天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察

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中图分类号密级公开ＵＤＣ学号１５３２１２６１５０湖并中医玆大ｆ＿ＨｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ硕士学位论文ＭＡＳＴＥＲＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察ＳｔｕｄｙｏｎＡｎｔｉｈｙｐｏｘｉａＥｆｆｉｃａｃｙｏｆＧａｓｔｒｏｄｉｎａｎｄｔｈｅＣｌｉｎｉｃａｌＯｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆＩｔｓＳｕｓｔａｉｎｅｄＲｅｌｅａｓｅＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＡｎｇｉｎａＰｅｃｔｏｒｉｓｉｎＥｌｄｅｒｌｙＰａｔｉｅｎｔｓ研究生姓名：邹驰指导教师姓名、职称：樊光辉主任医师申请学位：医学硕士学科（专业）名称：中西医结合方向学位类型：专业学位型＾湖北中医药大学二〇一八年五月十六日 湖北中医药大学学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：Ｉ丨加醉＜月ｄ曰关于学位论文使用授权的声明本人完全了解湖北中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅：学校可议公布学位论文的全部或部份内容，可以采用复印、缩印或其他手段保留学位论文学校可以根据国家或湖北省有关部门；的规定送交学位论文。同意《中国优秀博硕士论文全文数据库出版章程》的内容。同意授权中国科学技术信息研究所将本人学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密论文在解密后遵守此规定）论文作者签名：导师签名：扣｜？年ｒ月以曰 目录摘要..................................................................................................................IABSTRACT......................................................................................................IV缩略词表...........................................................................................................IX前言.................................................................................................................1正文.................................................................................................................41动物实验......................................................................................................41.1常压密闭缺氧耐力实验......................................................................41.2急性减压缺氧耐力实验......................................................................61.3减压缺氧实验......................................................................................72临床试验..................................................................................................152.1临床资料............................................................................................152.2诊断标准............................................................................................152.3病例标准............................................................................................162.4研究方法...........................................................................................182.5观察方法............................................................................................182.6标本采集和测定................................................................................192.7统计学方法........................................................................................192.8研究结果............................................................................................19讨论...............................................................................................................231天麻素抗缺氧功效动物实验结果分析...................................................232缺氧与心血管损伤..................................................................................253西医对冠心病心绞痛的认识...................................................................254中医对冠心病心绞痛的认识...................................................................275天麻素对心肌缺氧保护作用的研究.......................................................29 6天麻素缓释片治疗老年冠心病心绞痛的作用.......................................307本研究的不足及尚需要解决的问题.......................................................31结语...............................................................................................................33参考文献...........................................................................................................34附录...............................................................................................................40附录一文献综述.........................................................................................40参考文献...................................................................................................45附录二西雅图心绞痛量表........................................................................49附录三中医证候评分表............................................................................51附录四研究生期间发表文章..................................................................55致谢...............................................................................................................56 摘要目的深入研究疗效确实的传统中药对实现中医药精准治疗具有十分重要的意义。缺血缺氧所致心脑血管疾病严重危害了人类健康，在中草药的宝库中寻找安全有效的抗缺氧药物可以有效降低损伤，为生命保驾护航。本课题以天麻中主要成分天麻素为研究对象，设计动物实验和临床试验，一方面对天麻素抗缺氧的药理作用进行探索；另一方面评价我院自主研发的天麻素缓释片治疗老年冠心病心绞痛的临床疗效。本研究不仅是对天麻素药理作用的深掘，亦为冠心病心绞痛的中医治疗提供新的思路与方法，为相关分子生物学研究打下基础。方法动物实验：通过常压密闭缺氧耐力实验、急性减压缺氧耐力实验、减压缺氧实验三步联合，深入探索天麻素抗缺氧的药理作用。①常压密闭缺氧耐力实验：将50只雄性BALB/c小鼠随机分为空白模型（M）组、红景天（RC）阳性对照组、天麻素低剂量（GAS-L）组、天麻素中剂量（GAS-M）组、天麻素高剂量（GAS-H）组，每组10只。各组均定时灌胃给药,连续7天。将小鼠在末次给药50min后逐个放入密闭广口瓶中，记录各个小鼠的存活时间。②急性减压缺氧耐力实验：实验对象、分组、给药均与常压密闭缺氧耐力实验相同，在末次给药50min后，将小鼠放入动物实验舱，到达设定缺氧环境后开始计时，记录各组小鼠在1h内的存活情况，计算存活率。③减压缺氧实验：60只雄性Wistar大鼠随机分为常氧模型（N）组，缺氧模型（M）组，RC组，GAS-L、GAS-M、GAS-H各三组，每组10只。实验动物灌胃7天后，将缺氧模型及给药组放入低压氧舱中缺氧12小时，动物麻醉后解剖，腹主动脉取血，测血气，并取脑、心、肺组织器官样品，每组2只大鼠组织做病理切片，剩余8只的组织按试剂盒说明的相关方法测定生化指标。常氧模型组动物除不放入低压氧舱外，其他实验操作相同。临床试验：选取2017年10月至2018年02月中国人民解放军武汉总医院干部病房及心内科住院部老年冠心病心绞痛的患者60例作为研究I 对象。入选病例随机分为两组，对照组与观察组各30例。对照组患者接受硝酸酯类药物、β受体阻滞剂、钙离子拮抗剂等常规冠心病的西药治疗；观察组患者在上述治疗基础上，给予天麻素缓释片150mg/片，1次1片，每日2次（共300mg）。4周为1个疗程。治疗前后通过西雅图心绞痛量表（SAQ）和中医证候评分表比较两组心绞痛的临床疗效，测定患者血清SOD的变化。同时，对两组患者的不良反应发生情况进行统计。结果动物实验：GAS三个剂量均可有效延长常压密闭缺氧环境下小鼠的存活时间（P＜0.01），降低小鼠暴露于急性减压缺氧条件中的死亡率。减压缺氧实验中，缺氧12h后，M组大鼠氧分压（PO2）、血氧饱和度(SO2)、-+氧合指数(PO2/FIO2)、实际碳酸氢根(HCO3)、钠离子浓度（Na）显著下降（P＜0.01），血红蛋白浓度（Hb）、乳酸（LD）显著上升（P＜0.01）；大鼠脑、心、肺组织出现病理损伤；脑组织中丙二醛（MDA）、过氧化氢（H202）含量均显著升高(P＜0.01)，谷胱甘肽（GSH）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性均显著降低(P＜0.01)；心组织中乳酸（LD）含量、乳酸脱氢酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）含量、过氧化氢（H202）含量显著上升，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力显著下降（P＜0.01）。GAS三个剂量组中大鼠各指标有不同程度改善：大鼠动脉血气中提高了-+PO2、SO2、PO2/FIO2、HCO3、Na、Hb水平，降低了LD水平；减轻了缺氧所致脑、心、肺组织病理损伤；降低了脑组织MDA、H202含量，提高了GSH、GSH-Px水平；降低了心组织LD、LDH、MDA、H202水平，提高了GSH、GSH-Px水平。但GAS三个剂量之间无显著量效关系。临床试验：①经过4周抗心绞痛的治疗后，对照组（常规西药治疗）及观察组（常规西药治疗+天麻素缓释片）患者心绞痛症状均有改善，并且观察组患者西雅图心绞痛量表评分中部分项目及中医证候评分改善情况较对照组更加明显。②治疗4周后，对照组血清SOD活性较治疗之前均值稍有提高，但无统计学差异，观察组血清SOD活性较本组治疗之前及对照组治疗之后均有明显提高，差异有统计学意义（P＜0.01）。③两组实验患者均未出现药物过敏或者不良反应。II 结论1、天麻素具有一定抗缺氧功效。能显著延长密闭缺氧环境下小鼠的存活时间；增加急性减压缺氧环境下小鼠的存活率。2、天麻素能够从以下几个方面发挥抗缺氧作用：改善缺氧所致大鼠动脉血气变化；减轻缺氧所致脑、心、肺组织的病理损伤；可通过清除自由基、减轻脂质过氧化损伤、提高抗氧化酶活性从而形成对脑和心组织的抗缺氧保护，并且减少缺氧所致心肌组织中乳酸堆积。3、天麻素缓释片对老年冠心病心绞痛有一定临床疗效。天麻素缓释片可改善患者心绞痛稳定状态、心绞痛发作情况、提高患者治疗满意程度及对疾病的认知度，也可以改善胸闷、胸痛等胸痹相关中医证候，使冠心病心绞痛患者血清SOD活性显著提升。4、天麻素缓释片在冠心病心绞痛治疗中安全性良好，其研究及临床应用可以进一步深入。主题词天麻素；抗缺氧；心绞痛；西雅图心绞痛量表；超氧化物歧化酶III StudyonAntihypoxiaEfficacyofGastrodinandtheClinicalObservationofItsSustainedReleasePreparationfortheTreatmentofAnginaPectorisinElderlyPatientsSpecialty：TreatedChineseandWesternMedicineStudyonHeartandCerebralVesselsAnthor：ZouChiSupervisor：FanGuanghuiABSTRACTObjectiveToachieveprecisetreatmentofTCM，itisofgreatsignificancetothoroughlystudytraditionalChinesemedicinewitheffectivecurativeeffect.Thecardiovascularandcerebrovasculardiseasescausedbyischemiaandhypoxiaseriouslyendangerhumanhealth.Thesearchforsafeandeffectiveanti-hypoxiadrugsinthetreasure-houseofChineseherbalmedicinecaneffectivelyreducethedamageandescortpeople’slife.Inthispaper,gastrodinwhichisthemaincomponentofgastrodiaelatawasstudiedinbothanimalexperimentsandclinicaltrials.Ontheonehand,theantihypoxiapharmacologicalactionofgastrodinwasexplored.Ontheotherhand,weevaluatedtheclinicaleffectofgastrodinsustainedreleasetabletsdevelopedbyourhospitalforthetreatmentofanginapectoris.Thisstudyisnotonlyanextensionofthepharmacologicalactionofgastrodin,butalsoprovidesanewwayofthinkingandmethodforthetreatmentofanginapectoris,whichlaysafoundationfortheresearchofmolecularbiology.MethodsIntheanimalresearch,theantihypoxiapharmacologicactionIV ofgastrodinwerestudiedbycombiningthreeexperiments:atmosphericpressuresealedanoxicenduranceexperiment,acutedecompressionenduranceexperimentanddecompressionanoxicexperiment.①Atmosphericpressuresealedanoxicenduranceexperiment:50maleBALB/cmicewererandomlydividedintoblankmodel(M)group,rhodiolacrenulata(RC)positivecontrolgroup,gastrodinlowdose(GAS-L)goup,gastrodinmediumdose(GAS-M)groupandgastrodinhighdose(GAS-H)group,10foreachgroup.Miceoffivegroupsweregivenintragastricadministrationfor7daystimely.After50minutesoflastadministration,50micewereputintoairtightwild-mouthbottleonebyone.Recordedthesurvivaltimeofeachmouse.②Acutedecompressionenduranceexperiment:theexperimentalsubjects,grouping,anddrugadministrationwerethesameasfirstexperiment.After50minutesoflastadministration,50micewereputintoanimalexperimentalchamber,startedtimingwhensethypoxiaenvironmentwasreadyandrecordedthedeathrateofeachgroupofmicewithinonehourandcalculatedthesurvivalrate.③Decompressionanoxicexperiment:60maleWistarratswererandomlydividedintonormoxia(N)group,hypoxiamodel(M)group,rhodiolacrenulata(RC)positivecontrolgroup,gastrodinlowdose(GAS-L)goup,gastrodinmediumdose(GAS-M)groupandgastrodinhighdose(GAS-H)group,10foreachgroup.After7daysofgastriclavage,theMgroupandtheadministrationgroupswereputintothelow-pressureoxygenchamberfor12hours.Theratsweredissectedafteranaesthesia.Thearterialbloodgastakingfromaortaventraliswastested.Brain、heart、lungtissuesofratwerecarfullytakenandsaved.2samplesofeachgroupwereusingforpathologicalsectionandthebiochemicalindexesofrestsamplesweretestedaccordingtotheV methodofthekit.TheexperimentalmethodwassameforgroupofNexceptputtingintothehypobaricoxygenchamber.Clinictrial:Atotalof60elderlypatientswithanginapectorisfromthecadrewardandthedepartmentofcardiologywereselectedasthesubjectsinWuhanGeneralHospitalofPeople'sLiberationArmy(PLA)fromOctober2017toFebruary2018.Accordingtotherandomnumbertable,60caseshavebeendividedintotwogroups:controlgroupandobservationgroup,30foreachgroup.ThecontrolgroupreceivedroutinewesternmedicinetreatmentincludingBetablockers,nitricacidesters,calciumantagonists,ect.Theobservationgroupwasgivengastrodinsustained-releasetablets150mg-oral1tabletonce2tablets/day(total300mg).4weeksisonecourseoftreatment.TheclinicalefficacyoftwogroupswerecomparedbyvaluingtheSeattleAnginaScale(SAQ)score,Chinesemedicinesymptomcomplexscoreandsuperoxidedismutasesod(SOD)ofelderlypatientswithangniapectoris.Theadversereactionsofthetwogroupswererecordedduringtheclinictrial.ResultsAnimalexperiment:inthreedifferentdosegroupsofGAS,thesurvivaltimeofmiceunderairtightanoxicenvironmentwaseffectivelyprolonged（P＜0.01）,thedeathrateofmiceunderacutedecompressionandhypoxiaconditionwasreduced.Indecompressionanoxicexperiment,thingschangedingroupofMafteroxygendeficitfor12hourscomparingwithgroupofN：thebloodoxygenpartialpressure(PO2),valuesofbloodoxygensaturation(SO2),oxygenation-+index(PO2/FIO2),actualbicarbonateradical(HCO3)Na+concentration(Na)weresignificantlydecreased(P＜0.01),hemoglobinconcentration(Hb),lacticacid(LD)weresignificantlyincreased(P＜0.01);pathologicaldamagewasinflictedinbrain,heartandlung;contentsofVI malondialdehyde(MDA),hydrogenperoxide(H2O2)weresignificantlyincreased(P＜0.01),contentofglutathione(GSH)andactivityofglutathioneperoxidase(GSH-Px)weresignificantlydecreased(P＜0.01)inbothbrainandhearttissues;lacticacid(LD)andlacticdehydrogenase(LDH)weresignificantlyincreased(P＜0.01)inhearttoo.ThosedamageswererelievedatdifferentlevelinthreedoesgroupsofGAScomparingwithgroupofM:thesituationofarterialbloodgaswasimproved;pathologyinjuryofthebrain,heartandlungtissuecausedbyhypoxiawerealleviated;MADandH202werereduced,GSHandGSH-Pxwereincreasdinbothbrainandheart,LDandLDHweredecreasedinheart.However,therewasnosignificantdose-effectrelationshipinthreeGASgroups.Clinictrial:①Thesymptomsofanginawereimprovedbothinthecontrolgroup(westernmedicinetherapy)andtheobservationgroup(westernmedicinetherapy+gastrodinsustained-releasetablets)after4weeksofroutinetreatmentofanginapectoris,inaddition,theimprovementofsomeitemsinSAQandChinesemedicinesymptomcomplexscorewasmoreobviousintheobservationgroupcomparingwiththecontrolgroup.②Aftertreatmentfor4weeks,theaverageofSODactivityincontrolgroupwasincreasedslightly,butnostatisticaldifference,theSODactivityinobservationgroupwereobviouslyimprovedcomparingwithbeforetreatmentandthecontrolgroupthataftertreatment,thedifferencewasstatisticallysignificant(P＜0.01).③Nodrugallergiesandadversereactionswereobservedinthepatientsparticipatinginthisclinicaltrial.Conclusion1.Gastrodinhascertainanti-hypoxiaeffect.Itcanprolongthesurvivaltimeofmiceundertheairtightanoxicenvironment,increasethesurvivalrateofmiceunderdecompressionanoxicVII environment.2.Gastrodincanplayanantihypoxiaeffectfromthefollowingaspects:improvingthechangesofarterialbloodgasinratsinducedbyhypoxia,alleviatingthepathologicaldamageofbrain,heartandlungtissuescausedbyhypoxia,protectingthebrainandheartfromhypoxiabyscavengingfreeradicals,reducinglipidperoxidationdamageandimprovingantioxidantcapacity,reducingtheaccumulationofLDinmyocardialtissue.3.Gastrodinsustainedreleasetabletshaveacertaineffectonelderlypatientswithanginapectoris.Itcanimprovethestabilityofanginapectorisandanginalfrequency,enhancethepatient'ssatisfactiondegreeoftreatmentandawarenessofdisease,improvechesttightness,chestpainandotherrelatedChinesemedicalsyndrome,promotetheSODactivityinserumofelderlypatientswithanginapectoris.4.Gastrodinsustainedreleasetabletsaresafeinthetreatmentofanginapectoris,anditsresearchandclinicalapplicationcanbefurtherdeepened.Subjectwords:Gastrodin;Antihypoxia;Anginapectoris;Seattleanginaquestionnaire;SODVIII 缩略词表缩略词英文全称中文名称ASAnginalstability心绞痛稳定状态AFAnginalfrequency心绞痛发作情况CHDCoronaryheartdisease冠心病DCDiseasecognition疾病认知程度GASGastrodin天麻素GSHGlutathione谷胱甘肽GSH-PXGlutathioneperoxidase谷胱甘肽过氧化物酶H202Hydrogenperoxide过氧化氢Hbhemoglobinconcentration血红蛋白浓度LDLacticacid乳酸LDHLacticdehydrogenase乳酸脱氢酶MDAMalondialdehyde丙二醛PLphysicallimitation躯体活动受限程度PO20xygenpartialpressure氧分压PO2/FIO20xygenationindex氧合指数RCRhodiolacrenulata红景天SAQSeattleanginaquestionnaire西雅图心绞痛量表SO2Bloodoxygensaturation血氧饱和度SODSuperoxidedismutase超氧化物歧化酶TCMTraditionalChineseMedicine中医药TSTreatmentsatisfaction治疗满意程度IX 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察前言天麻是一味名贵的上品中药材，《神农本草经》中对其功效描述为：“主恶气，久服益气力，长阴肥健”。临床上，天麻多用于治疗头痛、眩晕、[1]肢体麻木、风湿痹痛、小儿惊风、癫痫、抽搐等。除药用外，具有药食同源性的天麻还有很好的保健作用，几千年来深为我国人民喜爱。天麻素是通过现代科学方法发现并提纯出的天麻的有效活性成分之一,化学名为[2]对羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷,又称天麻苷。近年来，对于天麻素药理作用的研究逐渐深入并拓展，天麻素被证实对中枢神经及心血管系统具有[3-6]良好的保护。现代研究表明：天麻素有广泛的神经保护作用，能够有效地减轻脑缺血再灌注损伤，防治部分中枢神经系统退行性疾病，抑制神经性疼痛，兼有镇静催眠、抗衰老等多种功效，可通过多种机制对神经元起到保护作用。在心血管方面，天麻素能通过抑制炎症和氧化应激反应、增强清除氧自由基能力、抑制细胞内钙超载等机制明显减轻心肌缺血再灌[7-9]注损伤；天麻素还可以降低血压，改善心肌供血、血液黏度，调节脂[10-12]质代谢和延缓动脉粥样硬化形成。目前，国内外尚无系统的天麻素抗缺氧功效研究。本课题设计常压密闭缺氧耐力实验、急性减压缺氧耐力实验、减压缺氧实验三个动物实验联合，对天麻素抗缺氧的药理作用进行探索：前两个实验通过比较各组动物存活时间、存活率从动物的整体水平考察天麻素的抗缺氧功效，最后一个实验从动脉血气分析，脑、心、肺组织病理变化及脑、心组织生化指标变化等方面初步探索天麻素的抗缺氧机制。[13]临床上，天麻素使用安全，不良反应少，在体内不易蓄积。现在国内仅能生产天麻素的普通剂型，如日服三次的天麻素片、天麻素胶囊，以及天麻素注射液等。常规口服制剂每日用药三次，分次用药容易产生血药浓度波谷现象，影响治疗效果。而注射制剂一是使用不便，二是由于纯度和病人个体差异，容易引起输液反应。天麻素缓释片是我们课题组将渗透[14]泵延控释技术引入传统中药制剂进行革新的产物。天麻素易溶于水，针1 湖北中医药大学2018届硕士学位论文对这一特点，天麻素被制成缓释片。一方面，药物的作用时间得到延长；另一方面，血药浓度波动减小，能够更好的发挥治疗效果。不仅如此，服药次数的减少使患者的依从性更好。天麻素缓释片为我院（中国人民解放军武汉总医院）自主研发，已获得军队医疗机构制剂批准文号——总制字（2016）F602008，被应用于临床。关于天麻素缓释片的临床应用，我们课题组已经证实其对高危后循环短暂性脑缺血发作、后循环缺血性眩晕、偏头痛、老年单纯收缩期高血压、[15-21]颈源性头痛、脑外伤后综合征、原发性三叉神经痛等具有良好的疗效。临床使用过程中，我们观察到患者服用天麻素缓释片后不但头晕头痛症状缓解，而且心绞痛症状亦有改善，结合现代药理研究中发现天麻素对心肌[7-9]细胞缺血再灌注损伤具有保护作用，我们推测天麻素缓释片治疗冠心病心绞痛可能具有一定疗效。冠状动脉性心脏病简称为冠心病（coronaryheartdisease，CHD），冠状动脉粥样硬化性心脏病归属于其中。该病的发生与冠状动脉粥样硬化密切相关，最终导致冠脉血管腔狭窄、痉挛或阻塞。当心肌缺血缺氧时会发作心绞痛，而当心肌坏死时则发展为心肌梗塞。40岁以上的中老年人患本病比较多见，性别上男多于女，患病人群中脑力劳动者占绝大比例。随着我国经济建设发展、居民生活水平提高、饮食习惯改变及人口老龄化，冠心病成为严重危害人类健康的常见病，不但其发病率和死亡率逐年递增上涨，发病年龄也日趋年轻化。据国家卫生和计划生育委员会统计年鉴2016报告，近13年来(2002～2015年)我国居民冠心病死亡率快速增加。2002年城市冠心病死亡率39.56/10万，2015年升至110.67/10万；农村从2002年的27.57/10万升至2015年的110.91/10万，已略高于城市[22]水平。年龄60岁以上的老年患者在冠心病人群中占很大比例，国内[23]外研究资料表明:20世纪80年代以来，老年冠心病患者占冠心病人群总体的64％～87％。冠心病心绞痛属祖国医学“胸痹”、“心痛”范畴，在《素问·缪刺论》中该病又有“卒心痛”、“厥心痛”的称法。中医归纳其主症特点为“胸部闷痛、甚则2 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察胸痛彻背、喘息不得卧”，病情轻者仅感觉胸闷如窒，呼吸欠畅；病情重者则有胸痛，严重者心痛彻背，背痛彻心。胸痹的临床表现最早记载于《内经》。《灵枢·五邪》直指胸痹病位：“邪在心，则病心痛”。《素问·脏气法时论》则具体描述了胸痹发作的症状特点：“心病者，胸中痛，胁支满，胁下痛，膺背肩胛间痛，两臂内痛”。在临床试验中，通过对比老年冠心病心绞痛患者治疗前后西雅图心绞痛量表（SAQ）评分、中医证候评分及抗氧化指标：超氧化物歧化酶（SOD）的水平变化各方面评估我院自主研发的天麻素缓释片治疗冠心病心绞痛的临床疗效。课题旨在深入探索天麻素的抗缺氧功效，为相关分子生物学研究打下基础；并通过对天麻素缓释片治疗老年冠心病心绞痛的临床观察，拓展天麻素的临床应用范畴，希望为中医中药防治缺血性心脏病提供新思路。3 湖北中医药大学2018届硕士学位论文正文1动物实验1.1常压密闭缺氧耐力实验1.1.1实验动物SPF级雄性BALB/c小鼠100只（用于常压密闭缺氧及急性减压缺氧两个实验，每个实验各50只），体重18～22g，购于兰州大学动物科（许可证号：SCXK（甘）2013-0002），实验动物质量合格证号：No：62000800000125。实验动物购回后饲养于兰州军区总医院动物实验中心(许可证号：SCXK（军）2012-0029)，饲养适应3天。动物饲养室的环境为恒温（21-23℃）、恒湿（45%-65%）、每日12小时明暗周期光照。动物给与全价颗粒饲料喂养。整个饲养过程中动物自由进食和饮水。1.1.2药物与试剂天麻素原料药（浙江诚意药业公司，产品批号：0601-2015-07006）；红景天胶囊（西藏军区红景天研制中心，产品批号：140601）；钠石灰（北京德尔利钠石灰厂，生产批号：20160402）。1.1.3分组与给药将50只雄性BALB/c小鼠按照随机数字表法分为5组：空白模型（M）组、红景天（RC）阳性对照组、天麻素低剂量（GAS-L）组、天麻素中剂量（GAS-M）组、天麻素高剂量（GAS-H）组，每组10只。按照体表面积折算法，将红景天胶囊的动物给药剂量按照药用说明书进行换算，最终红景天组给药剂量为400mg/kg。参考天麻素口服片剂量及相关文献[9,18-19]并结合课题组前期实验，设置天麻素低、中、高剂量组给药剂量分别为50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg。M组给与注射用水，红景天胶囊掰开取药粉于研钵中研细，溶于注射用水中，天麻素直接溶于注射用水，所有药液均每次现配现用。每天上午9点对5组小鼠按照0.1ml/10g灌胃处理，连续7天。4 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察1.1.4主要实验器材250ml广口瓶、凡士林、纱布、滤纸、秒表。余见表1。表1常压密闭缺氧耐力实验主要仪器仪器厂家AE200电子分析天平瑞士METTLER集团JD200-2分析天平沈阳龙腾电子有限公司BP210S电子天平荷兰赛多利斯有限公司Vortex5涡旋仪海门市其林贝尔仪器1.1.5实验方法实验前称取钠石灰5g，用纱布包好，放入广口瓶中，用于吸收小鼠呼吸产生的二氧化碳与水分。裁剪合适大小的滤纸，垫于瓶中，用于吸收小鼠的尿液与粪便，在广口瓶瓶盖上抹好凡士林。在第7天给药50min后，将小鼠逐个放入广口瓶中，盖好瓶盖密闭，开始计时并做记录，当小鼠呼吸停止时结束计时并再次记录，最终统计各个小鼠在密闭实验瓶中的存活时间，计算延长率。延长率=[（给药组动物平均存活时间-M组动物平均存活时间）/M组动物平均存活时间]×100%。1.1.6统计学方法应用SPSS19.0统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验。组间均数比较采用单因素方差分析。1.1.7实验结果小鼠刚放入广口瓶中时尚活泼好动，呼吸平稳，一段时间后开始四处刨抓寻找出路，呼吸加深加快后变为浅快，最后瘫倒，大口呼吸，伴随肢体抽搐，呼吸节律变慢至停止。小鼠死亡后拔开各个广口瓶瓶塞，可以感受到明显负压，证明广口瓶密闭性良好，各数据均有效。M组的平均存活时间为32.29分钟，与M组相比，RC、GAS三个剂量组小鼠的平均存活时间均显著地延长（P＜0.01）。RC组小鼠平均存5 湖北中医药大学2018届硕士学位论文活时间达到了36.99分钟，较M组延长率为14.54%；GAS-L组小鼠平均存活时间达到了41.21分钟，较M组延长率为27.62%；GAS-M组小鼠平均存活时间达到了37.27分钟，较M组延长率为15.41%；GAS-H组小鼠平均存活时间达到了40.70分钟，较M组延长率为26.03%。与RC组相比，GAS-L组存活时间显著延长（P＜0.05）；GAS-H组存活时间也显著延长（P＜0.05）。其余组间比较差异无统计学差异（P＞0.05）。GAS低、中、高三组无明显剂量依赖性。见表2。表2天麻素对缺氧小鼠存活时间的影响（X±s，n=10）注：组别剂量（mg/kg）存活时间(min)延长率（%）与MM--32.29±2.06--**相比，RC40036.99±2.8914.54%****#p＜GAS-L5041.21±4.6827.62%**0.01；GAS-M10037.27±3.2815.41%**#与GAS-H15040.70±3.1426.03%RC#相比，P＜0.05。1.2急性减压缺氧耐力实验1.2.1实验动物1.2.2药物与试剂1.2.3分组与给药均与常压密闭缺氧耐力实验相同。1.2.4主要实验器材FLYDWC50-ⅡC低压低氧动物实验舱（贵州风雷航空军械有限公司），秒表，特制铁鼠笼，天平及涡旋仪见表1。1.2.5实验方法在末次给药50min后，将小鼠放入低压低氧动物实验舱，调整仪器参数，以20m/s速度上升，到达设定10000m海拔高度后开始计时，记录各组小鼠在1h内的死亡数量，计算存活率。6 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察1.2.6实验结果刚入实验舱时小鼠尚活泼好动，在急性减压缺氧过程中，小鼠逐渐不安，四处寻找出路，部分小鼠上下窜跳，之后站立不稳，瘫倒在地，出现抽搐、后肢蹬直，急促呼吸之后死亡。存活小鼠逐渐适应环境，不再跑动，最终匍匐在原地，保持急促平稳呼吸的状态。M组小鼠在计时8分钟内全部死亡，RC及GAS三组在1小时内仍有小鼠存活。最终，急性减压缺氧造成M组小鼠死亡10只（存活率0%），RC组死亡9只（存活率10%），GAS-L组死亡8只（存活率20%），GAS-M组死亡8只（存活率20%），GAS-H组死亡7只（存活率30%）。见表3。表3天麻素对缺氧小鼠存活率的影响（n=10）组别剂量（mg/Kg）存活只数存活率M--00%RC400110%GAS-L50220%GAS-M100220%GAS-H150330%1.3减压缺氧实验1.3.1实验动物SPF级雄性Wistar大鼠60只，体重200～220g，购于兰州大学动物科（许可证号：SCXK（甘）2013-0002），实验动物质量合格证号：No：62000800000131。实验动物购回后饲养于兰州军区总医院动物实验中心(许可证号：SCXK（军）2012-0029)，饲养适应3天。动物饲养室的环境为恒温（21～23℃）、恒湿（45%～65%）、每日12小时明暗周期光照。动物给与全价颗粒饲料喂养。整个饲养过程中动物自由进食和饮水。1.3.2药物与试剂天麻素（浙江诚意药业公司，产品批号：0601-2015-07006）；红景天胶囊（西藏军区红景天研制中心，产品批号：140601）；水合氯醛；甲醛固定液（甲醛10%）。具体生化试剂见表4，试剂盒均购于南京建成生7 湖北中医药大学2018届硕士学位论文物工程研究所。表4减压缺氧实验所用试剂及批号试剂货号批号考马斯亮蓝蛋白试剂盒A045-220161203BCA法蛋白定量试剂盒A045-320161212乳酸LDA019-220161220乳酸脱氢酶LDHA020-120161219丙二醛MDAA003-120161220过氧化氢H2O2A06420161219谷胱甘肽GSHA006-120161209谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PxA005201612201.3.3分组与给药将60只雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为6组：常氧模型（N）组，缺氧模型（M）组，RC组，GAS-L、GAS-M、GAS-H三个剂量组，每组10只。按照体表面积折算法，将小鼠实验给药剂量进行换算，RC组给药剂量为280mg/kg；天麻素低、中、高剂量分别为35mg/kg、70mg/kg、105mg/kg。N组与M组均给与注射用水，红景天胶囊掰开取药粉于研钵中研细，溶于注射用水中，天麻素直接溶于注射用水，所有药液均每次现配现用。6组大鼠于每天上午9点按照1ml/200g灌胃，连续7天。1.3.4主要实验器材（见表5）表5减压缺氧实验主要仪器仪器厂家大型低压氧舱兰州军区兰州总医院全军高原环境损伤防治重点实验室血气分析仪丹麦雷度ABL80POLYTRON®PT1200电动匀浆器瑞士KinematicaAG公司Spectramaxi3多功能酶标仪美国MolecularDevices公司L486型-80℃超低温冰箱海尔Biochemical仪器有限公司8 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察DK-8A型电热恒温水槽上海精宏实验设备有限公司冷冻高速离心机德国赫利氏公司Vortex5涡旋仪海门市其林贝尔仪器1.3.5实验方法运用大型低压氧舱模拟缺氧环境，设置条件为：上升速度10m/s，下降速度20m/s，海拔8000m，维持12h(氧气8%，氮气92%，气压0.035MPa)。第7天给药后，将除常氧模型组大鼠外的其他5组大鼠放入低压氧舱的动物饲养舱中，缺氧12h。为了减少大鼠因复氧而产生一系列机体代偿反应对实验结果造成的影响，实验人员进入缓冲舱，在模拟海拔3500m环境下将大鼠麻醉，之后解剖，经腹主动脉取血，测血气；收集大鼠脑、心、肺组织，先于生理盐水中洗去血迹，再用滤纸吸干多余水分。取每组中2套器官泡于甲醛固定液中，送往兰州军区兰州总医院病理科，进行石蜡包埋、组织切片及HE染色。其余8只脑、心组织装入EP管中，冻存于-80℃超低温冰箱，之后集中统一按照试剂盒说明做相关生化指标测定。1.3.6统计学方法参见常压密闭缺氧耐力实验。1.3.7实验结果①大鼠动脉血气测定结果缺氧12小时后，与N组相比，M组大鼠PO2、SO2、PO2/FIO2明显-+下降（P＜0.01）；HCO3及Na离子浓度明显减低（P＜0.01）；LD及Hb含量明显上升（P＜0.01）。RC组与缺氧模型组相比PO2、SO2、PO2/FIO2+-明显上升（P＜0.01）；Na离子浓度明显上升（P＜0.05），而HCO3及Hb与缺氧相比无明显差异，LD含量明显下降但仍高于常氧水平（P＜0.01）。与缺氧模型组相比，GAS-L组PO2、SO2、PO2/FIO2明显上升（P-+＜0.01）；HCO3明显上升但仍较常氧水平偏低（P＜0.01），Na离子浓度明显上升（P＜0.05），Hb与缺氧相比无明显差异，LD含量明显下降但仍高于常氧水平（P＜0.01）。与缺氧模型组相比，GAS-M及GAS-H组9 湖北中医药大学2018届硕士学位论文-PO2、SO2、PO2/FIO2无明显改善；HCO3明显上升但仍较常氧水平偏低+（P＜0.01）；Na离子浓度明显上升（P＜0.01或P＜0.05）。GAS-M组LD及Hb与M组比无差异。与M组相比，GAS-H组LD显著下降但仍较常氧水平偏高（P＜0.01或P＜0.05）；Hb显著升高甚至高于常氧水平（P＜0.01）。见表6。表6各组减压缺氧大鼠动脉血气指标变化（χ±s,n=8）组别剂量（mg/kg）PO2(mmHg)SO2(%)PO2/FIO2(mmHg)N--72.94±3.3793.79±1.07343.81±21.86******M--63.21±3.7890.99±1.64313.56±16.27######RC28078.27±7.3994.76±1.40374.50±35.41#####GAS-L3570.8±3.0194.11±0.91335.51±17.09******#GAS-M7062.96±1.7592.06±0.66298.31±11.59******##GAS-H10561.34±1.9691.89±1.10291.19±11.33+-组别Na（mmol/L)HCO3(mmol/L)LD(mmol/L)Hb(g/L)N137.87±0.4322.43±0.743.03±0.41145.43±2.32********M136.28±1.3616.83±0.575.53±0.44149.86±1.81#****##**RC138.83±1.7816.88±0.774.33±0.41150.33±2.69#**##**##**GAS-L138.7±2.3918.1±0.844.66±0.61151.57±5.15##**##***GAS-M137.99±0.6518.51±0.525.46±0.28149.00±2.73#**##**#**##GAS-H138.2±1.2419.16±1.274.8±0.69153.13±2.03***###注：与N相比，P＜0.05,p＜0.01；与M相比，P＜0.05,p＜0.01②大鼠脑、心、肺组织病理变化常氧模型组脑组织细胞形态正常，血管清晰可见，细胞形态完好；缺氧模型组脑组织部分细胞溶解，血管周围间隙明显扩大，细胞有水肿，细胞核淡染增大，细胞间间质变大；RC及GAS三个剂量组与常氧模型组相比脑细胞周围仍有少量肿胀，血管周围间隙增大，少部分细胞核淡染增大，但细胞肿胀及血管周围间较缺氧模型组减小。见图1。10 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察常氧模型组心肌细胞形态正常，结构完好，心肌纤维排列整齐。缺氧模型组心肌细胞出现水肿，横纹结构排列不整齐，出现心肌细胞核固缩、凝聚现象。RC及GAS三个剂量组与缺氧模型组相比心肌纤维间隙减小，纹理较整齐，细胞水肿减轻，但与常氧模型相比仍有差异，仍有细胞核固图1大鼠减压实验各组脑组织病理变化（HE×200）缩、凝聚现象，部分横纹结构排列仍不整齐。见图2。常氧模型组大鼠肺组织结构正常，肺泡腔结构规则完整，呈空泡状薄壁结构，肺泡间隔清晰，无肺间质水肿及血管扩张充血，无炎性细胞浸润。11 湖北中医药大学2018届硕士学位论文12 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察缺氧模型组肺组织不仅肺泡壁明显增厚，肺泡腔狭小，肺间质水肿，肺泡塌陷，而且肺泡血管出现扩张充血，此外可以观察到炎性细胞浸润。RC及GAS三个剂量组部分肺泡壁较常氧模型组稍有增厚，但肺泡腔缩小、肺间质水肿、肺泡血管扩张充血情况较缺氧模型组明显改善。见图3。③大鼠脑组织生化指标测定图3大鼠减压实验各组肺组织病理变化（HE×200）缺氧12小时后，与常氧模型组相比，M组MDA、H2O2含量显著上升（P＜0.01），GSH、GSH-Px水平显著下降（p＜0.01），缺氧对M组大鼠大脑组织指标产生了影响。与M组相比，RC组MDA含量下降但无统计学差异，仍高于常氧模型组水平（p＜0.01）；H2O2显著下降、GSH显著上升（p＜0.01），且与常氧模型组相比无差异；GSH-Px明显上升甚至高于正常水平（p＜0.01）。GAS三个剂量组MDA含量均较M组显著下降，但仍高于N组常氧模型水平（p＜0.01）；H2O2含量较M组无明显统计学差异，但从均值来看有明显下降的趋势；GSH含量较M组显著上升（p＜0.01）；GSH-Px活力较M组显著提高。（p＜0.01或p＜0.05）。GAS三个剂量组之间未显现出明显的量效关系。见表7。13 湖北中医药大学2018届硕士学位论文表7天麻素对缺氧大鼠脑指标的影响（n=8，x±s）组别MDA含量H202含量GSH含量GSH-Px活力(nmol/mgprot)(mmol/gprot)(mgGSH/gprot)(1unit)N0.52±0.094.86±0.9813.82±1.1237.38±5.02********M0.74±0.037.20±1.7212.02±1.2230.65±3.40**####**##RC0.67±0.114.20±1.1514.11±1.0945.35±3.12**##**####GAS-L0.68±0.056.73±0.7814.36±0.6136.46±4.00**#####GAS-M0.62±0.055.85±0.9914.92±1.1637.31±6.04**#*##**##GAS-H0.69±0.045.82±1.0215.23±0.7649.88±4.81***###注：与N相比，P＜0.05,p＜0.01；与M相比，P＜0.05,p＜0.01④大鼠心组织生化指标测定缺氧12小时后，与N组相比，M组LD、LDH、MDA及H2O2水平显著上升，GSH及GSH-Px水平显著下降（p＜0.01），缺氧对M组大鼠心脏组织指标产生了影响。与M组相比，RC组LD及LDH无明显改善，仍显著高于常氧模型水平，但MDA及H2O2明显下降，GSH及GSH-Px水平明显上升（p＜0.01）；GAS-L组LD、MDA、H2O2显著下降，GSH及GSH-Px水平明显上升（p＜0.01），LDH均值上看有下降趋势，但无统计学意义；GAS-M组LD明显下降，但仍高于N组水平（p＜0.05），LDH均值低于N组平均值，但无统计学意义，MDA、H2O2显著下降，GSH及GSH-Px水平明显上升（p＜0.01或p＜0.05）；GAS-H组LD、LDH、MDA及H2O2水平显著下降，GSH及GSH-Px水平明显上升（p＜0.01或p＜0.05）。GAS三个剂量组之间无明显量效关系。见表8。表8天麻素对缺氧大鼠心指标的影响（n=8，x±s）组别LD含量（mmol/gprot)LDH活性(U/gprot)MDA含量(nmol/mgprot)N0.53±0.072827.26±329.901.37±0.14******M0.78±0.063879.31±466.481.85±0.23****##RC0.76±0.093523.46±412.931.29±0.18##*##GAS-L0.53±0.093350.88±552.721.24±0.1214 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察*#**##GAS-M0.65±0.123604.77±507.531.44±0.25#####GAS-H0.56±0.112831.33±520.131.26±0.36组别H202含量(mmol/gprot)GSH含量(mgGSH/gprot)GSH-Px活力(1unit)17.31±2.334.03±0.42275.64±30.34N******M25.07±5.063.20±0.55229.13±26.25##**####RC15.08±2.185.22±0.48281.11±18.09##**####GAS-L15.13±2.045.43±0.57283.06±22.11##**###GAS-M17.40±0.726.77±1.15263.10±34.08##**###GAS-H16.56±3.176.92±1.08286.35±47.77***###注：与N相比，P＜0.05,p＜0.01；与M相比，P＜0.05,p＜0.012临床试验2.1临床资料选取2017年10月至2018年02月中国人民解放军武汉总医院干部病房及心内科住院部老年冠心病心绞痛的患者60例作为研究对象。将入选的患者按照就医的先后顺序随机分为两组：观察组和对照组，每组30例。试验过程中由于各种原因导致观察组脱落2例（其中1例因受凉后肺部感染并发心衰，感染逐渐加重而中止试验；1例服药研究过程中自行停药），剩余58例老年冠心病心绞痛患者入选（对照组30例，观察组28例）。入选患者的年龄均在60至90岁之间，平均74.20±8.83岁。2.2诊断标准2.2.1西医诊断标准入选病例需符合2007年中华医学会心血管病学分会颁布的《慢性稳[24]定性心绞痛诊断与治疗指南》。心绞痛严重度的分级参照加拿大心血管学会(CCS)心绞痛严重度分[25]级:15 湖北中医药大学2018届硕士学位论文Ⅰ级：一般日常活动（如步行和登楼）不受限，费力、速度快、长时间的体力活动引起发作；Ⅱ级：日常体力活动稍受限制，在饭后、情绪激动、寒冷时受限制更明显；平地步行200m以上或登楼一层以上受限；Ⅲ级：日常体力活动明显受限制，以一般速度在一般条件下平地步行200m内或上一层楼即可引起心绞痛发作；Ⅳ级：轻微活动即可引起心绞痛，甚至休息时也可发作。2.2.2中医诊断标准参照2011年国家食品药品监督管理局颁布的《中药、天然药物治疗冠心病心绞痛临床研究指导原则》，入选病例的中医证候诊断标准需符合[26]卫生部2002年制订发布的《中药新药临床研究指导原则》,主证为胸痛、胸闷，次证有2项并且舌脉相符者，即可诊断，各证型证候如下：①心血瘀阻证：胸部刺痛、绞痛，固定不移，痛引肩背或臂内侧，胸闷，心悸不宁。唇舌紫暗，脉细涩。②气虚血瘀证：胸痛胸闷，心悸气短，神倦乏力，面色紫暗，舌淡紫，脉弱而涩。③气滞血瘀证：胸痛胸闷，胸胁胀满，心悸，唇舌紫暗，脉涩。④痰阻心脉证：胸闷如窒而痛，或痛引肩背，体胖多痰，身体困重。舌苔浊腻或滑，脉滑。⑤阴寒凝滞证：胸痛彻背，感寒痛甚，胸闷气短，心悸，畏寒，四肢欠温，面白。舌苔白，脉沉迟或沉紧。⑥气阴两虚证：胸闷隐痛，时作时止，心悸气短，倦怠懒言，头晕，失眠多梦。舌红少苔，脉弱而细数。⑦心肾阴虚证：胸痛胸闷，心悸盗汗，心烦不寐，腰膝酸软，头晕耳鸣。舌红少津，脉沉细数。⑧阳气虚衰证：胸闷气短，甚则胸痛彻背，心悸汗出，畏寒，肢冷，下肢浮肿，腰酸无力，面色苍白，唇甲淡白或青紫。舌淡白或紫暗，脉沉细或沉微欲绝。2.3病例标准2.3.1纳入标准①入选病例需同时满足冠心病心绞痛的西医诊断标准以及中医胸痹的诊断标准；②年龄在60至90岁之间，性别不限，自愿作为受试对象，遵守试16 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察验规则及要求；③心绞痛严重度参照CCS标准，病情分级属于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级者；④心绞痛每周发作的次数至少2次；⑤未参与其他临床试验者。2.3.2排除标准①年龄在18岁以下或90岁以上的患者；②心绞痛分级为IV级者；③经各项检验和检查证实为冠心病急性心肌梗死或者其他类型心脏疾病；或者其他病因引起胸痛如：甲亢、神经官能症、胆心病、颈椎病、胃及食管反流等；④合并恶性高血压、重度心肺功能不全、严重心衰、重度心律失常，合并重度肝、肾功能损害（血浆ALT水平＞正常上限的3倍，血浆肌酐水平≧442μmol/L），合并内分泌、造血系统等原发性疾病者；⑤在试验前3个月之内有过心肌梗死及有梗死前症状，行介入治疗者；⑥由于左束支传导阻滞、心肌肥厚、电解质紊乱等引发患者心电图ST-T改变者；⑦应用心脏起搏器者；⑧过去5年内患恶性肿瘤的患者，包括白血病和淋巴瘤；⑨过敏体质及对多种药物过敏者；⑩病情与纳入标注不符合，没有按照试验要求服药，没有办法判定疗效，疗效或安全性判断受资料不全等影响者。2.3.3脱落或终止试验标准①不符合西医、中医诊断标准及纳入标准而被误纳入者；②受试者服药依从性差，或中途自行加减剂量、停药、换药或是随访资料不全者；③治疗中出现严重不良反应或不良事件不宜继续治疗者；④治疗期间出现病情加重或由于自身合并的其他疾病进展，需要紧急采取救治措施，严重影响本次试验有效指标的评估者；17 湖北中医药大学2018届硕士学位论文⑤主动要求退出临床试验者。2.4研究方法将符合入选标准的冠心病心绞痛患者按照就诊的先后顺序分为对照组和观察组，在针对既往病史药物治疗(如高血压患者给予降压治疗、糖尿病患者给予相应降糖治疗等)的基础上，两组患者均给予抗心绞痛的治疗(包括β受体阻滞剂、硝酸酯类药物、钙离子拮抗剂等)。另外，观察组在此基础上，口服天麻素缓释片150mg,1片/次，2次/天。入选人员于试验开始时及服药4周治疗结束时完成西雅图心绞痛量表及中医证候评分量表，空腹肘部静脉抽血，于广州军区武汉总医院检验科进行血常规、尿常规、肝肾功能检测，提取离心后的上层血清，装入EP管，冷冻于-80℃冰箱，于武汉总医院医学实验中心完成血清SOD测定。2.5观察方法2.5.1疗效观察入选患者在开始临床试验时完成西雅图心绞痛量表、中医证候量表评分，取血清冻存，在第4周试验结束时对再次对患者进行两个量表的测评，取血清冻存。冻存血清集中统一测定SOD含量。2.5.2安全性观察观察治疗过程中患者生命体征（体温、呼吸、心率、血压）、血常规、肝肾功能、凝血功能等，并记录患者服药过程中出现的不良反应。2.5.3疗效评定西雅图心绞痛量表：西雅图心绞痛量表一共有19个条目，分别归属于5大类别：第1题反应躯体活动受限程度(PL)，第2题反应心绞痛稳定状态(AS)，第3、4题反应心绞痛发作情况(AF)，第5、6、7、8题反应治疗满意程度(TS)，第9、10、11题反应疾病认知程度(DC)。每条项目中不同水平按照起始分1分对应最低水平而递增分数。分别对5大类别中的具体条目进行统计和积分转换。由于每个项目所反应的问题不同，所以不产生19条项目的总分。具体标准积分转换的公式如下：标准积分=(实际得分-该方面最低得分)/(该方面最高分-该方最低18 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察分)×100。西雅图心绞痛量表要求在5min内完成，这样不仅可以提高反应速率，而且能根据患者第一反应得到客观真实评判。最终得分越高代表机能功能状态以及生活质量越好。中医证候疗效判定标准：显效：临床症状、体征明显改善，证候积分减少≥70％。有效：临床症状、体征均有好转，证候积分减少≥30％，＜70%。无效：临床症状、体征无明显改善，甚或加重，证候积分减少＜30％，＞0。加重：临床症状、体征均有加重，证候积分减少＜0。2.6标本采集和测定2.6.1标本采集和保存在治疗开始之前及治疗4周结束时，采集全部受试者晨起空腹的肘部静脉血，采用黄色盖头促凝管收集血液3～5ml，标本送入广州军区武汉总医院检验科离心检验（3000r/min离心10分钟），提取生化管内上层血清，装入EP管内，做好标记，将其置于医学实验中心-80℃冰箱冷冻保存。全部标本均质地清澈，颜色淡黄、无溶血、无悬浮物、无反复冻融。2.6.2标本测定所冻存的血清统一于武汉总医院医学实验中心完成测定。采用黄嘌呤氧化酶法测定，具体实验方法参照南京建成生物工程研究所SOD试剂盒（货号A001-1，生产批号20180109）说明书操作。2.7统计学方法使用SPSS19.0软件，计量资料统计方法与常压密闭缺氧耐力实验相同；计数资料采用卡方检验。检验水准为α=0.05，若P＜0.05（或P＜0.01），则认为差异具有统计学意义。2.8研究结果2.8.1基本资料比较将对照组与观察组的患者的基本资料如性别、年龄进行统计学分析比19 湖北中医药大学2018届硕士学位论文较（性别数据进行卡方检验，年龄数据进行独立样本T检验），结果无显著性差异，表明两组患者性别、年龄具有可比性（P＞0.05），见表9。表9两组患者性别、年龄评分比较（x±s）组别N（例）男性（例）女性（例）平均年龄（岁）对照组30191173.57±9.46观察组28171174.07±8.232.8.2西雅图心绞痛量表（SAQ）评分治疗4周后，对照组和观察组SAQ评分在五个大方面各有不同程度的改善。其中，对照组除PL无明显变化外，AS、AF、TS、DP均与治疗前相比明显提高（P＜0.05或P＜0.01）。而观察组PL评分均值有上升趋势，但无统计学差异，AS、AF、TS、DC与治疗前比较明显改善，且与对照组相比改善更为突出，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。见表10。表10两组患者SAQ评分比较（x±s）组别时间PLASAF治疗前64.52±16.8346.67±8.6460.37±17.02对照组***治疗后65.41±17.1566.07±15.5367.74±19.35治疗前67.73±15.4145.83±9.4863.76±15.08观察组**△**△△治疗后69.84±18.2271.11±10.7272.62±14.78组别时间TSDC治疗前49.17±15.2350.63±17.32对照组***治疗后55.34±14.6160.24±14.98治疗前51.29±14.8951.79±16.36观察组**△△**△△治疗后62.50±14.9368.12±18.02***△△△注：与治疗前相比p﹤0.05、p﹤0.01；观察组治疗后与对照组治疗后比较p﹤0.01、p﹤0.01。20 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察2.8.3中医证候量表评分对照组、观察组服药一个疗程4周后，中医证候评分均较治疗前有明显的改善（P＜0.01），与对照组相比，观察组治疗后中医证候评分改善较对照组更为明显，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表11。表11两组中医证候量表评分比较（x±s）组别N（例）治疗前治疗后**对照组3015.63±6.3611.84±4.41**△观察组2814.82±5.1210.27±4.61***△注：与治疗前相比p﹤0.01、p﹤0.05；观察组治疗后与对照组治疗后比较p﹤0.05。2.8.4心绞痛症状疗效评价对观察组与对照组患者分别于治疗前及治疗4周后，按照中医证候评2分量表改善情况统计治疗效果如下，经卡方检验分析，χ=2.580，P＞0.05，观察组与对照组疗效比较没有统计学差异，但观察组的总有效率高于对照组。见表12。表12中医证候疗效评分比较（n/%）组别显效有效无效加重总有效率对照组（n=30）2217076.67%观察组（n=28）4195085.71%注：总有效率=[（显效+有效）/总例数]×100%。2.8.5患者血清SOD测定治疗4周后，对照组血清SOD活性较治疗之前均值稍有提高，但无统计学差异，观察组血清SOD活性较本组治疗之前及对照组治疗之后均有明显提高，差异有统计学意义（P＜0.01）。（表13，图4）表13治疗前后血清SOD比较（x±s）单位：U/ml组别N（例）治疗前治疗后对照组3089.31±17.9798.26±14.39**△△观察组2887.97±13.28109.17±17.06**△△注：与治疗前相比p﹤0.01；观察组治疗后与对照组治疗后比较p﹤0.01。21 湖北中医药大学2018届硕士学位论文2.8.6药物安全性评价临床试验过程中，两组患者精神、食欲、睡眠及大小便情况未出现明显异常，生命体征平稳，血常规、肝肾功能、凝血功能等生化指标均无异常改变。接受试验的患者没有出现药物过敏或者相关不良反应。总结天麻素缓释片在临床使用中具有较高的安全性。22 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察讨论1天麻素抗缺氧功效动物实验结果分析动物实验分为常压密闭缺氧耐力实验、急性减压缺氧耐力实验、减压缺氧实验三个单元，通过这三个实验的联合验证，对天麻素抗缺氧的药理作用进行探索：前两个实验根据动物存活时间、存活率从动物整体水平考察天麻素的抗缺氧功效，最后一个实验从血气分析，脑、心、肺组织病理变化及脑、心组织生化指标变化等方面初步探索天麻素的抗缺氧机制。缺氧会导致机体细胞内氧分压严重降低，线粒体用氧障碍并影响能量[27]代谢，中枢神经系统、呼吸系统以及心血管系统都会因缺氧而产生严重损害。在常压密闭缺氧耐力实验中，密闭的广口瓶中氧气含量随小鼠呼吸消耗而逐渐减少，RC及GAS三个剂量组较空白模型组小鼠的存活时间均显著延长；在急性减压缺氧实验中，1小时内RC及GAS三个剂量组较空白模型组小鼠的存活率更大。这两个实验均能初步证明RC及GAS在动物整体水平有良好的抗缺氧功效。在减压缺氧实验中，大鼠经12小时缺氧，动脉血气分析中氧分压、血氧饱和度、氧合指数均显著下降，与M组相比，GAS-L组动脉血中氧含量明显提高，从而能直接影响血液对组织的供氧。当机体缺氧时，血液[28-29]+中的电解质紊乱会发生紊乱，Na内流增加导致水从细胞外进入到细[30]+胞内，造成细胞毒性水肿，缺氧模型组细胞外Na明显减少，而RC与+GAS三个剂量组Na含量显著升高，与常氧水平无异，说明RC与GAS+均能够通过减少细胞Na内流从而减轻细胞水肿。大鼠血液的酸碱平衡也-因缺氧而被打乱。HCO3是调节机体酸碱平衡的重要缓冲物质之一，缺氧-后由于体内酸性代谢产物增加，HCO3含量相应减少，实验中GAS各剂-量组较M组HCO3均明显提高，但仍然低于N组水平。LD是无氧呼吸糖酵解的产物，M组LD明显升高，与M组相比，RC、GAS-L组乳酸堆积均明显减少，但仍然显著高于常氧水平。Hb是体内负责运载氧的一种蛋白质，缺氧12h后，进入低压氧舱组动物Hb较N组明显升高，RC、23 湖北中医药大学2018届硕士学位论文GAS-L与GAS-M组与M组比较差异无统计学意义，但均值升高，GAS-H组较M组明显升高，考虑RC、GAS能通过提高Hb含量，从而提高对氧的结合、存储、运输和释放，使氧在血液中的运输、组织间的交换以及[31-32]在细胞内氧化过程增强，以满足组织代谢和维持机体正常生理功能。从动物组织病理变化来看，缺氧后大鼠的脑、心、肺组织均产生了相应的病理损伤，均有细胞及组织水肿，血管扩张。而RC及GAS能不同程度的减轻组织因缺氧而发生的结构损伤改变。选取脑和心组织进行相关指标检测。H2O2和MDA是自由基代谢和[33-34]细胞损伤的重要指标，其含量的多少与机体受氧化损伤的程度呈正相关。GSH和GSH-Px是体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，能减轻细[35-37]胞和组织的氧化应激损伤。缺氧12小时后，大鼠脑和心组织中H2O2和MDA显著上升，GSH和GSH-Px显著下降，与缺氧模型组相比，RC及GAS三个剂量均能不同程度的显著改善这些指标情况，使H2O2和MDA显著下降，GSH和GSH-Px显著上升。在心肌组织指标测定中，加测了LD及LDH两个项目。LD和LDH是反映无氧呼吸糖酵解的两个重要指标。LD既是糖无氧酵解的产物，又是糖异生的原料之一，LD的累积[38]可导致细胞质酸化，进而破坏液泡膜和线粒体结构。LDH主要使乳酸脱氢生成丙酮酸，便于利用乳酸氧化供能，这一对指标敏感地反映了能量代谢的情况。缺氧12小时后，大鼠心肌组织中LD及LDH比常氧模型组显著升高，RC组与M组相比并无差异，而GAS三个剂量组中LD含量较M组均显著下降，GAS-H组LDH活性较M组显著下降，与常氧水平无差异。总结以上三个动物实验，天麻素能够延长密闭缺氧条件下小鼠存活时间，增加急性减压缺氧条件下小鼠存活率，从动物整体水平上评价具有一定抗缺氧功效。初步探索其抗缺氧机制发现天麻素能够从以下几个方面发挥抗缺氧作用：①改善缺氧所致的动脉血气变化：提高血液氧含量、减轻+Na内流所致细胞水肿、维持血液酸碱平衡、减少血液乳酸含量、提高血红蛋白浓度。②保持脑、心、肺组织细胞结构的完整性，减轻缺氧所致的24 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察水肿及血管扩张。③可通过清除自由基、减轻脂质过氧化损伤、提高抗氧化酶活性从而形成对脑和心组织的抗缺氧保护，并且减少缺氧所致心肌组织中乳酸堆积。2缺氧与心血管损伤心血管系统作为全身最重要的供血供氧系统之一，对缺氧非常敏感。缺氧对心血管系统造成的损伤以及缺氧保护作用机制的研究一直以来备受各国科研人员关注。缺氧在心血管系统病理变化的发生发展过程中扮演了重要角色，心肌需要大量能量维持其功能，缺氧时机体ATP生成减少，不能满足心肌供能消耗，使心泵供能受损。相关研究发现能量代谢障碍发生后，心肌细胞的基因结构及表达均受到影响，且心肌细胞的凋亡、坏死与心肌细胞内的[39]ATP水平密切相关。能量不足还使心肌蛋白质的分解作用大于合成作用，导致细胞断裂、变形和坏死、斑痕形成，严重影响了心肌的收缩力和[40]顺应性。缺氧除了会导致心肌细胞的损伤外，还会破坏心脏的传导通路。Danon利用共聚焦显微镜观察发现，在心脏局部缺血的大鼠实验动物模型中，连续5h的缺氧可以导致作为心室缝隙结合的主要蛋白——缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的分布和功能发生变化，导致局部缺血心肌[41]细胞间的解偶联，会诱发心脏电传导减慢，进而引起心律失常。[42]缺氧还可以导致血管重塑和细胞增殖。心血管的缺氧损伤可见于进入高原地区时，以高原性心脏病为代表，高原缺氧时机体氧饱和度下降，出现肺动脉高压以致肺循环阻力增大，右心室负荷过重，造成右心室肥厚、[43]扩张，进一步恶化发展会导致右心衰竭。缺氧对心血管系统的损伤最常见于冠心病。3西医对冠心病心绞痛的认识发生在冠状动脉的炎症、栓塞、结缔组织病、创伤和先天性畸形等都会导致心肌缺血、缺氧，他们在广义上来讲都属于冠心病的范畴。虽然如此，但冠心病的最主要病因（95%～99%）直指冠状动脉粥样硬化。到目25 湖北中医药大学2018届硕士学位论文前为止，冠状动脉粥样硬化的发病原因尚不明确，但现代医学普遍认为，本病的发生与多种危险因素有关。年龄、性别、血脂异常、高血压、吸烟、糖尿病和糖耐量异常、肥胖及家族史这些都是冠脉粥样硬化发病的高危因素。目前，对本病的发病机制有多种学说从各个角度进行了不同论述，包括脂质浸润学说、血栓形成学说、同型半胱氨酸学说、单克隆学说、干细[44]胞学说、剪切应力学说、免疫学说、损伤反应学说、炎症学说等。近年“内皮损伤学说”受到多数学者支持，该学说认为，本病是动脉对各种危险[45-46]因素损伤内膜后对内皮、内膜做出的炎症-纤维增生性反应。无症状心肌缺血（隐匿性冠心病）、心绞痛、心肌梗死、缺血性心力衰竭（缺血性心脏病）和猝死是世界卫生组织对冠心病划分的5大类别。大量的氧供为心肌能量产生的前提要求，相对于身体其他组织摄取血液氧含量仅为10%～25%而言，心肌细胞摄取血液氧含量达到了65%～75%。心肌供养量不仅取决于冠脉血流量，而且与血液的携氧能力有密切关系。心肌的氧耗和冠脉的供血既有矛盾的同一性又有矛盾的斗争性。在正常情况下，因为冠脉循环强大的储备功能，这两者通过神经调节和体液调节保持着动态的平衡。然而一旦这种平衡被打破，冠状动脉管腔出现狭窄或部分闭塞时，其扩张性减弱，血流量减少，储备功能受到影响，对心肌的供血量则相对比较固定。在此条件下，无明显活动或者休息时虽然心肌的血液供应较正常冠脉减低，但尚能应对心脏的氧耗需求，不会发生心绞痛症状。而劳动、情绪激动、饱食、受寒等刺激会使心脏负荷突然增加，导致心率增快、心肌张力和心肌收缩力增加，心肌的耗氧量也相应增加，此时冠状动脉的血供不能相应增加达到满足心肌对血液的需求的状态，就会引起心绞痛发作。冠心病心绞痛的西医治疗包括以下几个方面：(1)纠正冠心病的危险因素：对高血压、高血糖、高脂血症进行有效控制；控制体重，戒烟限酒。(2)调整生活方式：包括合理膳食、适当的体力劳动和体育活动、规律作息时间，注意劳逸结合，避免过度劳累和情绪激动。(3)药物治疗：改善冠状动脉血供和降低心肌耗氧，与此同时治疗冠状动脉粥样硬化为基本原26 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察则。硝酸酯类药、肾上腺素能β受体阻滞剂、钙通道阻滞剂这三大类是有效改善缺血、减轻症状的主要治疗药物。阿司匹林、氯吡格雷、β受体阻滞剂、他汀类药物、ACEI或ARB等可以积极预防心肌梗死、改善预后。(4)血管重建治疗：包括经皮冠状介入治疗(PCI)及冠状动脉旁路移植术[47](CABG)等。4中医对冠心病心绞痛的认识冠心病心绞痛属于祖国医学“胸痹”、“心痛”范畴，在《素问·缪刺论》中该病又有“卒心痛”、“厥心痛”的称法。胸痹的临床表现最早记载于《内经》。《灵枢·五邪》直指胸痹病位：“邪在心，则病心痛”。《素问·脏气法时论》则具体描述了胸痹发作的症状特点：“心病者，胸中痛，胁支满，胁下痛，膺背肩胛间痛，两臂内痛”。《灵枢·厥病》把心痛严重，并迅速造成死亡者，称为“真心痛”。汉代医圣张机在《金匮要略》中正式提出了“胸痹”的病名，指出“阳微阴弦”（上焦阳气不足，下焦阴寒气盛）是胸痹的病因病机，认为本病是本虚标实之证。寒邪入侵、情志失节、饮食不调、劳倦内伤、年老体虚等都是胸痹发病的密切相关因素。胸痹的病机分为虚和实两个方面，气虚、阴伤、阳衰，肺、脾、肝、肾亏虚，心脉失养为虚的表现；寒凝、血瘀、气滞、痰浊，痹阻胸阳，阻滞心脉为实的表现。在本病症的形成和发展过程中，虚实又不单纯贯穿，大部分因实致虚，亦有因虚致实者。本虚标实，虚实夹杂的临床表现在胸痹中占绝大多数。后期学者在前任的基础之上，又总结出新的认识，目前关于此病的病因病机观点有血瘀学说、瘀毒从化说、痰瘀学[48]说、阳虚血瘀说、络病学说、心脾痰瘀相关说、热毒说以及络风说等。[49]有学者将胸痹的发生发展归纳为早、中、晚三个阶段：认为早期气血阴阳亏虚是胸痹的病机根本；中期痰饮、秽浊、气滞、血瘀、寒凝会导致胸痹的病机演变；晚期邪气积聚心脉是胸痹病机的最终环节，三个阶段紧密相联系。中医在胸痹的治疗方面也有自己的特色。《灵枢·口问》中记载“心者，五脏六腑之大主也……故悲哀愁忧则心动”。祖国医学认为“七情之由作心27 湖北中医药大学2018届硕士学位论文痛”，心脏受到精神情志变化的直接影响。本病的防治重点之一就是要调摄好精神情志，保持心情平静愉悦，使怒喜忧思等情绪在适度范围。《诸病源候论·心痛病诸候》记载：“痛者，风凉邪气乘于心也”，为了避免寒冷刺激诱发本病，需要注意保暖，避免受寒。中医认为，痰浊的产生与过食肥甘厚味有密切关系，痰浊会引起经络、气机阻塞，继而发病，故应注意调节饮食：清淡低盐，食勿过饱是防治胸痹膳食的基本要求。除此之外，平时亦应劳逸结合，坚持适当运动。本虚标实，虚实夹杂是胸痹的病症特点总结。在胸痹发作期以标实为主，而在缓解期则以本虚为主。在上述特点之上，除特殊情况下可根据虚实标本的主次实行兼顾同治外，其治疗原则应该先治标，后治本。实证用补法，虚证用泻法。针对实证的具体治疗方法为：寒凝宜温阳，气滞宜行气，痰浊则豁痰，血瘀则活血，活血通脉的治疗方法应当特别重视。若为本虚则应该用补法，补气温阳，滋阴益肾的治疗较为常见，在权衡心脏阴阳气血之不足的基础之上，需要根据有无兼见肺、肝、脾、肾等脏之亏虚，纠正相应脏腑之偏衰，其中补益心气之不足的治疗方法尤其应受到重视。在胸痹的选方用药中，往往将通法与补法结合，交替应用。麝香保心丸和苏合香丸是芳香温通法的代表；宣痹通阳法则包括瓜蒌薤白半夏汤、枳实薤白桂枝汤等；活血化瘀法的经典方药为血府逐瘀汤、复方丹参滴丸、失笑散等；八珍汤和当归补血汤则具有良好的补气血效果。除经典成方外，针对个体病例特点，可视具体临床辩证加减中药材：属于活血化瘀药的有丹参、赤芍、川芎、鸡血藤、当归、牛膝、郁金、三七、益母草、泽兰等；芳香温通药会用到肉桂、丁香、干姜、麝香、吴茱萸、蜀椒、细辛等。胸痹的发生与痰浊闭阻直接相关，临床在温胆汤的基础之上可加瓜蒌、石菖蒲、胆南星、郁金等化痰消浊。中老年人肾气亏虚，心阳因为接受不到肾阳的向上蒸腾而虚衰，而心阳虚衰所致的行血无力久而会导致气滞血瘀，亦可致脾土失温，气血化源受到影响，营亏血少，脉道不能充盈，血行不畅，从而发生胸痹，临证治疗应重视补肾固本。尤其在胸痹缓解期，常选用何首乌、生地、女贞子、枸杞子、墨旱莲、当归等滋肾阴，菟丝子、黄28 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察精、山茱萸、桑寄生、杜仲等补肾气，桂枝、补骨脂、威灵仙、仙茅等温肾阳。除传统方药，针灸治疗胸痹亦有其独特的优势，针灸治疗方面以辨病取穴和辨证取穴相结合，最常用的穴位是内关、心俞、神门、膻中，多选取心包经、心经、任脉、膀胱经。针药并用的综合疗法对胸痹心痛中病机[50]更为复杂的证型提供了更丰富有效的治疗手段。5天麻素对心肌缺氧保护作用的研究根据中药古籍来看，天麻单纯用于心血管疾病并不多见。一般认为天麻乃入肝经药，在《本草新编》中有天麻入心经的记载，《日华子本草》中曾描述天麻功效为“通血脉，开窍”。而今临床上也因天麻平肝阳而将之用于治疗高血压头痛。虽尚无明确的循证医学证据证实天麻对心血管的保护作用，但对于天麻中提纯出的单体药天麻素，相关领域的研究逐步深入并拓展。[51]早在1986年就有学者从细胞水平观察到合成天麻素可加快心肌细胞的搏动频率，加强心肌的收缩力；使心肌细胞的LDH（乳酸脱氢酶）、SDH（琥珀酸脱氢酶）、ATP（三磷酸腺苷酶）活性升高，显著增加DNA（脱氧核糖核酸）、RNA（核糖核酸）及糖原含量，认为天麻素可能具有促进心肌细胞能量代谢，特别是在缺氧情况下获得能量的作用。近年来，天麻素抗心肌缺氧的研究逐渐深入。在在体大鼠MIRI（心肌缺血再灌注损伤）模型中，经过天麻素预处理后，心肌的MIRI有效减轻，这种保护作用机制可能与提高SOD含量，减轻炎症细胞浸润，减少炎症因子TNF-α、2+IL-6的释放以及增加SERCA（肌浆网Ca-ATP酶）含量，抑制细胞外2+[8-9，52]Ca内流有关。在离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中，各项指标经过不同浓度天麻素预处理后均得到了有效改善，其中包括左心室发展压(LVDP)、左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)和心率(HR)；离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型冠脉流出液中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白(Trop-I)的活性被降低，心肌梗死[53]的面积得到了有效控制。天麻素还能够抑制氧化应激损伤所致心肌细29 湖北中医药大学2018届硕士学位论文胞的凋亡，其作用机制可能通过PI3K/Akt途径上调糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化水平，进而抑制1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(mPTP)的开放有关，并通过抑制H9C2心肌细胞的过度自噬，下调细[54-55]胞凋亡的水平，从而起到心肌保护的作用。以上在体实验、离体实验及细胞实验均证明天麻素对缺氧心肌有良好[56-57]的保护作用。除此之外，在临床上，有研究发现在常规西药治疗的基础之上加用天麻素注射液治疗冠心病心绞痛，能够在改善心肌供血，减少心绞痛频率、强度方面优于单纯使用西药治疗组。6天麻素缓释片治疗老年冠心病心绞痛的作用本课题临床试验中，患者在接受治疗4周后，心绞痛的症状总体来说有不同程度的改善。经研究表明，SAQ是具有较好特异性的冠心病心绞痛患者的生活质量调查量表，除一般量表考察的病情之外，该量表还评估了冠心病患者的特殊病理和心理状态，具有较好的结构效度、效标效度、分半效度、内部[58]一致性和反应度。就SAQ评分结果分析，两组患者的躯体活动受限程度(PL)改变情况不明显，无统计学差异，这可能与老年患者本身机体机能下降有关；在心绞痛稳定状态(AS)、心绞痛发作情况(AF)、治疗满意程度(TS)方面，对照组与观察组评分均明显升高，且观察组改善情况较对照组更为明显；在整个试验过程中，两组患者疾病认知程度(DC)均有提高，这可能与医生的随访和对病情的解释有关，而观察组患者可能因为心绞痛症状减轻更为显著，对疾病的预后及未来生活表现得更为积极，这也有可[59]能是因为天麻素具有抗抑郁功效所致。两组患者治疗前后中医证候（包括胸痛、胸闷、心悸、气短、头晕目眩、疲倦乏力、畏寒肢冷、腰膝酸软、自汗、不寐）评分有明显改善，且观察组较对照组评分改善更为明显。就治疗的有效率来说，两组资料经统计学分析并无明显差异，但观察组的总有效率还是高于对照组。超氧化物歧化酶（SOD）广泛存在于植物、各类动物、微生物以及人体中，是一类能够将超氧阴离子催化变成为过氧化氢和氧气的金属结合30 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察[60][61]酶，作为最重要的氧化自由基清除剂起到抗氧化作用。研究发现，SOD的活性与冠心病有相反的关系，降低SOD活性可以增加氧化应激的程度从而增加冠脉事件或是亚临床事件的发生。在本临床试验中，对照组血清SOD活性均值较4周治疗前上升，但无统计学差异；观察组治疗4周后血清中SOD活性显著升高，且与对照组治疗后相比有统计学意义。临床试验过程中，两组患者精神、食欲、睡眠及大小便情况未出现明显异常，生命体征平稳，血常规、肝肾功能、凝血功能等生化指标均无异常改变。接受试验的患者没有出现药物过敏或者相关不良反应。综上，本课题通过天麻素缓释片治疗老年冠心病心绞痛患者的观察，评估治疗前后患者SAQ及中医证候量表评分及血清SOD变化情况。研究结果表明，在常规西药治疗的基础上加用天麻素缓释片能够有效改善患者心绞痛稳定状态、心绞痛发作情况、治疗满意程度及疾病认知程度；能够缓解心绞痛相关的胸痛、胸闷、心悸、气短、疲倦乏力、畏寒肢冷、腰膝酸软、自汗、不寐中医证候；能够提高患者血清SOD活性，减轻自由基损伤及氧化应激反应从而起到对缺氧心肌的保护作用。7本研究的不足及尚需要解决的问题在动物实验中，天麻素三个剂量并未能显现出有效的剂量依赖性，并且相同浓度组的天麻素对不同的指标表现出的有效性不同，这有以下几个方面的原因：①本实验设置的剂量尚未能满足合适的天麻素量效曲线浓度。②中药的作用靶点尚不明确，可能通过不同途径或者多种途径发挥作用。③动物实验的样本量还不够大，未能有效的反应出组间差别。针对上述问题，可以进一步设置多个浓度梯度，以找到有效的量效关系。本实验还尚未深入到分子水平，天麻素抗缺氧机制的具体靶点通路还有待更深入的研究。可以增加离体细胞实验，使研究更加全面、充分。另外，可以将实验中每组的动物数量再增多一些，大的样本量所得到的数据更具有说服力和代表性。在临床试验中尚存在以下不足及需解决的问题：①未深入研究天麻素缓释片对老年冠心病心绞痛治疗有效的具体作用机制，下一步可通过心肌31 湖北中医药大学2018届硕士学位论文缺血动物模型，进行深入探讨其具体作用机制；②由于课题客观条件不允许，该研究样本量相对较小，所选取得患者有一定局限性，下一步可进行医疗系统内大样本研究，深入探讨临床中西医结合治疗冠心病心绞痛的临床疗效及安全性；③未对该研究的临床疗效做进一步随访，下一步可对中西医结合治疗冠心病心绞痛半年、一年、两年及以上两组患者冠心病稳定状态、发作情况、死亡率情况进行比较。32 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察结语1、天麻素具有一定抗缺氧功效。能显著延长密闭缺氧环境下小鼠的存活时间；增加急性减压缺氧环境下小鼠的存活率。2、天麻素能够从以下几个方面发挥抗缺氧作用：①改善缺氧所致的+动脉血气变化：提高血液氧含量、减轻Na内流所致细胞水肿、维持血液酸碱平衡、减少血液乳酸含量、提高血红蛋白浓度。②保持脑、心、肺组织细胞结构的完整性，减轻缺氧所致的水肿及血管扩张。③可通过清除自由基、减轻脂质过氧化损伤、提高抗氧化酶活性从而形成对脑和心组织的抗缺氧保护，并且减少缺氧所致心肌组织中乳酸堆积。3、天麻素缓释片对老年冠心病心绞痛有一定临床疗效。在常规西药治疗基础上加用天麻素缓释片可改善患者心绞痛稳定状态、心绞痛发作情况、提高患者治疗满意程度及对疾病的认知度，也可以改善胸闷、胸痛等胸痹相关中医证候，使冠心病心绞痛患者血清SOD活性显著提升。4、天麻素缓释片在冠心病心绞痛治疗中安全性良好，其研究及临床应用可以进一步深入。33 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天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察素作用于中枢神经系统的药理作用有：抗焦虑、镇静催眠、抗惊厥、抗癫[6]痫、镇痛、促智、延缓衰老及神经保护。除对中枢神经系统外，周慧君[7]总结天麻对心血管系统的药理作用有：对心肌细胞的保护作用、降压、抗血小板聚集、抗血栓。目前，天麻及天麻素在临床上主要用于治疗血管性头痛、眩晕、血管性痴呆、缺血性脑损伤、癫痫、三叉神经痛、高血压头痛、突发性耳聋、[8]偏头痛等。1.3天麻及天麻素的安全性研究古人早有关于天麻安全运用的认识。《本草纲目》记载：“久服天麻，遍身发出丹”。《本草从新》也云：“若肝虚在血，证见口干便闭，及犯类中风等证者，切不宜服，以其辛能燥血者故耳”。《本经逢原》也明白指出：“天麻性虽不燥，毕竟风剂，若血虚无风，火炎头痛、口干便闭者，不可妄用。”[9]蒲昭和认为临床上正确使用天麻很重要，应注意以下几点:1.凡病人见津液衰少，舌干口燥，咽干，大便闭涩，虚损，经脉失养等属血虚阴虚的眩晕和头痛者，均须慎用天麻；2.重视配伍应用；3.即使是针对肝阳上亢、痰阻经络等实证时，使用天麻也要详审病情，把握病机，随证加减，方能取得良好的治疗效果。[10]在经现代标准量化的药理毒理研究中，毛勇等用天麻粉连续30d-1喂养SD大鼠，恢复性观察2周，发现天麻药材粉5.845g·kg(相当于人[11]日常摄入剂量的116.9倍)以下为最大未观察到有害作用剂量。田洁采用急性毒性试验、骨髓细胞微核试验、精子畸形试验和30d喂养试验检测天麻含片的毒性，结果天麻含片对小鼠急性毒性最大耐受量＞32.0g/kgbw（相当于人群推荐日摄入量的266倍的剂量），以相当于人群推荐日摄入量的133倍的剂量进行遗传毒性试验、以相当于人群推荐量的100倍的剂量进行30d喂养实验，各项指标均未显示出明显的毒性作[12]用。吕培志在天麻素注射液的急性毒性试验及亚急性毒性试验中指出，发现天麻素对血常规、肝肾功能等均无不良影响。综上，天麻及其单体提纯药天麻素在临床使用中有较高的安全性。41 湖北中医药大学2018届硕士学位论文2.天麻成分的药理拓展2.1治疗阿尔兹海默病[13]周楠楠比较了天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷对阿尔茨海默病模型小鼠的药效学作用，发现这三种成分均可通过抑制脑内β-淀粉样多肽（Ap）产生并减少Ap斑块形成，进而减少老年斑对神经细胞的毒性作用，从而抑制阿尔茨海默病的病程发展。三种中药成分中天麻素的作用最显著，其[14]作用机制可能与抑制β-分泌酶的表达有关。ZhangJS发现天麻素通过抑制PKR/eIF2α信号通路使氧化应激情况下BACE1的表达减少从而抑制[15]阿尔茨海默病。李桂英等运用半夏白术天麻汤化裁治疗阿尔茨海默病获得了满意的效果。2.2抗抑郁[16]WangH发现天麻素可以使大鼠的类似抑郁行为得到改善并上调[17]大鼠海马神经源性神经干细胞的增生。张梦使用天麻素缓释片联合草酸艾司西酞普兰治疗缺血后卒中抑郁患者，发现患者抑郁状况有效改善，生活质量、工作效率及能力得到了提高。推断天麻素可能通过提高脑内BDNF含量、降低IGF-1水平，保护神经细胞，间接的提升脑内单胺类[18]神经递质而发挥抗抑郁作用。郑伟莉等用天麻素注射液注射百会、四神聪及双侧风池、足临泣，并配合氢溴酸西酞普兰片，相比单纯针刺加西药治疗，治疗组治愈率和总有效率分别为70.0%和100.0%,对照组分别为45.0%和90.0%，认为天麻素注射液穴位注射是一种治疗抑郁症的有效方法。2.3降血压[19]研究表明，天麻素能够通过干预肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）和心肌组织中过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPARγ）从而有效降低收缩压。天麻素、天麻多糖均可降低收缩压和舒张压：天麻多糖降压且不改变心率，无利尿降低血容量作用，效果呈剂量依赖性，作用机制可能与促进血管内皮舒张因子一氧化氮（NO）的生成及抑制血管内皮收缩因子血浆内皮素（ET）的释放，使二者拮抗效应平衡有关；天麻素42 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察可降低老年难治性高血压，尤其对降低收缩压的作用相对较强，也可能是[20-21]通过调节患者血管活性物质实现。2.4调控血脂[22]于滨发现，天麻细粉片在高血脂大鼠模型中具有降血脂作用：天麻粉剂能预防大鼠血清中的三酰甘油升高，2.50g/kg剂量组能预防大鼠血[23]清中总胆固醇升高。其后，他所在科研团队的张聪恪又通过临床证实：天麻细粉片在高血脂患者中具有降血脂作用并且无不良反应。也有研究表[24-25]明，对高脂饲料喂养的自发性高血压大鼠和SD大鼠，天麻中的提取物——酸性多糖成分能显著降低其TC、TG、LDL水平，从而对血脂起到[26]有益的调控。许晓龙在天麻素调脂及抗早期动脉粥样硬化的临床及实验研究中发现天麻素具有一定降脂作用，能够缓解组织及细胞内脂质蓄积、减少促炎因子分泌，从缓解脂质沉积和调节炎症反应角度发挥抗早期动脉粥样硬化损伤的作用。2.5治疗糖尿病及其并发症[27]韩磊等证明天麻素能降低高糖刺激下人脐静脉内皮细胞外乳酸脱氢酶的活性，减轻高糖对血管内皮细胞造成的损伤，并用链尿佐菌素诱发小鼠糖尿病模型，证实天麻素能显著降低糖尿病小鼠的血糖，降低小鼠血清中甘油三酯、总胆固醇及丙二醛浓度，提高超氧化物歧化酶的活性，证[28]明天麻素有明显的抗糖尿病作用。金善姬在糖尿病饮食及应用降血糖药物的治疗基础上加用生理盐水配置的天麻素注射液800-1000mg治疗糖尿病周围神经病变，疗程2周，发现天麻素注射液对治疗糖尿病周围神经[29]病变具有较好临床疗效。魏玉玲在天麻素联合苦碟子治疗糖尿病周围神经病变疗效观察中证实：相比单用苦碟子的对照组总有效率80%，天麻素加苦碟子治疗糖尿病周围神经病变总有效率为95%，差异有统计学意义，证实天麻素联合苦碟子注射液是治疗糖尿病周围神经病变安全有效的药物组合。2.6护肝作用[30]李峰发现天麻多糖能够提高卡介苗加脂多糖导致肝损伤模型小鼠43 湖北中医药大学2018届硕士学位论文血清中ALT、AST、NO活性及TNF-α与IL-1的含量,抑制肝脏中的MDA水平和提高的SOD活性，显著提升脾T、B淋巴细胞增殖能力，且提高小鼠的脾脏、胸腺指数，降低肝脏指数。证实天麻多糖对小鼠免疫性肝损[31]伤有良好的保护作用。张楚君发现天麻素可剂量依赖性预防长春新碱引[32]起的肝损伤，减轻其肝脏毒性。QuLL证实天麻素可通过激活AMPK/Nrf2通路，减轻氧化应激、炎症反应及改善脂质代谢等途径起到对非酒精性肝病的保护左右。2.7抗肿瘤作用[33]ShuG发现天麻素是天麻中抗癌免疫调节的主要活性成分，有可能+是通过促进CD4T细胞中NF-kB-mediated基因表达从而发挥免疫调节[34]作用。李余星通过离体与在体实验分别观察天麻素对长春新碱抑制乳腺癌细胞MCF-7生长和抗Walker-256乳腺癌荷瘤大鼠肿瘤生长作用的影响，发现在在体实验中天麻素能显著增强长春新碱对Walker-256荷瘤大鼠的抗肿瘤疗效，且呈剂量依赖性。2.8保健作用天麻具有药食同源性，一直为我国人民食用。近年来，天麻的保健作[35]用被揭开面纱。汪植发现天麻多糖能提高免疫抑制小鼠的免疫球蛋白含[36]量和胸腺指数，是一种良好的免疫调节剂。鲁艳娇也证实天麻苷高剂量组能够提高小白鼠脾脏的重量、生长指数、抗体生成及巨噬细胞功能，可[37]明显提高小鼠的免疫功能，增强抗感染能力。王昭君的研究证实天麻素在分子水平上可能是通过调节部分衰老相关基因的表达水平来发挥其抗衰老作用，具有早期的预防作用。也有研究发现，天麻多糖是天麻中具有[38]抗氧化、延缓衰老的活性成分。3.结语天麻的使用已有两千多年的历史，这一味品质优良的中药材在现代科学技术的剖析下被发掘出了强大的潜力，这不仅是对中医药发展的传承，也是医学研究中精益求精的体现。对天麻的药理作用、作用机制、药效动力学、毒理等进行更细致的研究是实现天麻精准用药的前提条件。44 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察参考文献[1]陈贯诚.絮话天麻[J].赣江经济,1981(09):38.[2]高学敏.中药学[M].北京：中国中医药出版社,2007:408-409.[3]李云,王志伟,刘大会,等.天麻化学成分研究进展[J].山东科学,2016,29(04):24-29.[4]安中原,钟斌.天麻的化学成分与药理活性研究概况[J].海峡药学,2017,29(06):22-24.[5]陶云海.天麻药理研究新进展[J].中国中药杂志,2008,33(1):108-110.[6]龚其海,石京山,杨丹莉,等.天麻素在中枢神经系统的药理作用及其机制[J].中国新药与临床杂志,2011,30(03):176-179.[7]周慧君.天麻有效成分的药理作用与临床应用研究进展[J].中医临床研究,2016,8(22):56-58.[8]胡金林.天麻的药理作用与临床应用[J].中国乡村医药,2009,16(03):76+81.[9]蒲昭和.有关天麻毒副作用的临床报道及认识[J].中国中医药信息杂志,1997(03):12-13.[10]毛勇,苏敏,那敏,等.天麻粉喂养大鼠30d毒性试验[J].中国药理学与毒理学杂志,2013,27(03):561.[11]田洁,田辉,王玉娥,等.天麻含片的毒理和免疫功能实验研究[J].公共卫生与预防医学,2011,22(03):12-15.[12]吕培志,齐洋,李天翥.天麻素注射液药理毒理研究综述[J].黑龙江医药,2006(04):297-299.[13]周楠楠.具有潜在治疗阿尔茨海默病作用的3种中药成分的药效学观察及其机制研究[D].北京协和医学院,2016.[14]ZhangJS,ZhouSF,WangQ,etal.GastrodinsuppressesBACE1expressionunderoxidativestressconditionviainhibitionofthePKR/eIF2αpathwayinAlzheimer’sdisease[J].45 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天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察[25]KimKJ,LeeOH,HanCK,etal.AcidicpolysaccharideextractsfromGastrodiaRhizomesSuppresstheatherosclerosisriskindexthroughinhibitionoftheserumcholesterolcompositioninSpragueDawleyratsfedahigh-fatdiet[J].Internationaljournalofmolecularsciences,2012,13(2):1620-1631.[26]许晓龙.天麻素调脂及抗早期动脉粥样硬化的临床及实验研究[D].湖北中医药大学,2015.[27]韩磊,乔爱敏,刘青.天麻素的抗糖尿病作用实验[J].华侨大学学报(自然科学版),2013,34(06):682-686.[28]金善姬,金文龙.天麻素注射液治疗糖尿病周围神经病变临床观察[J].现代医药卫生,2006(19):2923.[29]魏玉玲,崔旭凤.天麻素联合苦碟子治疗糖尿病周围神经病变疗效观察[J].中国中医药现代远程教育,2012,10(17):12-13.[30]李峰,朱洁平,王艳梅,周恩红,沈业寿.天麻多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用[J].中药药理与临床,2015,31(01):111-113.[31]张楚君,张金芝,郑卫红,宫登辉,王雅琴.天麻素对长春新碱致大鼠肝损伤的保护作用[J].实用肿瘤杂志,2012,27(05):521-525.[32]QuLL,YuB,LiZ,etal.GastrodinamelioratesoxidativestressandproinflammatoryresponseinnonalcoholicfattyliverdiseasethroughtheAMPK/Nrf2pathway[J].Phytotherapyresearch,2016,30(3):402-411.[33]ShuG,YangT,WangC,etal.GastrodinstimulatesanticancerimmuneresponseandrepressestransplantedH22hepaticascitictumorcellgrowth:InvolvementofNF-κBsignalingactivationinCD4+Tcells[J].Toxicologyandappliedpharmacology,2013,269(3):270-279.[34]李余星,江永祥,郑军,等.天麻素对长春新碱抗肿瘤作用的影响[J].时珍国医国药,2016,27(12):2866-2869.[35]汪植,容辉,段和平.天麻多糖对小鼠免疫功能的影响[J].中国民族民间医药杂志,2007(02):112-114+124.47 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湖北中医药大学2018届硕士学位论文剧烈运动（如游□□□□□□泳或打球）2.与4周前比较，作最大强度的活动时，胸痛、胸部紧榨感和心绞痛的发作情况：明显增加□轻微增加□相同□轻微减少□明显减少□3.过去4周内，胸痛、胸部紧榨感和心绞痛的平均发作次数：≥4次/天□1-3次/天□≥3次/周□1-2次/周□<1次/周□无发作□4.过去4周内，胸痛、胸部紧榨感和心绞痛服用硝基药物（如硝酸甘油）平均次数≥4次/天□1-3次/天□≥3次/周□1-2次/周□<1次/周□没使用□5.因胸痛、胸部紧榨感和心绞痛遵守医嘱服药带来的烦恼严重□中度□轻微□极少□无□医生未给药□6.对治疗胸痛、胸部紧榨感和心绞痛的各种措施的满意程度不满意□大部分不满意□部分满意□大部分满意□高度满意□7.对医生胸痛、胸部紧榨感和心绞痛的解释满意程度：不满意□大部分不满意□部分满意□大部分满意□高度满意□8.总的来说，对目前胸痛、胸部紧榨感和心绞痛的治疗满意程度：不满意□大部分不满意□部分满意□大部分满意□高度满意□9.过去4周内，胸痛、胸部紧榨感和心绞痛影响生活乐趣的程度：严重□中度□轻微□极少□无影响□10.在您的未来生活中如果还有胸痛、胸部紧榨感和心绞痛，您会感觉怎样：不满意□大部分不满意□部分满意□大部分满意□高度满意□11.对心脏病发作和突然死亡的担心程度：一直担心□经常担心□有时担心□很少担心□绝不担心□50 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察附录三中医证候评分表患者姓名：性别年龄床号住院号序号症状评分无胸痛发作0分有较典型的心绞痛发作，每次持续时间数分钟，每周疼痛至少2-3次，或2分每日发作1-3次，但疼痛不重，有时需口含硝酸甘油每天有数次较典型的心绞痛发作，每1胸痛次持续数分钟到10分钟左右，心绞4分痛较重，一般需口含硝酸甘油每天有多次典型心绞痛发作，影响日常生活活动(例如大便、穿衣等)，每6分次持续时间较长，需多次口含硝酸甘油无胸闷发作0分2胸闷轻微胸闷2分51 湖北中医药大学2018届硕士学位论文胸闷明显，有时叹息样呼吸4分胸闷如窒，叹息不止6分无心悸0分心悸偶尔发生，不适感轻微1分心悸时有发生，持续时间较长，不适3心悸2分感明显心悸经常发生，惕惕而动，难以平静，3分甚则影响生活无气短0分一般活动后气短1分4气短稍为活动后气短，但不活动不觉气短2分平素不活动亦感气短喘促3分无头晕目眩0分活动时偶尔头晕目眩，静止休息时症头晕目1分5状消失眩活动时经常头晕目眩2分头晕目眩严重，难以坚持活动3分52 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察无疲倦乏力，或偶尔疲倦乏力0分容易精神不振，气力较差，仍可坚持1分日常工作及活动疲倦乏6时常精神疲乏，全身无力，勉强坚持力2分工作及活动精神气力严重疲乏，难以坚持日常活3分动无畏寒肢冷0分畏寒肢四肢末梢轻微发冷1分7冷四肢发冷，需加衣被2分全身发冷，增加衣被仍不能完全缓解3分无腰膝酸软0分腰膝酸软轻微，不影响工作及活动1分腰膝酸8腰膝酸软较重，对工作及活动略有影软2分响腰膝酸软严重，难以坚持工作及活动3分9自汗不活动或稍为活动不致汗出0分53 湖北中医药大学2018届硕士学位论文平素皮肤微潮，稍为活动则更甚1分平素皮肤潮湿，稍为活动则汗出2分平素汗出，稍为活动则大汗淋漓3分睡眠正常0分睡眠易醒或睡而不稳，晨醒过早，但1分10不寐不影响工作睡眠不足4小时，但尚能坚持工作2分彻夜不眠，难以坚持工作3分54 天麻素抗缺氧功效研究及其缓释剂治疗老年冠心病心绞痛的临床观察附录四研究生期间发表文章[1]邹驰,樊光辉.让我们背您过河[J].中国医学人文,2016,2(04):32-33.[2]张雁灵.丙申·医声[M].北京:人民卫生出版社,2016:57-61.[3]邹驰,樊光辉,马慧萍,刘长清,刘辉.天麻素对模拟高原缺氧大鼠心脏的保护作用[J].中药药理与临床,2017,33(04):24-27.[4]邹驰,樊光辉,刘长清,马慧萍,刘辉.天麻素对模拟高原缺氧小鼠的保护作用[J].华南国防医学杂志,2017,31(08):501-503+513.[5]邹驰,樊光辉,刘辉,马慧萍,刘长清,刁波.天麻素对模拟高原缺氧大鼠动脉血气及脑组织损伤的影响[J].解放军医学杂志,2017,42(08):728-732.55 湖北中医药大学2018届硕士学位论文致谢三年研究生学习转瞬即逝，这是一段充实而有意义的时光，在论文即将完成之际，谨向在学业及生活上给予我教诲、帮助及关心的各位老师、家人及朋友表示诚挚的谢意，多亏了你们，我才能站在巨人的肩膀上走向更高的台阶！衷心的感谢我的导师樊光辉教授对我研究生期间的教育、培养及生活上的帮助。在生活中，樊老师宽厚温和、真诚可亲的性格常常温暖并激励着我，是我为人处事的榜样。在学习上，樊老师常耐心教导我们要严谨认真、一丝不苟的对待临床及科研上遇到的问题；要不断的加强专业知识的学习、提高专业技能，开阔自己的眼界。此外，感谢老师给我提供了良好的学习平台，使我发现问题、思考问题、解决问题的科研能力得到锻炼与提升。衷心的感谢兰州军区兰州总医院全军高原损伤防治重点实验室的全体师生对我实验期间的帮助。贾正平主任、马慧萍、景临林、董志臣老师给了我专业的指导，让我少走了很多弯路；王宁、武柠子、王昕、孟盼盼等同学手把手教了我很多实验技巧，因为他们的陪伴，让异乡的我感到特别温暖，感谢你们在我遇到困难及挫折时对我的开导及鼓励，有了你们，我才能更加高效的完成动物实验。衷心感谢中国人民解放军武汉总医院提供给我三年的学习机会，让我在浓厚的学术氛围中，不断历练和成长！武总的心血管内科、神经内科、干部病房二科、呼吸内科以及肾内科的各位老师传授了我很多临床知识，你们为人师表的风范及严谨治学的态度将使我受益终身。此外，我还要感谢我同门的兄弟姐妹，马军、刘长清、曾东汉、李蒋凤、龙燕，是你们让我感受到了家的温暖，团结的力量。感谢我的同窗室友们的关心和照顾，难忘我们一起生活、学习的快乐时光。最后，感谢陪伴我的家人，8年的医学生生涯谢谢你们的付出与陪伴，路漫漫其修远兮，吾将上下而求索，你们是我奋勇向前的动力原源。56