定或反复发作的关节或肌肉疼痛，骨或关节存在器质性损害，此外还有精神抑郁、失眠等[51,52]精神症状。7布鲁氏菌病诊断动物感染布病后临床症状不明显时不易做出诊断，一般情况下可根据患病动物的临床症状、流行病学特征和病理学变化来做出初步诊断，但确诊仍需要进行实验室病原学诊断和血清学诊断。7.1细菌学诊断方法采集疑似感染布病的动物组织、器官送至实验室进行病原菌分离、鉴定。可使用血清葡萄糖琼脂、胰蛋白大豆琼脂等营养培养基进行细菌分离，一般情况下根据菌落形态、染色、细菌形态、生长特性、生化反应、玻板凝集等试验可鉴定[53]是否是由布鲁氏菌引起的感染。7.2血清学诊断方法在细菌学诊断方法行不通时可选择血清学方法进行诊断。一般采集疑似病畜的血清、乳液来检测布鲁氏菌的抗体，过去兽医检疫工作中最常用的检测方法之一就是平板凝集试验（plateagglutinationtest，PAT），可用于初筛，但是有时会出现非特异性凝集，目前基层兽医检疫工作中最常选用的方法为虎红平板凝集试验（Ross-BengalPlateAgglutinationTest，RBPT），该检测方法也是许多国家进行布病普查的主要方法之一，其对于布病阳性检出率和试管凝集试验（tubeagglutinationtest，SAT）结果基本一致，大多数情况下上述检测方法进行综合诊[54,55]断可获得较为准确的诊断结果。在我国，SAT检测作为复诊的方法，单独使用会出现假阳性或假阴性的情况，而且并不是所有感染布鲁氏菌的动物都能出[56,57]现具有诊断意义的抗体水平，容易造成误诊和漏诊。酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）是较为通用的检测方法，目前为国际贸易指定检测布病的实验方法，具有较高的灵敏度和8 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述特异性，其敏感度相较于SAT高10~100倍；一般检查奶牛群可选择全乳间接ELISA进行监测，如果不方便时也可做全乳环状试验（milkringtest，MRT）。7.3分子生物学技术国家规定的病原学诊断标准为细菌培养分离鉴定，但是耗时较长且细菌对生长条件要求高，技术复杂，不易分离，因此实际工作中往往选择基因扩增技术可用于布病诊断，常用的技术有聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）、[58]荧光定量PCR（QuantiSATiveReal-timePCR）。7.4鉴别诊断布氏杆菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌（Y.enterocolitica）有某些相似的表面抗原成分，和风湿、伤寒、疟疾等发热性疾病有相似的症状和体征，因此对于布病的准确诊断和鉴别是目前亟需解决的的难题。临床上使用血清学方法诊断人间布[59]病存在一定程度的非特异性交叉反应。8布鲁氏菌病防制布鲁氏菌病属于慢性传染病，感染后的羊一般无明显的临床症状容易忽视，造成严重的经济损失，生产过程中防制本病主要按照“预防为主，防治结合，防重于治”的方针，采取综合性的防制措施。对于存在布病流行的老疫区的牛、羊等易感动物要实施全面的检疫，对检出的阳性病畜及时淘汰。有些国家选择布鲁氏菌弱毒疫苗接种来防制本病，但是牲畜在接种后往往会引起流产、带菌、排菌、抗体持续上升的现象，不易与自然感染强毒株产生的抗体区分，因此在不存在布[60]病流行的区域不建议接种疫苗。和一般细菌不同，布鲁氏菌寄生在细胞内，治疗起来存在很大的难度，而且治疗成本偏高，临床上使用金霉素、链霉素能够取得一定的防治效果，但是发达国家和地区有明确的法律规定，对于临床检疫出布病阳性的牲畜一律淘汰，不许[61]治疗。我国布病的防制可分为四个阶段，普查和防制探索-总结探索和确定以免疫为主的措施-制定全国规划-有效防控布病的发生、发展和扩散，目前已经取[62]得了较好的防控效果。8.1健康动物防控措施对于健康动物可加强饲养管理，完善养殖过程的基础设施和消毒设备，改善养殖环境，合理搭配日粮，保证科学、全价、优质的日粮供给，促进家畜健康生9 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第一部分文献综述长，提高机体抵抗力，降低疾病发生；对规模化养殖场内要制定合理的消毒措施，开展预防性消毒，生产过程中往往使用3~5%来苏儿消毒场地、墙壁、器具、圈舍等，使用10~15%石灰乳涂刷墙壁、栏杆，也可选择0.5%过氧乙酸、2%氢氧化钠等溶液。对于母畜分娩后污染的垫草，产下的胎衣等污秽物要集中进行无害[63]化处理。8.2病畜防控对于临床和实验室诊断布病阳性的动物要及时扑杀，对于流产的胎儿、胎盘、分泌的乳业等动物及动物产品要根据《畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程》（GB-16548-2006）进行无害化处理。9本研究的目的和意义在世界范围内有20%左右的人受到布鲁氏菌病的威胁，而我国有25个省市区都有人间、畜间布病的存在和流行，且近年来发病率有逐渐上升的趋势，对人类健康和牲畜养殖业健康发展造成严重的威胁。本研究对2011年~2016年间甘肃省民乐县牛羊布病感染情况，开展了流行病学调查研究，分析布鲁氏菌病的流行特征和规律；再根据流行病学调查结果结合本地区畜牧业发展现状、动物防疫结构支持情况分析当前全县布病防控工作中存在的问题，并提出具有针对性和实际操作性的建议，为全县开展科学有序的布病防控提供理论依据。10 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容第二部分研究内容第二章民乐县牛羊布鲁氏菌病流行病学调查民乐县隶属甘肃省张掖市，地处祁连山北麓，河西走廊中段，属于传统农区，随着近年来传统畜牧业向现代畜牧业转型升级，全县范围内大力实施以肉牛、肉羊为主的标准化养殖和良种繁育工程建设，肉牛、肉羊的养殖得到了前所未有的发展。随着牛羊养殖数量的不断增多，布鲁氏菌病也出现抬头的趋势，为有效评估民乐县近年来牛羊布鲁氏菌病的流行趋势，为防制本病提供科学依据，2011年~2016年间，在民乐县辖区内开展了布鲁氏菌病的流行病学调查。1材料与方法1.1材料1.1.1采样在2015年5月~2016年6月间，从民乐县各乡镇规模化养殖场或散养户随机采集全血并分离血清，进行牛羊布病检疫。采样原则为全县范围内所有奶牛100%进行监测，肉牛、牦牛、绵羊、山羊检测数量不得少于存栏量的5%。在进行监测的1年时间内共采集肉牛血清1797份，牦牛血清377份，奶牛血清5777份，绵羊血清13299份，山羊血清1394份，共计22644份，详细存栏和采样情况见表2-1。11 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容表2-12015年~2016年全县布病监测血清采集情况（头、只）Tab.2-1Themonitoringserumcollectionofthewholecountyfrom2015to2016采样量乡镇存栏量合计肉牛牦牛奶牛绵羊山羊南丰355241256916015101131977永固24698780531118501794洪水26108164458461089682212民联404089510822515762692273三堡1945785917365232561691六坝4326416285141935622681顺化321751671634112452362005丰乐21855108211626383521281新天37992317040162001977南古39169368194221674382521机关102271280180030402232合计33087717973775777132991394226441.1.2试剂选择布鲁氏菌病虎红平板凝集试验抗原，布鲁氏菌病试管凝集抗原，国家标准布鲁氏菌病阳性血清和阴性血清。以上试剂购于哈药集团生物疫苗有限公司。1.2方法1.2.1样品采集在全县10个乡镇和机关农林场存栏的牛（黄牛、牦牛、奶牛）、羊（绵羊、山羊）养殖的规模化养殖场和散养户进行随机采样，奶牛按照养殖数量逐一进行检测，其他动物按照存栏量的5%进行采样，采集每头（只）动物颈静脉血5mL，编号，填写采样登记表，每一份采集的血清对应一头（只）动物，对应一个唯一的耳标号。1.2.2血清制备将采集的血样室温环境下（15~24℃）下静置2h，使用3000r/min离心5min，分离血清，直接进行布病血清学检测或冷藏于-20℃冰箱备检。1.2.3虎红平板凝集试验12 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容按照《虎红平板凝集试验（GB/T18646-2002）》中的操作步骤进行初筛。首先选择洁净的脱脂玻片，在玻片上清晰标记好受检血清的编号，使用微量移液器滴加30μL待检血清，在0.5cm处再滴加30μL虎红平板凝集试验抗原，用消毒的牙签将待检血清和抗原充分搅匀，在5min内肉眼观察试验结果，同时选择标准血清设立阴、阳性对照。结果判定：在4min混匀的血清和抗原出现凝集则判为阳性（+），如果无凝集呈均匀粉红色则判为阴性（—）；凝集反应判定标准：凝集块呈菌丛，中间的液体清亮透明判为++++；凝集反应强烈，液体比较清亮判为+++；凝集块有明显的卷边，液体稍清亮判为++；能够观察到微弱的凝集块，凝集物间的液体呈红色判为+；混匀的液体无凝集现象发生，呈均匀的粉红色判为—。1.2.4试管凝集试验首先稀释被检血清，选择8~10mm口径的小试管5支，标记1~5号，1号试管内加入2.3mL石碳酸生理盐水，2号管空，其余三支试管内各加500μL石碳酸生理盐水，使用1mL移液器调至200μL，吸取被检血清加入1号试管内充分混匀，再分别吸出500μL至2号、3号管内，将3号管内液体充分混匀后吸取500μL至4号试管内再充分混匀，以此倍比稀释后从第5号试管内弃去500μL液体，此时从1~5号试管内的被检血清稀释度分别为1:12.5、1：25、1:50、1:100；其次要在2~5号试管内加入被0.5%石碳酸生理盐水稀释过的抗原，1号试管作为血清对照组弃去500μL液体，充分混匀后每支试管内液体总量为1mL，被检血清的稀释度为1:50~1:200；在上述操作完成之后使用0.5%石碳酸生理盐水倍比稀释的抗原液制作比浊管，制作完成后将上述所有试管和比浊管进行充分震荡，然后置于37℃培养箱温育24h，取出后室温放置2h，再以比浊管作为标准进行结果判定。凝集反应判定标准：抗原抗体在试管底部完全发生凝集，上层液体100%清澈透亮的判为++++；抗原抗体在试管内几乎完全凝集，上层液体清亮程度为75%判为+++；抗原抗体有明显凝集，上层液体清亮程度为50%判为++；抗原抗体有微弱的凝集，上层液体清亮程度25%为+；抗原抗体无凝集反应发生，液体浑浊判为-。13 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容检测的每份样品血清滴度出现“++”以上的凝集现象的最高血清稀释度。对于第一次检测出现结果可疑的羊可记录编号，在一个月后重新采样进行复检，复检结果仍为可疑判为阳性。1.2.5走访调查对民乐县牛羊规模化养殖场、基层兽医站和个人兽医诊所进行走访调查，分析民乐县动物疫病预防控制中心实验室检验布病的数据，总结近5年来民乐县牛羊布病感染情况。现场调查：询问养殖场工作人员或养殖户，妊娠母畜是否临床表现为食欲不振、精神委顿、喜卧、体温升高，随后发生流产、胎衣不下、子宫内膜炎；公畜是否出现明显的波浪热，食欲不振，阴茎肿胀、潮红，一侧或双侧睾丸异常肿大等睾丸炎症状，病情严重的是否出现走路困难或步行姿势异常等关节炎症状。查阅资料：收集从2011年~2015年民乐县畜牧生产养殖年鉴，统计上述各年份黄牛、牦牛、奶牛、绵羊、山羊等家畜的养殖数量，根据走访调查和汇总动物疫病预防控制中心实验室检测的数据，分析民乐县牛、羊布病感染的真实情况，牛羊布病调查问卷详细见附表1。2结果2.1虎红平板凝集试验结果采集牛羊血清进行虎红平板凝集试验，感染布鲁氏菌的牛羊在检验后4min内出现肉眼可见的凝集现象，判为阳性（+），而未感染的呈均匀的粉红色，判为阴性（—），详见图2-1图2-1虎红平板凝集试验阳、阴性结果Figure2-1TestpositiveandnegativeresuLtsofrosebengalplateagglutination14 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容2.2民乐县2015年~2016年间牛羊布病阳性检出情况2015年5月~2016年6月间，对全县1797头黄牛、377头牦牛、5777头奶牛、13299只绵羊、1394只山羊的血清样品进行布病检疫，阳性数分别为37头、8头、110头、554只、55只，合计为764头、只，详见表2-2。表2-22015年~2016年民乐县牛羊布病阳性检出数量Tab.2-2ThenumberofpositivedetectionofcattleandsheepdiseaseinMinleCountyfrom2015to2016乡镇南丰永固洪水民联三堡六坝顺化丰乐新天南古机关合计肉牛8641033254137牦牛311010010108奶牛1021432641120623110绵羊9078405120734025636212554山羊1004125281103055合计121106536752826241687636764此次检疫的总阳性率为3.37%，其中黄牛阳性率为2.06%，牦牛2.12%，奶牛1.90%，绵羊4.17%，山羊3.95%，详见表2-3。表2-32015年~2016年民乐县牛羊布病阳性检出率（%）Tab.2-3ThepositivedetectionofcattleandsheepdiseaseinMinleCountyfrom2015to2016乡镇南丰永固洪水民联三堡六坝顺化丰乐新天南古机关平均肉牛6.407.692.441.050.001.851.801.851.581.090.782.06牦牛4.350.002.220.001.100.000.004.760.005.260.002.12奶牛6.253.950.471.333.530.783.231.230.001.421.281.90绵羊5.966.583.673.243.823.773.213.923.893.703.954.17山羊8.850.005.884.461.953.233.393.130.007.890.003.95平均6.125.912.402.953.083.063.093.203.443.011.613.37按照全县牛、羊的存栏量，计算出2015年5月~2016年6月间黄牛布病发病率为0.11%，牦牛发病率为0.12%，奶牛发病率为1.90%，绵羊发病率为0.21%，山羊发病率为0.21%，合计为0.23%。详见表2-4。15 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容表2-42015年~2016年间民乐县牛羊布病发病率（%）Tab.2-4TheincidenceofcattleandsheepdiseaseinMinleCountyfrom2015to2016乡镇南丰永固洪水民联三堡六坝顺化丰乐新天南古机关平均肉牛0.370.440.130.050.000.090.090.100.080.060.040.11牦牛0.240.000.160.000.060.000.000.260.000.280.000.12奶牛6.253.950.471.333.530.783.231.230.001.421.281.90绵羊0.300.340.200.160.190.190.170.200.200.200.200.21山羊0.500.000.330.230.100.180.180.160.000.460.000.21平均0.340.430.200.170.270.190.190.190.180.190.350.232.3民乐县2011年~2015年间牛羊布病发病情况根据走访调查、收集资料、分析数据，2011年民乐县牛羊布病检疫阳性率为1.86%，牛羊布病发病率分别为0.12%，2012年民乐县牛羊布病检疫阳性率为1.98%，牛羊布病发病率分别为0.14%，2013年民乐县牛羊布病检疫阳性率为2.32%，牛羊布病发病率分别为0.17%，2014年民乐县牛羊布病检疫阳性率为2.97%，牛羊布病发病率分别为0.21%，2015年民乐县牛羊布病检疫阳性率为3.63%，牛羊布病发病率分别为0.28%，2016年民乐县牛羊布病检疫阳性率为3.37%，牛羊布病发病率分别为0.23%，详见表2-5。表2-52011年~2016年间民乐县牛羊布病检疫阳性率和发病率Tab.2-5ThepositiverateandmorbidityofquarantineandquarantineofcattleandsheepinMinleCountyfrom2011to2016年份（年）存栏量（头、只）检测数量（份）阳性数（份）监测率（%）阳性率（%）发病率（%）2011年286276181453376.341.860.122012年292397207254017.091.980.142013年299811224725217.502.320.172014年336958235156986.982.970.212015年332207227038246.833.630.252016年330877226447646.843.370.23分析2011年~2016年期间民乐县牛羊布病检疫阳性率和发病率，发现2011年民乐县牛羊布病检疫阳性率不到2.00%，之后呈逐渐升高的趋势，在2015年到达最高3.63%，在2016年又下降到3.37%；根据每年牛羊的存栏量，计算布16 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容病发病率，其趋势与布病检疫阳性率基本一致，详见图2-2。图2-22011~2016年民乐县牛羊布病检疫阳性率和发病率走势图Fig.2-2ThepositiverateandmorbiditypatternofquarantineandquarantineofcattleandsheepinMinleCountyfrom2011to20162.4不同种类家畜布病检疫阳性率比较情况调查结果显示，从2011年~2016年牛布病平均阳性率为1.24%、1.51%、1.76%、1.93%、2.78%和2.03%，羊的布病平均阳性率为2.26%、2.30%、2.66%、3.52%、4.22%和4.06%，羊布病阳性率普遍高于牛，详见表2-6。表2-62011年~2016年间民乐县不同动物布病发病率（%）Tab.2-6TheincidenceofbrucellosisindifferentanimalsinMinleCountyfrom2011to2016年份2011年2012年2013年2014年2015年2016年肉牛1.26%1.69%1.75%1.91%2.33%2.06%牦牛1.40%1.52%1.74%1.94%3.76%2.12%奶牛1.06%1.31%1.80%1.95%2.25%1.90%绵羊2.12%2.29%2.64%3.53%4.35%4.17%山羊2.40%2.31%2.67%3.50%4.10%3.95%合计1.86%1.98%2.32%2.97%3.63%3.37%年份2011年2012年2013年2014年2015年2016年牛1.24%1.51%1.76%1.93%2.78%2.03%羊2.26%2.30%2.66%3.52%4.22%4.06%17 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容从2011年~2016年间民乐县布病检疫过程中，相较于其他种类的家畜来说，绵羊和山羊的布病阳性率最高，肉牛、牦牛、奶牛的阳性率差异不大；按照时间分布，从2011年~2015年民乐县各种家畜布病阳性率呈逐渐升高的趋势，在2015年达到最高值，随后又下降。详见图2-3。图2-3不同种类动物布病检疫阳性率比较情况Fig.2-3Thesituationcomparisonofquarantinepositiverateofdifferenttypesofanimals2.5不同乡镇家畜布病阳性检出率比较情况调查结果显示，南丰乡、永固镇、民联乡、三堡镇、新天镇在2016年布病检疫过程中阳性率达到最高值，分别为6.12%、5.91%、3.08%、3.44%，洪水镇、六坝镇、顺化乡、丰乐乡、南古镇、机关（民乐生态工业园区管委会）则在2015年度检疫时达到最高值，分别为3.40%、3.25%、3.30%、3.58%、3.27%、3.50%、18 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容3.50%，详见表2-7。表2-72011年~2016年民乐县各乡镇牛羊布病阳性检出率情况（%）Tab.2-7ThepositiverateofdetectionofcattleandsheepdiseaseineachtownshipofYongleCountyfrom2011to2016乡镇南丰永固洪水民联三堡六坝顺化丰乐新天南古机关合计2011年2.912.781.391.431.451.452.081.591.761.961.611.862012年2.912.901.371.701.781.661.941.811.881.791.831.932013年3.203.092.122.102.192.092.342.162.182.182.122.322014年4.043.912.542.662.572.663.072.702.922.722.912.972015年5.084.853.403.252.953.303.583.273.313.503.503.632016年6.125.912.402.953.083.063.093.203.443.011.613.37根据各乡镇近6年牛羊布病阳性检出率分布图可以发现，从2011年~2016年南丰乡、永固镇、三堡镇、新天镇牛羊布病阳性率呈逐年升高的趋势，而其余乡镇在2015年牛羊布病阳性率达到最高后2016年又降低，其中南丰乡、永固镇牛羊布病阳性率普遍高于其他各乡镇，详见图2-4。图2-42011年~2016年民乐县各乡镇牛羊布病阳率分布情况Fig.2-4ThedistributionoftherateofcattleandsheepdiseaseinthetownshipsofMinleCountyfrom2011to20162.6规模化养殖场和散养户牛羊布病阳性检出率调查结果显示，2011年~2016年间规模化养殖场牛羊布病检疫平均阳性率为19 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容3.14%，明显高于散养户2.33%，详见表2-8。表2-82011年~2016年民乐县规模化养殖场和散养户牛羊布病阳性检出情况Tab.2-8Thepositivedetectionofcattleandsheepdiseaseinlarge-scalefarmsandscattered-breedinghouseholdsinYongleCountyfrom2011to2016规模场散养户年份检测数量阳性数量阳性率（%）检测数量阳性数量阳性率（%）2011年103562282.2077891091.402012年110782842.5696471261.312013年108613142.89116112071.782014年113823863.39121333122.572015年98423964.02128614283.332016年107624113.82118823532.97合计6428120193.146592315352.33根据规模场和散养户牛羊布病阳性检出率对比图可发现，从2011~2016年规模场牛羊布病阳性率均明显高于散养户，均呈逐年升高的趋势，到2015年达到最高值后又降低，详见图2-5。图2-52011年~2016年民乐县规模场和散养户牛羊布病阳率分布情况Fig.2-5Thedistributionoftheprevalenceofcattleandsheepdiseaseinthescaleandthesizeofthefarmerinthecounty2011to201620 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容3讨论3.1民乐县牛羊养殖发展现状根据民乐县委、县政府出台的《关于发展绿色有机循环农业建设现代化农业强县的意见》引领下，截至2016年年底，全县羊、牛饲养量分别达75.5万、6.64万。肉、奶总产量分别达20908吨和11899吨，畜牧业总产值达5.75亿元，牧业增加值可达3.45亿元，牧业人均纯收入净增301元，达2805元。按照强基础，抓源头的发展理念，加快现代畜禽良种繁育体系建设。一是继续巩固完善了30个奶肉牛冻配点，引进了肉牛冻精1.2万支，完成改良授配母牛0.8万头，当年繁活改良牛犊0.72万头。二是结合肉羊产业大县建设项目的实施，进一步加大了肉羊新品种的引进力度。共引进杜泊、小尾寒羊、湖羊种公羊406只，引进小尾寒羊母羊2500只。在巩固完善5个绵羊人工授精点的同时，全年共完成绵羊杂交改良授配母羊9.8万只，其中人工授精授配母羊1.6万只，当年繁活杂种羔羊28.4万只。使民乐县牛羊养殖发展走上了一个新台阶。3.2民乐县2015~2016年牛羊布病阳性率分析此次调查通过走访调查养殖户、乡镇兽医站、兽医门诊等相关人员，查阅牛羊养殖年鉴，总结动物疫病预防控制中心实验室历年对牛羊布病血清学监测的记录，对2011年~2015年间全县牛羊布病情况进行整理分析，从2015年5月~2016年6月，对牛羊布病进行了血清学监测，得到近六年来民乐县牛羊布病的阳性率。检疫监测工作主要依靠血清学诊断方法，如虎红平板凝集试验和试管凝集等，属于操作简单，具有较高的特异性和重复性的检测方法。虽然分子生物学检测技术具有更高的准确度和特异性，但是由于目前民乐县动物疫病预防控制中心实验室还没有配齐相关仪器设备，工作人员对于PCR技术也在培训学习过程中，因此本次调查并没有运用到该检测方法。从2015年5月~2016年6月间对全县范围内的所有奶牛存栏量超过5%的肉牛、牦牛、绵羊和山羊进行血清样品采集，监测布病，结果显示检疫的总阳性率为3.37%，其中黄牛阳性率为2.06%，牦牛2.12%，奶牛1.90%，绵羊4.17%，山羊3.95%，可以看出，牦牛和黄牛的阳性率相对于绵羊、山羊低，而根据全县各种家畜的存栏量计算布病发病率可以得知黄牛布病发病率为0.11%，牦牛发病率为0.12%，奶牛发病率为1.90%，绵羊发病率为0.21%，山羊发病率为0.21%，21 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容合计为0.23%，绵羊的阳性率远远高于其他家畜。分析发生这种现象的原因可能是民乐县属于河西走廊绵羊养殖大县，由于地理位置比较特殊，在农区和牧区结合的养殖模式以及农牧民健康养殖观念不强的影响下，各种疫病发生率相对比较高，同时民乐县又属于多民族聚集的区域，有很多藏民、回民贩运户对布病相关知识和防控知识缺乏，为了获取眼前的蝇头小利低价从周边地区引进染疫的羊群，同时逃避动物卫生监督管理部门对引进动物的检疫，增加了县内布病阳性牛羊的数量，提高了布病检疫的阳性率。对于奶牛来说，相较于周边奶牛养殖大县，民乐县奶牛的养殖数量相对偏少，但是随着散养户数量的逐渐增多，有部分养殖场将检疫出布病阳性的奶牛低价转卖给散养户，而不是按照规程进行无害化处理，这样就进一步扩大了奶牛布病在散养户中的传播。3.3民乐县2011~2016年牛羊布病流检疫情况调查结果显示，分析2011年~2016年期间民乐县牛羊布病检疫阳性率和发病率，发现2011年民乐县牛羊布病检疫阳性率不到2.00%，之后呈逐渐升高的趋势，在2015年到达最高3.63%，在2016年又下降到3.37%；根据每年牛羊的存栏量，计算布病发病率，其趋势与布病检疫阳性率基本一致。发生这种现象的原因是由于，从2011年政府出台相关政策大力支持牛羊产业的发展，鼓励由传统养殖模式向规模化、现代化、集约化生产发展，造成牛羊养殖业空前发展，养殖数量不断增多，除了自繁自养外，从外地引起种用、育肥用家畜的数量也随之增加，无可避免的增加了染疫动物的引进；虽然政府部门和畜牧兽医主管部门一再强调从外地调运的牛羊必须要经过严格的检疫程序，隔离饲养确定无感染动物才可混群饲养，但是在实际操作的过程中由于需要大量的人力、物力和财力的投入，很少有养殖场会严格按照程序进行引进动物的检疫规程，更不用说缺乏安全养殖意识的散养户。在2015年，政府大力支持奶牛产业和肉牛产业的发展，有三个新建的养殖场从青海、内蒙等地引进数量不等的奶牛、绵羊、山羊，其中有两个养殖场没有进行严格的布病检疫，直接投入生产，但是在春秋两季集中进行布病检疫的过程中发现，引进的绵羊和奶牛都存在严重的布鲁氏菌感染的情况。由于此次检出的阳性动物数量巨大，兽医主管部门报备政府部门后采取扑杀、无害化处理的方式进行染疫动物淘汰处理，共扑杀奶牛38头，绵羊351只，财政支出60余万元，这为全县防控布病提供了有效的政策和资金保障，在2016年的22 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容监测中发现牛羊布病阳性率有所下降，这就说明制定的牛羊布病防控措施已经取得了一定的成效。3.4不同种类家畜布病阳性率从2011年~2016年间民乐县布病检疫过程中，相较于其他种类的家畜来说，绵羊和山羊的布病阳性率最高，肉牛、牦牛、奶牛的阳性率差异不大；按照时间分布，从2011年~2015年民乐县各种家畜布病阳性率呈逐渐升高的趋势，在2015年达到最高值，随后又下降。分析发生这种情况的主要原因是民乐县近年来牦牛养殖虽然得到了一定的发展，但是由于养殖饲养管理、检疫、防控等多方面的原因，布病感染的情况时有发生，畜牧兽医主管部门为了充分保障人民生活水平和社会公共卫生安全，加大力度狠抓牦牛养殖生产安全，尤其在2015年之后，对检疫过程中发现的阳性家畜，一经发现就会立即扑杀并进行无害化处理，得到了较好的防控效果，因此调查中2016年奶牛的布病阳性率得到了有效的控制；从2011年开始，人民生活水平不断提升，人们对牛奶的需求也随之加大，这就在一定程度上促进了全县奶牛产业的快速发展，但是机遇与挑战并存，在发展的过程中奶牛布病阳性率也逐年增加，尤其在2015年，由于新建奶牛养殖场在引进奶牛的过程中对布病监测、隔离饲养等工作敷衍对待，引进布病阳性奶牛，在很大程度上提高了全县奶牛阳性检出率，在2016年布病防控工作中扑杀无害化处理了检疫监测出的一部分布病阳性奶牛，从而使奶牛布病得到一定的控制。对于民乐县绵羊和山羊布病阳性率高居不下的现状，分析可能与引进冻精后进行人工授精的过程中设备消毒不严格，操作技术不规范引起布病传播，再者对于检出的阳性病羊，政府赔偿资金过少，养殖户不愿承担扑杀后造成的经济损失，在检出布病阳性后立即将病羊转卖到临近乡镇，造成疫病扩散，从而羊群的布病阳性率高居不下。3.5不同乡镇牛羊布病阳性率调查结果显示，南丰乡、永固镇、民联乡、三堡镇、新天镇在2016年布病检疫过程中阳性率达到最高值，分别为6.12%、5.91%、3.08%、3.44%，洪水镇、六坝镇、顺化乡、丰乐乡、南古镇、机关（民乐生态工业园区管委会）则在2015年度检疫时达到最高值，分别为3.40%、3.25%、3.30%、3.58%、3.27%、3.50%、3.50%，阳性率较高的乡镇为南丰乡、永固镇。分析发生这种情况的主要原因是23 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容由于南丰乡、永固镇虽然牛羊养殖数量不是最多的，但是活畜交易比较频繁，交易量比较大，在交易过程中兽医主管部门的检疫、监管力度不够，造成疫病蔓延，同时这两个乡镇靠近青海省的门源县、祁连县，两地牦牛、绵羊的交易数量逐年增加，尤其在2015年，在引进牛羊的过程中存在布病阳性的病例不少，这也是造成2015年度全年牛羊布病阳性率偏高的一个主要原因。3.6规模化养殖和散养牛羊布病阳性率调查结果显示，2011年~2016年间规模化养殖场牛羊布病检疫平均阳性率为3.14%，明显高于散养户2.33%，说明规模化养殖场牛羊布病阳性率偏高。在调查过程中发现少量的规模化养殖场配备专门的兽医室，消毒室，饲养管理水平较高，牛羊饲喂全价日粮，营养搭配科学合理，养殖的牛羊自身具有很高的抵抗力；安全养殖意识较强，坚持自繁自养的原则，很少从外引进动物，这就在很大程度上避免了布病的传入；再者养殖场能够按照县畜牧兽医主管部门的文件要求，配合春秋两季集中防疫和布鲁氏菌病、结核杆菌病的检疫工作，一但发现染疫的动物，为了防止疫病扩散会进行紧急隔离，对于扑杀和无害化处理染疫动物配合力[64]度比较高。但是仍然有部分中小型养殖场仍沿袭传统的粗放型管理，在春秋两季牛羊布病检疫工作结束之后从周边市县或跨省从青海、内蒙、新疆等地大量低价收购染疫家畜，未经检疫和隔离后就进行混群饲养，增加了同群感染的几率，因此对于一个养殖场检出一只布病阳性动物，间隔1个月进行检测还是能发现血清学阳性的动物，在粗放的饲养模式下根本不可能实现布病净化。大多数散养户集中在农村或牧区，虽然养殖人员缺乏专业的养殖和疫病防控知识，但是对于农户来讲一头牛或几只羊都属于家庭重要的经济收入来源，对于养殖的家畜会更精心的饲养，而且能够很好的配合春秋两季的重大动物疫病强制免疫工作，在调查过程中发现，断奶前后的牛羊的发病率和死亡率都相对偏高，养殖户在这一阶段基本上能够控制圈舍的温度、湿度等条件，但是在育肥期的牛羊多数饲养管理比较松散，而且大多数养殖户并不使用专门的精料、青贮饲料饲喂牛羊，二是采用自制的饲养进行喂养，这样会造成牛羊营养不足或营养过剩，[27]发生营养性疾病的现象十分常见。4小结（1）2016年民乐县牛羊养殖布病检疫的总阳性率为3.37%，其中黄牛阳性24 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容率为2.06%，牦牛2.12%，奶牛1.90%，绵羊4.17%，山羊3.95%；（2）2011年~2016年民乐县牛羊布病阳性率分别为1.86%、1.98%、2.32%、2.97%、3.63%、3.37%，开始逐年增高，在2015年到达最高后又降低的趋势；（3）从2011年~2016年间民乐县布病检疫过程中，相较于其他种类的家畜来说，绵羊和山羊的布病阳性率最高，肉牛、牦牛、奶牛的阳性率差异不大；（4）民乐县近六年调查中南丰乡、永固镇牛羊布病阳性率普遍高于其他各乡镇，分别为6.12%、5.91%，其他乡镇在3.08%~3.58%之间；（5）2011年~2016年间规模化养殖场牛羊布病检疫平均阳性率为3.14%，明显高于散养户2.33%。25 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容第三章民乐县牛羊布鲁氏菌病防控现状和拟解决对策近年来，随着民乐县周边地区人间、畜间布病感染病例逐年上升，牛羊养殖业发展和农牧民身体健康受到不断的威胁，从全国范围来讲，布病抬头的趋势并没有引起足够的重视，目前只有内蒙古自治区全面实施了畜间布病的防控工作。由于国家尚未将畜间布病全部纳入强制免疫的范畴，各地区布病防制工作存在良莠不齐的现象。根据第2章民乐县近六年来牛羊布鲁氏菌的流行病学特征，结合实际养殖情况，分析了影响布病流行的因素，在此基础上总结出民乐县近年来牛羊布鲁氏菌病的防控现状，分析布病防治工作中存在的问题，并提出拟解决对策，为本县和周边地区有效防控布病提供依据。1材料与方法1.1材料了解全县动物疫情监测人员队伍和相关布病监测的设备配置情况、生物制品冷藏设备、运行机制。查阅《中华人民共和国动物防疫法》、《甘肃省动物防疫条例》、《动物检疫管理办法》、《布鲁氏杆菌病防制技术归法》、《畜禽产地检疫规范》、《屠[65]场屠宰卫生检疫规范》、《布鲁氏菌病诊疗指南（试行）》等相关的法律法规，详细掌握布病防控的相关法律条款、规章制度。1.2方法走访调查民乐县畜牧兽医队伍建设情况，主要从人员、技术、机构、管理体制等方面进行调查；分析县动物防疫监督机制。2民乐县牛羊布病防控现状2.1兽医队伍建设现状本次调查结果显示，民乐县畜牧兽医主管部门为畜牧兽医局，下属各乡镇有畜牧兽医站，从设立畜牧兽医站开始，兽医工作并没有进行详细的划分，各项工作也没有专职人员，到目前为止仍然延续原有的工作机制，兽医站工作人员负责辖区内动物和动物产品的检疫、品种改良、动物防疫以及草原监理等各项工作。在2008年之前，各乡镇畜牧兽医站普遍存在工作人员年龄大、学历不高、业务26 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容水平低、法制观念薄弱等问题，对于布病防控的宣传工作不落到实处，无法做到专项防控。从2010年开始，甘肃省实施民生实事扶持高校毕业生就业工程项目，每年招考名额不等的高校大学毕业生来壮大基层兽医队伍建设，提高了全县畜牧兽医工作队伍的文化层次、业务水平、综合素质，不断地提高布病监测水平。2.2畜牧兽医机构和体制管理目前畜牧兽医局管理各乡镇畜牧兽医站，兽医站又管理基层动物防疫员，但是实际上基层动物防疫员和政府部门没有形成规范化的管理，换而言之，防疫员只管春秋动物集中防疫工作，对于其他草原监理、引种监督等工作并不参与，此外动物防疫人员工作条件差，设备缺乏，待遇低，受到一定的歧视，在一定程度上会影响其工作的积极性，在一些偏远地区动物防疫工作基本处于半瘫痪的状态；而且随着畜禽养殖数量的不断增加，防疫员的工作量翻了几倍，尤其在春秋防疫期间，强制免疫的疾病以及其他要防疫的疫病多达十几项，而且还要开展牛、羊人工授精工作，没有更多的人力和技术投入到布病的检疫中。现阶段，对于牛羊布病防控存在财政支持力度不够的客观原因，张掖市每年给各县区下达了大量的布病检疫监测任务，但是由于扑杀补偿机制不健全，补偿资金不到位，甘肃省财政羊扑杀补助360元/只，民乐县财政羊扑杀补助240元/只，远低于市场价，在布病大量存在的地区，强行扑杀会对养殖户造成巨额的经济损失，因此实际工作中对于检出的布病阳性动物很难开展正常的扑杀，大多数不是屠宰上市就是被养殖户偷偷卖掉流入市场交易到其他地区，这样疫源不能及时杀灭处理，又成为重要的传染源，使疫情不断的扩散。这种只进行检疫而不及时有效扑灭疫情的行为会为兽医部门带来无穷的后患，一旦政府开始追究问责，兽医部门会因不作为而被追责。2.3牛羊布病检疫检测标准存在漏洞目前甘肃省各地区执行布病检疫的标准存在很大的漏洞，各个县区开展牛羊布病检疫使用RBPT初筛，出现阳性的样品再使用SAT复检进行确诊，很少地区使用补体结合试验（complementfixationtest，CFT）进行确诊，而且大多数筛查只采集一次血样。根据布病发病机制可知细菌随血流进入肝、脾、淋巴结等网状内皮系统后血液中存在的细菌数量很少，尤其是处于哺乳阶段的动物，此时使27 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容用虎红平板凝集试验进行检测时结果为阴性，但是在疾病发展一段时间后，细菌在细胞内大量繁殖又会潜入血液中，此时进行检测结果又呈阳性，一直反复，因此在首次检疫后一个月要对检测阴性的动物进行一次复检，复检结果呈阴性的动[66]物才可确认为布病阴性。目前民乐县布病检疫与其他地区一样，实际开展工作的过程中只对部分种用、乳用动物进行实验室检测，对于其他繁殖、育肥的动物只有出现临床症状的才进行检测，这就造成许多感染布病的动物进入流通环节而造成疫病传播。2.4检疫监管力度不强由于民乐县地理位置特殊，南与青海接壤，跨省、大范围活畜调运比较频繁，为了加快牛羊养殖业的发展，从山东、内蒙等地区大量调入繁殖母羊，由于多种原因，调入的羊群几乎未经检疫和隔离后就直接混群饲养，这就增加了监管的难度，往往这种情况下造成疫病流行的情况十分常见，活畜调运也是目前民乐县牛羊布病传播的一个主要环节。2.5养殖户意识淡薄由于政府部门牵头开展的布病防控工作收效甚微，在农区养殖和农牧结合的地方没有开展布病防控相关知识的宣传，造成大多养殖户对布病防控知识的知晓率不高，防控意识淡薄，甚至部分规模化养殖场都缺乏布病监测的意识，也不进行布病净化工作，从外地引种时未经隔离就混群饲养，与此同时，养殖从业人员缺乏一定的自我防护意识，造成人间布病感染，有些养殖场或散养户一旦发现疑似布病感染的病例不上报就自行屠宰或销售，造成疫病传播，危害社会公共卫生[67]安全。3拟解决对策3.1政府高度重视牛羊布病防控是有效做好人间布病防控的基础，各级政府部门要提高人畜共患病防控工作的高度，重视布病的防控，畜牧兽医主管部门应联合各级人民政府因地制宜的制定有效防控布病的方案，安排专项经费用于染疫动物的扑杀和补助，加强布病的强制免疫工作，缺乏资金保障的疫病防控和布病净化就是一纸空谈，最后要鼓励动员社会各界力量加入到牛羊布病的防控工作中，形成较好的防[68]控环境。28 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容3.2强化动物检疫监督当前形势下，由于市场经济的不断推动，牛、羊交易频繁、流动量大，在部分市场操作不规范的情况下极易发生人为的疫情传播，尤其针对布病检疫更应该加强管理。强化动物卫生检疫监督工作是有效做好布病防控的首要措施，首先要针对牛羊交易的实际情况加强市场检疫监督力度，对于存在无证贩运活牛、活羊的贩运会要依法进行严厉的惩处；其次要严格按照国家、省、市、县各级政府制定的相关法律、法规、检疫规范，对于跨县调运的动物要凭本地动物实验室布病检测的报告办理相关检疫程序，如果没有相关检测报告的动物可使用布病金标层析卡进行快速检测，如果出现阳性，要将动物及时隔离后采样送实验室进行检测；再者要根据国家颁布的《布鲁氏菌病防治技术规范》中做出的相关规定，因地、因时制宜的进行本地区内布病的监测、检疫和免疫程序，同时实行层层责任落实，逐级监督，检查实施，达到有效控制和消灭牛羊布病的目的。3.3制定牛羊布病防控方案在全县范围内制定统一的牛羊布病防控方案，相对张掖市其他县来说民乐县地理位置比较特殊，位于祁连山山麓，与青海省的祁连县、门源县相连，入县的道路比较多，因此要在各交通要到加强动物卫生监督工作，实施区域内牛羊布病防控。由于县内和青海跨省牦牛、山羊、肉牛、绵羊调运比较频繁，要从各个乡镇开展布病防控工作，对于检疫出的阳性动物要进行强制扑杀，做到有效净化，全县统一开展布控防疫工作，确保防制效果，各乡镇再根据畜种、病情严重程度不同采取相应的防控措施。3.4依法扑杀检疫阳性动物对检疫过程中发现的布病阳性动物要依法实施扑杀，这是全县有效防控布病的关键措施，对于阳性染疫动物的扑杀工作能否顺利落到实处主要由扑杀补助资金是否到位决定，民乐县有蒙、藏、回、裕固等数十个少数民族居住，经济发展相对落后，地方财政能力有限，如果对全县存在布病感染的动物扑杀的话地方政府是无法拿出相应的资金对养殖户进行补贴的，需要中央政府给予资金支持才能调动全面防控布病的积极性，对于补助经费，需要物价部门在充分调查市场行情，对不同品种的动物进行定价，扑杀时按照市场价格的80%进行补助，尽可能的减少养殖户的损失，以便扑杀工作的顺利开展。29 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容此外政府部门要启动牛羊政策性保险，将布病纳入保险的范围，在检疫过程中发现布病阳性动物进行扑杀时可由保险公司赔付一定的资金，对开展布病防控是极为有利的。3.5牛羊布病的防控和疫苗选择本研究流行病学调查结果显示，2016年民乐县牛羊布病阳性检出率为3.37%，其中黄牛阳性率为2.06%，牦牛2.12%，奶牛1.90%，绵羊4.17%，山羊3.95%，因此全县牛羊布病防控要结合地区、畜种、养殖方式的不同进行综合防控。牛：在2016年上半年之前，牛布鲁氏菌病阳性均采用检疫净化的措施来进行扑杀淘汰，并不主张注射疫苗，但是在走访调查的过程中发现有部分养殖场在条件允许的自行购买牛布病相关疫苗进行免疫注射，大多数选择新疆畜牧科学院兽医所研制的荧光标记的S19疫苗进行免疫，由于该疫苗能够有效的区分感染抗体和免疫抗体，因此在注射疫苗后可进行血清学检测，每年做1~2次检测，将阳性牛逐渐淘汰，可做到逐步净化的目的；牛在接种S19疫苗后产生的抗体可以持续较长的时间，尤其是成年动物，因此在养殖场之间互相推荐使用，但是在国外有研究证实，该疫苗接种给犊牛后产生很强的免疫效果，3~8月龄犊牛接种，在配种前进行二次免疫，怀孕6~7胎后仍然保持较强的免疫力，因此一般给犊牛接种该疫苗，成年牛并不免疫；S19苗对牛和绵羊都具有较好的免疫效力，猪免疫[69]后不产生抗体，山羊免疫后抗体产生效果不佳，母畜在妊娠期间不能接种。但是也有文献资料显示，S19弱毒苗接种后会引起乳房感染，在牛奶中能够分离到菌株，因此建议对于奶牛不要使用该疫苗接种，只进行强制检疫、淘汰、净化[70]来控制本病在奶牛群中的传播。对于未感染的健康牛群要进行隔离饲养防止感染，尤其在需要引进新牛时要严把检疫监管关，养殖场新引进的牛群必须是接种过疫苗的犊牛或未怀孕的母牛，成年牛必须无病且血检呈阴性，混群饲养前必须要隔离饲养1个月以上，在隔离期间要多次采集血清进行布病血清学检测，阳性淘汰，阴性混群。羊：根据国外布病防控的先进经验，牛羊布病阳性率超过20%后单纯靠检疫、扑杀对于控制疫情无多大作用，需要对疫区连片、集中进行高密度免疫的措施，[71]待阳性率降至一定水平后再进行综合性的防控措施。从2016年6月份之后甘30 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容肃省将张掖市部分县区羊布病纳入强制免疫的范围，规定对辖区内所有的羊进行强制检疫，一经发现阳性羊就要立即扑杀淘汰，对检疫结果呈阴性的羊进行强制免疫，采取检疫和免疫相结合的方法全面进行防控。强制免疫程序一般为首免一个月后再进行一次强化，之后每年免疫一次，连续免疫三年后再对所有羊群进行检疫，阳性羊进行扑杀处理。对于规模化养殖场来说要严格控制调运，必须引进时要加强检疫检查，证实无布病染疫羊时才可混群饲养。对于种公羊来说并不主张免疫，在每年春秋两季集中监测的同时进行强制检疫，检出的阳性羊要严格扑[72]杀。1962年哈尔滨兽医研究所研制的M5羊种布鲁氏菌疫苗，其是将羊种强毒株通过鸡体进行连续传代培养后培育出的弱毒菌株，接种后动物产生的血清凝集素很快消失，免疫接种后具有较好的免疫原性，残余毒力很低，牛、羊、鹿注射后都能产生较好的免疫效果，猪接种后无抗体产生，有资料显示，M5疫苗对绵羊的保护率高达94.03%，2~3年检测仍高达85.69%，山羊的保护率达92.68%，[73]一般情况下在动物配种前1~2个月进行免疫，对于妊娠期动物不能直接接种。此外从进口猪种流产胎儿体内分离出的S2弱毒疫苗是目前使用范围最广泛的疫苗，其与羊M5疫苗有类似的地方，可供多种动物免疫，免疫途径多样，操作简[74]单，一般情况下口服效果最好。目前临床上广泛使用的是S2国产疫苗，但是对于我国西部地区流行的羊型布病能否产生很好的保护力有待于进一步的深入研究。民乐县在2016年秋季防疫工作中对县域内羊只开展布病强制免疫工作，选择S2号苗，进行全群免疫。3.6做好相关工作人员的防护工作在开展布病防控工作中必须要按照规范做好工作人员的防护工作，确保基层兽医工作人员免遭感染，尤其是在接种疫苗的过程中要严格按照技术规范进行操作，配备衣、帽、口罩、防护眼镜、乳胶手套等防护物资，在工作结束后严格消毒。3.7进一步加强流行病学调查开展牛羊布病流行病学调查工作是有效防控布病的基础，也为科学防控提供依据，定期开展民乐县牛羊布病流行病学调查，不仅要进行血清学监测，今后还要加大设施仪器、人员投入进行病原学监测。对于已经开展免疫的羊来说，要对31 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容新生羔羊、未免疫羊、免疫一年或口服一年后的羊进行血清学监测，一般来说每[75]年至少进行一次监测。而对于奶牛、奶山羊和种牛、种羊每年至少进行两次监测。3.8加大宣传力度全面开展布病防控工作仅靠兽医部门和卫生部门是远远不够的，必须要动员全社会的力量，充分使用现代新媒体和传统宣传手段深入偏远山区进行布病相关知识的宣教，提高养殖户和广大人民对布病防控的知晓率，只有全社会参与才能[76]支持畜间布病有效净化，提高食品安全，保障人民身体健康。3.9其他防控措施牛羊养殖区一但确诊布病疫病，要立即按照技术规范划定疫区、疫点，紧急封锁、隔离，对患病动物和检疫阳性病畜就地扑杀，防止疫情扩散；做好疫区内定期检疫、隔离、消毒、灭鼠、污染物无害化处理等工作；做好规模场的消毒灭源工作，将圈舍、场地进行彻底消毒，清扫粪便后进行无害化处理，条件允许的[77]情况下可对牛羊圈舍进行熏蒸消毒。4小结（1）民乐县牛羊布病防控工作中存在兽医队伍建设不强、机构体制管理不严、牛羊布病检疫检测标准存在漏洞、检疫监管力度不强和养殖户防控意识淡薄等问题；（2）民乐县牛羊布病防控要从加强政府重视、强化动物检疫监督、制定并实施防控方案、依法扑杀阳性病畜、合理注射疫苗、做好工作人员的防护、进一步加强流行病学调查、加大布病防控知识宣传力度和加强消毒灭源等九个方面入手，全面开展综合性防控措施，减少布病在辖区内的传播，为净化布病提供有力保障。32 甘肃农业大学2017届兽医硕士学位论文第二部分研究内容第四章结论1.2016年民乐县牛羊养殖布病检疫的总阳性率为3.37%，其中黄牛阳性率为2.06%，牦牛2.12%，奶牛1.90%，绵羊4.17%，山羊3.95%；2.2011年~2016年民乐县牛羊布病阳性率分别为1.86%、1.98%、2.32%、2.97%、3.63%、3.37%，开始逐年增高，在2015年到达最高后又缓慢降低的趋势；3.从2011年~2016年间民乐县布病检疫过程中，相较于其他种类的家畜来说，绵羊和山羊的布病阳性率最高，肉牛、牦牛、奶牛的阳性率差异不大；4.民乐县近六年调查中南丰乡、永固镇牛羊布病阳性率普遍高于其他各乡镇，分别为6.12%、5.91%，其他乡镇在3.08%~3.58%之间；5.2011年~2016年间规模化养殖场牛羊布病检疫平均阳性率为3.14%，明显高于散养户2.33%；6.民乐县牛羊布病防控工作中存在兽医队伍建设不强、机构体制管理不严、牛羊布病检疫检测标准存在漏洞、检疫监管力度不强和养殖户防控意识淡薄等问题；7.民乐县牛羊布病防控要从加强政府重视、强化动物检疫监督、制定并实施防控方案、依法扑杀阳性病畜、合理注射疫苗、做好工作人员的防护、进一步加强流行病学调查、加大布病防控知识宣传力度和加强消毒灭源等九个方面入手，全面开展综合性防控措施，减少布病在辖区内的传播，为净化布病提供有力保障。33 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3、有无病死动物无害化处理设施：□A有；□B无；设施种类：；4、售出是否报检：□A是；□B否；检疫单位：；5、临床健康监测：次/年；监测单位：；监测结果：；动物年份牛羊调入导致发病数调入导致爆发的比率布病发生情况畜主是否感染布病□是；□否；感染时间；畜主与动人员临床表现：；物接触史感染家庭成员情况感染布病情况传染可能传染可能感染源来源方式病例数周边□A无；□B有：具体地域是□本村；□本镇（街）；□本区；□区外；疫病□何病；发生的时间：；1、人工授精：□固定专人繁育；□场外临请配种员繁育；2、羊只是否本交□是；□否；3、是否有孕期流产情况□A无；□B有。具体情况为：年份牛流产数羊流产数繁育情况4、接生人员保护措施：接生是否戴手套□A是；□B否；接生后是否消毒□A是；□B否；接生操作人员□畜主；□外请兽医；5、生产胎衣、污物的处理：是否深埋□A是；□B否；□C随意抛弃；场地是否消毒□A是；□B否；1、牲畜粪便处理情况：□直接用于农田施肥□堆积发酵□直接销售其他□用于沼气等无害化处理；2、养殖区域污水污物处理情况：□直接排入水沟和农田□无害化处理42 致谢《民乐县牛羊布鲁氏菌病流行情况调查和防制效果分析》顺利完成，得益于我的导师孙晓林教授的悉心指导。从论文选题到论文的撰写修改，无不凝聚着孙老师的心血。孙老师严谨、求实的治学态度和一丝不苟、以师为范的敬业精神，一直激励着我。在此致以我最衷心的谢意！感谢学校和学院老师的教导和帮助，感谢陪伴我两年多大学时光的同学们，感谢他们的鼓励和支持。感谢民乐县畜牧兽医局所有领导和同事对我学业上的支持和帮助，感谢民乐县动物疫病预防控制中心和乡镇畜牧兽医站所有同事在试验过程中给予的帮助。最后，对审阅、评议论文、答辩委员会的全体专家教授以及对一直致力于在职研究生工作的方梅老师致以崇高的敬意和诚挚的感谢！宋虹2017年10月31日43 个人简介宋虹，女，1987年1月出生，甘肃省民乐县人，2010年毕业于甘肃农业大学动物医学院。现在就职民乐县畜牧兽医工作站（民乐县动物疫病预防控制中心），主要从事动物疫病防控的专业技术工作，攻读硕士期间，发表论文1篇。44 导师简介1963年9月出生，博士，教授（四级），硕士生导师，甘肃农业大学动物医学院教师，主要致力于兽医公共卫生教学和研究工作。曾获甘肃农业大学先进工作者、优秀毕业生论文指导教师等光荣称号。主持完成各类科研项目5项，获省部级以上科技进步奖3项，在《中国农业科学》、《畜牧兽医学报》等国内外著名刊物上发表论文50余篇，其中被SCI收录3余篇。主编、参编《牛羊猝死症防控》、《牛羊病诊治彩色图谱》、《动物性食品安全概论》专著、教材等12部。承担本科生的《动物性食品公共卫生学》教学任务，硕士研究生的《动物食品卫生微生物检验技术》、《动物食品卫生理化检验》和《高级食品卫生学》等教学任务。45 46
