维生素D受体在人胶质瘤中表达的临床病理意义及预后分析

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分类号：R365单位代码：10159密级：公开学号：201521078硕士学位论文（临床医学硕士专业学位）中文题目：维生素D受体在人胶质瘤中表达的临床病理意义及预后分析英文题目：TheclinicopathologicalsignificanceandprognosisoftheexpressionofvitaminDreceptorinhumangliomas.论文作者：张群指导教师：李晓晗副教授学科专业：临床病理学完成时间：2018年2月 中国医科大学硕士学位论文维生素D受体在人胶质瘤中表达的临床病理意义及预后分析TheclinicopathologicalsignificanceandprognosisoftheexpressionofvitaminDreceptorinhumangliomas.论文作者张群指导教师李晓晗副教授申请学位医学硕士培养单位第二临床学院一级学科临床医学二级学科临床病理学研究方向临床病理学论文起止时间2016年12月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年2月 中国医科大学硕士学位论文I 中国医科大学硕士学位论文摘要目的：胶质瘤作为最常见的原发性颅内肿瘤，起源于神经胶质细胞，其中胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM，WHOⅣ级）发病率最高，占46.1%，其次是弥漫星形细胞瘤。临床以手术切除肿瘤，并结合放疗、化疗等综合治疗方法，但是患者的预后普遍较差。因此寻找新的分子治疗靶点对延长患者的生存期具有重要意义。维生素D具有促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖和分化、侵袭和转移以及血管新生的作用。维生素D通过参与维生素D受体(VitaminDReceptor，VDR)介导的VD-VDR信号通路发挥相关作用。为此我们通过检测胶质瘤患者肿瘤组织中VDR蛋白及胶质瘤相关蛋白异柠檬酸脱氢酶1(Isocitratedehydrogenase1，IDH1)、肿瘤抑癌基因P53蛋白、细胞增殖活性标志物Ki67抗原的表达水平，分析VDR蛋白的表达与胶质瘤患者的临床病理特征及预后的相关性，探讨其作为分子治疗靶点和预后评估的理论基础。研究方法：选取2013年1月1日至2016年12月31日中国医科大学附属盛京医院术后肿瘤组织的石蜡病理确诊为胶质瘤的80例标本，根据WHO分级分为低级别（WHOⅠ-Ⅱ级）27例，高级别（WHOⅢ-Ⅳ级）53例。免疫组化采用SP法检测80例人脑胶质瘤组织中VDR以及肿瘤相关蛋白IDH1、P53、Ki67的蛋白表达情况，并结合患者的相关临床病理表征及预后信息进行相关性分析。结果：高级别胶质瘤组织中VDR的蛋白表达高于低级别胶质瘤，并具有统计学意义。VDR在胶质瘤中的表达与瘤周水肿、肿瘤坏死相关（p<0.05），与患者年龄、性别，肿瘤部位、大小无关(p>0.05)，同时VDR蛋白的表达与胶质瘤相关蛋白IDH1的表达负相关，与P53、Ki67蛋白的表达正相关。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，高级别胶质瘤患者预后相对低级别胶质瘤患者预后差（p<0.05），IDH1阳性表达的患者预后优于阴性表达者，P53及Ki67低表达患者生存率分别高于相应蛋白的高表达患者（p<0.05），而VDR高表达患者的无进展生存期显著低于VDR低表达患者（p<0.05）。II 中国医科大学硕士学位论文结论：高级别胶质瘤组织中VDR的过度表达与肿瘤细胞增殖和发展有关，可作为预后不良的标志物。此外，VDR还可以作为高级别胶质瘤治疗的潜在靶点。关键词：胶质瘤、VDR、IDH1、P53、Ki67、临床病理特征、预后AbstractObjective:Gliomaisthemostcommonprimaryintracranialtumor,originatesfromglialcells.Thehighestincidenceisglioblastoma(GBM，WHOⅣ),accountingfor46.1%,followedbydiffuseastrocytomas.Treatmentisbasedonsurgicalresectionoftumors,combinedwithradiotherapy,chemotherapyandothercomprehensivetreatment.However,theprognosisofpatientsisgenerallypoor.Itisveryimportanttofindnewmoleculartargetsofpredictingandprolongingthesurvivaltimeofpatients.VitaminDcaninhibittheproliferationandinvasionoftumorcells,promotetheapoptosisoftumorcellsandinhibittheangiogenesis.VitaminDneedtocombinewiththevitaminDreceptor(VitaminDReceptor,VDR)toplayitsrole.ToinvestigatetherolesofVDRinglioma,wedetectedtheexpressionlevelofVDRproteinandgliomaassociatedproteinISOcitratedehydrogenase1(IDH1),tumorsuppressorgeneP53andproliferationindexKi67ingliomapatientsbyimmunohistochemistry,andanalyzedtherelationshipbetweentheexpressionofVDRandclinicopathologicalfeaturesandprognosisofglioma.Methods:EightycasesofgliomawereselectedfromthepatientsfilesofShengjinghospitalofChinaMedicalUniversityfromJanuary1st,2013toDecember31st,2016.AccordingtoWHOclassification,theyweredividedinto27casesoflowgrade(WHOⅠ-Ⅱ),53casesofhighgrade(WHOⅢ-Ⅳ).ImmunohistochemicalmethodwasusedtodetecttheexpressionofVDRandtumorassociatedproteinIDH1,P53andKi67in80casesofhumangliomatissuesbySPmethod,andthecorrelationanalysiswasmadeaccordingtotheclinicopathologicalcharacteristicsandprognosisinformation.III 中国医科大学硕士学位论文Results:TheexpressionofVDRishigherinhighgradegliomatissuethanthatinlowgradeglioma,thedifferenceofexpressionlevelsofthemarestatisticallysignificant.TheexpressionofVDRispositivelycorrelatedwithWHOgrade、peri-tumoraledema、tumornecrosis,butnotcorrelatedwithtumorsize,location,age,sex,whiletheexpressionofVDRproteinwasnegativelycorrelatedwiththeexpressionoftumorassociatedproteinIDH1,butwaspositivelycorrelatedwiththeexpressionofP53andKi67protein.Kaplan-Meiersurvivalcurveanalysisshowedthatprognosisofpatientswithhighgradegliomasispoorwithrelativelylowgradegliomapatients(P<0.05),thepatientswiththepositiveexpressionofIDH1havebetterprognosisthanthepatientswithnegativeexpressionofIDH1.ThesurvivalrateofpatientswithlowexpressionofP53andKi67ismuchhigherthanthoseofhighexpression,thesurvivalrateofthepatientswithhighexpressionsofVDRislowerthanthosewithlowexpressionsofVDR.Conclusion:OverexpressionofVDRinhigh-gradegliomaiscorrelatedwithtumorproliferationanddevelopment,itcanbeusedasapoorprognosticmarker.Inaddition,theVDRcanalsobeusedasapotentialtherapeutictargetforthetreatmentofhigh-gradegliomas.KeyWords:Glioma,VDR,IDH1,P53,Ki67,Clinicopathologicalfeatures,PrognosisIV 中国医科大学硕士学位论文英文缩略语英文缩写英文全称中文全称VDRVitaminDReceptor维生素D受体IDH1Isocitratedehydrogenase1异柠檬酸脱氢酶1RXRRetinoidXReceptor维甲酸X受体类固醇激素受体辅助激活剂SRC1SteroidReceptorCoactivator11DFSDiseasefreesurvival无病生存期OSOverallsurvival总生存期HEhematoxylin-eosin苏木素-伊红PTEperitumoraledema瘤周水肿IHCimmunohistochemical免疫组化细胞周期蛋白依赖性激酶抑CKIsCyclin-denpendentkinasesinhibitor制因子NcoRsNuclearreceptorcorepressors核受体辅助抑制剂HDACHistonedeacetylase组蛋白脱乙酰基酶SKp2S-phasekinase-associatedprotein2S期激酶相关蛋白2IGF1Insulin-likegrowthfactor1胰岛素样生长因子1PBSphosphatebufferedsolution磷酸盐缓冲液EGFREpidermalgrowthfactor表皮生长因子TGF-βTransforminggrowthfactor-β转化生长因子MAPKMitogen-activatedproteinkinase丝裂原活化蛋白激酶PI3KPhosphatidylinositol3‑kinase磷脂酰肌醇3激酶IL12Interleukin12白细胞介素12TERTTelomerasereversetranscriptase端粒酶逆转录酶GBMGlioblastoma胶质母细胞瘤HIF-1Hypoxiainduciblefactor-1乏氧诱导因子-1COX2Cyclooxygenase2环氧化酶2TissueinhibitorofmetalloproteinaseTIMP1金属蛋白酶抑制剂11MacrophagecolonystimulatingM-CSF巨噬细胞集落刺激因子factorV 中国医科大学硕士学位论文目录摘要.................................................................................................................................II英文缩略语.....................................................................................................................V目录..............................................................................................................................VI维生素D受体在胶质瘤中表达的临床病理意义及预后分析.....................................12材料与方法..................................................................................................................22.1主要仪器和试剂...............................................................................................22.1.1主要试剂..................................................................................................22.1.2主要仪器..................................................................................................22.2研究对象和分组...............................................................................................22.3研究方法...........................................................................................................32.4统计学分析.......................................................................................................43结果..............................................................................................................................54讨论............................................................................................................................105结论............................................................................................................................12本研究创新性的自我评价............................................................................................13综述..............................................................................................................................17致谢..............................................................................................................................28个人简历........................................................................................................................29VI 中国医科大学硕士学位论文维生素D受体在胶质瘤中表达的临床病理意义及预后分析1前言胶质瘤是最常见的原发性颅内肿瘤，其中恶性胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM，WHOⅣ级）的发病率最高，常规治疗后无进展生存期仅12.8个月[1]。根据世界卫生组织（WHO）的分类，胶质瘤分为四级（WHOⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ）。WHOⅠ级和Ⅱ级统称为低级别胶质瘤，WHOⅢ和Ⅳ级统称为高级别胶质瘤，高级别胶质瘤5年生存率仅为13%。虽然对胶质瘤的分子遗传学已经进行了深入的研究，但目前还没有相应的分子靶向治疗药物应用于临床。因此，寻找新的分子靶点对预测和延长患者的无进展生存期具有重要意义。维生素D是一种脂溶性类固醇衍生物，参与调节矿物质代谢，特别是钙的代谢，在多种肿瘤中发挥抑癌作用。维生素D在细胞质中通过一系列羟化酶的作用转化为活性1,25-二羟维生素D3（calcitriol,骨化三醇），进而与维生素D受体（VDR）形成复合物，导致VDR磷酸化及构象改变，然后在细胞质中与视黄醇X受体（RXR）结合，形成VDR：RXR异源二聚体，迅速转运到细胞核，与类固醇激素受体辅助激活剂1（SRC1）募集，参与相关基因的表达，抑制肿瘤细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成[2]。VDR是甾体激素/甲状腺激素受体超家族成员，以配体依赖的方式调控靶基因的表达[3]。它是一种配体依赖性转录因子，位于12q12-14，带长约75kb[4]。在基底细胞癌、鳞状细胞癌、早期结肠癌、乳腺癌、宫颈癌和卵巢癌中VDR的表达增加[2]。VDR在正常脑组织的神经细胞和胶质细胞中表达[5]，而在胶质瘤中主要位于细胞核内，胞浆内也有少量表达[6]。在本文中，我们将通过免疫组化方法检测VDR在人胶质瘤中的表达情况，分析其表达与胶质瘤相关蛋白IDH1，p53和Ki67表达相关性，同时进行VDR蛋白与临床病理特征的相关性分析，并探讨其表达与预后的相关性及应用临床治疗的可能性。1 中国医科大学硕士学位论文2材料与方法2.1主要仪器和试剂2.1.1主要试剂兔抗人VitaminD3受体(100ul)Cellsignaling公司D2K6W鼠抗人单克隆抗体IDH1(6ml)北京中杉金桥公司ZM-0447兔抗人单克隆抗体P53(6ml)北京中杉金桥公司ZA-0501兔抗人单克隆抗体Ki67(6ml)北京中杉金桥公司ZA-0502通用型免疫组化试剂盒(Kit)北京中杉金桥公司PV-6000DAB染色液（聚合物法）北京中杉金桥公司PV-6000-DPBS磷酸盐缓冲液(PH7.2-7.4)北京中杉金桥公司ZLI-9063Citrate柠檬酸盐缓冲液(PH6.0)北京中杉金桥公司ZLI-9065苏木素贝索公司二甲苯西陇化工公司无水乙醇汕头市达濠精细化学品公司2.1.2主要仪器切片机Leica公司烤片机常州郝思琳医用仪器公司移液枪Rainim公司数字病理切片扫描仪NDPNanozoomerDigitalPathologyHAMAMATSU显微镜Leica公司2.2研究对象和分组选取2013年1月1日至2016年12月31日中国医科大学附属盛京医院术后肿瘤组织石蜡病理学确诊为胶质瘤的80例标本，其中男性38人，女性42人。患者年龄3-78岁，中位年龄45岁。根据WHO分级分为低级别（WHOⅠ-Ⅱ级）27例，高级别（WHOⅢ-Ⅳ级）53例。随访截止日期为2017年11月1日，排除死亡时间或原因不明、失访的20例，有完整预后信息的共60例患者。随访时间1-46个月，其中无症状生存23例，复发6例，因胶质瘤复发导致死亡的31例。所有患者均知情同意，本研究获得盛京医院伦理委员会批准。2 中国医科大学硕士学位论文2.3研究方法所有标本均经10%中性福尔马林固定，组织处理后石蜡包埋，4um厚连续切片，分别进行VDR、IDH1、P53、Ki67的免疫组化染色。免疫组化采用PV法，检测VDR、IDH1、P53、Ki67的表达情况。免疫组化流程：1、4μm石蜡切片浸入二甲苯脱蜡；2、依次浸泡100%、85%、75%梯度酒精各3min后充分水洗；3、蒸馏水冲洗三次；4、抗原修复：浸入Citrate柠檬酸盐缓冲液，高压热修复3min30s；5、室温下进行自然冷却后，3%H2O2冲洗1次，PBS缓冲液冲洗3次，用滤纸吸去多余液体；6、滴加过氧化酶抑制剂，封闭20min；7、PBS缓冲液冲洗3次，分别滴加VDR、IDH1、P53、Ki67抗体，4℃冰箱过夜保存；8、次日，室温下孵育1小时，PBS缓冲液冲洗3次，滤纸吸去多余洗液；9、滴加相应二抗，室温下孵育30min，PBS缓冲液冲洗3次，滤纸吸取多余洗液；10、滴加H2O2及DAB，显微镜下控制显色，控制显色时间：VDR4min，IDH18min，P532min，Ki671min30s，流水冲洗终止显色；11、苏木素复染3min，自来水冲洗10min；12、中性树胶封固。实验中以PBS替代一抗作为阴性对照，以已知的阳性病理切片为阳性对照。VDR判读采用双盲法：选取10个高倍视野（×400），每个高倍视野计数100个肿瘤细胞。阳性细胞数<5%为0分，5%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，>75%为4分。染色强度无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，深棕色为3分。两者相乘：0及1分为阴性（-），2-4分为弱阳性（+），6-8分为中等阳性（++），9-12分为强阳性（+++），将（-~+）设定为低表达，（++~+++）设定为高表达。IDH1判读选取10个高倍视野（×400），每个高倍视野计数100个肿瘤细胞。以细胞浆棕色表达为阳性细胞，阳性细胞数<5%为阴性，阳性细胞>5%为阳性[28]。p53判读选取10个高倍视野（×400），每个高倍视野计数100个肿瘤细胞。以细胞核棕色表达为阳性，阳性细胞数<10%为阴性，阳性细胞数>10%为阳性。Ki67判读选取10个高倍视野热点区域（×400），每个高倍视野计数100个肿瘤细胞。以核深棕色且完全显色的细胞为阳性细胞，阳性细胞数<10%为低表达，>10%为高表达。统计患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤直径、肿瘤坏死、瘤周水肿、病理分级等病理学指标；随访患者的生存情况、死亡时间、死亡原因等多种相关临床数据。肿瘤直径计为肿瘤的最大切面最大横径。3 中国医科大学硕士学位论文2.4统计学分析所有数据均用SPSS22软件统计分析（SPSS公司，芝加哥，IL，美国）。卡方检验进行组间统计，Spearman相关进行临床病理指标的比较。采取KaplanMeier法计算生存率，并通过对数秩检验分析生存曲线的差异。无进展生存期（PFS）是从手术时间计算到第一次进展或最后一次随访。从单因素和多因素两方面进行Cox回归分析，分析影响预后的独立因素。所有统计检验均为双侧，P＜0.05有统计学意义。4 中国医科大学硕士学位论文3结果3.1VDR在胶质瘤组织中的表达情况免疫组化染色显示VDR蛋白主要在胶质瘤细胞核中表达，胞浆中也有少量表达（如图1A，B，C），以核表达为阳性，阳性率为57.5%。27例低级别胶质瘤组织中肿瘤细胞VDR表达阴性10例，弱阳性11例，中等阳性2例，强阳性4例；53例高级别胶质瘤组织中肿瘤细胞VDR表达阴性4例，弱阳性21例，中等阳性16例，强阳性12例，高级别胶质瘤组织中VDR阳性表达高于低级别胶质瘤，两者有统计学意义（P=0.002，如表1）。图1：用免疫组织化学方法检测人脑胶质瘤中VDR的蛋白表达A：低级别胶质瘤中VDR核少数弱表达，PV法×400。B：高级别胶质瘤VDR核阳性强表达，PV法×400。C：高级别胶质瘤VDR核及浆阳性表达，PV法×400表1胶质瘤中VDR的蛋白表达VDR分组nP-++++++低级别271011240.002高级别5342116123.2VDR表达与胶质瘤患者临床病理特征的关系胶质瘤中VDR的表达与肿瘤坏死、瘤周水肿和WHO分级显著相关（P<0.05）；与肿瘤大小、部位、患者年龄和性别无关(P>0.05)（见表2）。5 中国医科大学硕士学位论文表2胶质瘤中VDR的表达与临床病理特征的关系VDR临床病理特征Nr值P值低表达（%）高表达（%）性别-0.2100.061男3826（68.4%）12（31.6%）女4220（47.6%）22（52.4%）年龄-0.0230.841<402212（54.5%）10（45.5%）40-654929（59.2%）20（40.8%）>6595（55.6%）4（44.4%）肿瘤部位-0.0280.805皮层5632（57.1%）24(42.9%)实质137（53.8%）6（46.2%）皮层及实质96（66.7%）3（33.3%）肿瘤直径0.0190.884<4cm158（53.3%）7(46.7%)4-6cm3623（63.9%）13(36.1%)>6cm147（50.0%）7(50.0%)肿瘤坏死0.4650.000**有3511（31.4）24（68.6%）无4535（77.8）10（22.2%）瘤周水肿（影像学）0.3130.005**有5224（46.2）28（53.8%）无2822（78.6%）6（21.4%）WHO分级0.4120.000**Ⅰ107（70.0%）3（30.0%）Ⅱ1714（82.4%）3（17.6%）Ⅲ2618（69.2%）8（30.8%）Ⅳ277（25.9%）20（74.1%）6 中国医科大学硕士学位论文3.3胶质瘤中VDR的表达与IDH1、P53、ki67蛋白表达的相关性免疫组化染色显示在胶质瘤中IDH1表达定位于胞浆（图2A），P53及Ki67均呈核阳性表达（图2B，2C）。VDR与P53、ki67的表达正相关（P<0.05）与IDH1的表达负相关（P<0.05）（见表3）。图2：用免疫组织化学方法检测人脑胶质瘤中IDH1、P53、Ki67的蛋白表达A：IDH1在胶质瘤细胞中胞浆阳性表达，PV法×400。B：P53在胶质瘤细胞中呈核阳性表达，PV法×400。C：Ki67在胶质瘤中呈核阳性表达，PV法×400。表3胶质瘤中VDR与IDH1、P53、Ki67蛋白表达的相关性VDRNr值P值-++++++IDH1-0.2820.011*-6511211716+1531110P530.2290.041*-32101246+484201410KI670.3220.004**-2691133+5452115133.4VDR的表达与胶质瘤患者预后的相关性对随访的60例患者进行生存分析，低级别胶质瘤1年无病生存率为100%，高级别无病生存率为80%。Kaplan-Meier分析显示高级别胶质瘤患者无病生存期低于级别胶质瘤患者（P<0.001，图3A）。IDH1阳性表达患者预后优于阴性表达者（P7 中国医科大学硕士学位论文=0.002，图3C）。P53及Ki67低表达患者累积生存率高于高表达者（P<0.05，图3D，E）。VDR高表达患者无进展生存期显著低于VDR低表达患者（P=0.003，图3B），但在高级别胶质瘤中尽管VDR高表达者预后较低表达者差，但两者之间无统计学意义（P=0.118，图3F）。单因素Cox模型分析显示患者的年龄、肿瘤坏死、WHO分级、IDH1、P53、Ki67、VDR蛋白表达是影响患者预后的危险因素（表4），多因素Cox回归分析显示只有肿瘤坏死是影响患者无进展生存期的独立危险因素（P=0.000)，且VDR不是胶质瘤患者无进展生存期独立的预后影响因素。表4胶质瘤患者预后单因素COX模型分析95%CI分组PExp(B)下限上限性别0.2300.6650.3421.294年龄0.0042.3501.3044.237部位0.2160.6770.3651.256肿瘤直径0.4451.2220.7302.044肿瘤坏死0.0009.1863.90021.635瘤周水肿0.1231.8110.8523.852WHO0.0002.5381.6703.859IDH10.0090.1480.0350.616P530.0192.5701.1715.639Ki670.0009.0692.76029.801VDR0.0052.6721.3395.3328 中国医科大学硕士学位论文图3Kaplan-Meier曲线显示胶质瘤不同WHO分级及相关蛋白VDR、IDH1、P53、Ki67的表达与胶质瘤患者预后的关系A：不同级别胶质瘤患者的预后情况（P=0.000），B：胶质瘤VDR表达水平患者预后情况（P=0.003），C：胶质瘤IDH1表达水平患者预后情况（P=0.002），D：胶质瘤P53表达水平患者预后情况（P=0.013），E：胶质瘤Ki67表达水平患者预后情况（P=0.000），F：高级别胶质瘤VDR表达水平患者预后情况（P=0.118）9 中国医科大学硕士学位论文4讨论本研究发现，维生素D受体在胶质瘤中的表达与WHO分级呈正相关，提示VDR与高级别胶质瘤的发生密切相关。Magrassiand等[7]研究也证实胶质母细胞瘤细胞中VDR的mRNA表达高于低级别胶质瘤。PerryStambolsky[8]认为TP53与VDR在功能和物理状况下相互作用，P53突变基因可以促进VDR的的表达，同时通过稳定VDR蛋白的结构，增加VDR在细胞核内的聚集。我们推测胶质母细胞瘤常伴有TP53等基因突变，VDR可能为突变型P53等蛋白的靶基因，其表达受上游基因P53的调控。另一方面，有研究发现在体外促进跨膜信号释放通路的细胞因子（如细胞因子和炎症肽类）以及其他因素也可以影响VDR的表达[9]。值得注意的是，Diesel等[8]实验发现VDR在胶质母细胞瘤中的表达低于正常的脑组织。该结果与我们的结果并不一致，也与其他肿瘤组织中VDR的表达高于正常组织的报道相矛盾。可能由于其选取的患者的分级分组和临床治疗等不同造成，因此，仍需更大样本的实验研究进一步证实。VDR的表达除了与肿瘤发生相关，在胆管腺癌、结直肠癌[11]、乳腺癌[12]、肺腺癌[13]、卵巢癌[14]、肺非小细胞癌、膀胱癌、外阴癌等多种肿瘤中也被证实与患者的预后密切相关[2]，即VDR高表达者预后较好[6]。而在膀胱癌的研究中发现VDR高表达的患者预后差，可能与VDR在不同肿瘤中的作用机制不同有关。并且类维生素A、糖皮质激素、雌激素、胰岛素、胰岛素样生长因子、妊娠、泌乳、食物中骨化三醇的含量都可以影响VDR的表达[15]。本研究发现高级别胶质瘤VDR过表达且预后较差，VDR的表达与WHO分级及肿瘤相关蛋白IDH1、p53、Ki67具有显著的相关性，提示VDR表达是胶质瘤预后不良的指标，而在高级别胶质瘤患者中VDR高表达者也出现了预后较差的趋势。值得注意的是，De´boraG等研究发现在胶质母细胞瘤患者中高表达VDR的预后更好[6]，这与我们的发现矛盾，这种差异可能是由于患者身体状况和术后相关治疗的不同所致。在本研究中，我们同时研究了在胶质瘤患者肿瘤组织中p53，异柠檬酸脱氢酶1（IDH1），Ki67的表达。由于p53是肿瘤抑制基因，它通过监测和维持基因组稳定性来抑制肿瘤的发生，现已知道许多肿瘤的发生与其突变有关。在星形胶质细胞来源的胶质瘤和继发性胶质母细胞瘤，p53突变型的表达率占65%[16]。在本研究中，p53的突变率为60%，与以前的报道基本一致。IDH1是在三羧酸循环中起重要作用的酶家族的一员，其突变发生于编码精氨酸的R132H基因活性位点，在II及III级胶质瘤10 中国医科大学硕士学位论文及继发胶质瘤中常见[17]。它能抑制在三羧酸循环中异柠檬酸的氧化脱羧和降低α-酮戊二酸的产生。在低级别胶质瘤IDH1突变率为80%，胶质母细胞瘤中约为5%[11]，IDH1突变型的预后明显优于野生型。在本实验中发现只有18.75%的患者存在IDH1突变，可能是由于我们纳入的样本以高级别胶质瘤为主。ChristinaL[18]认为IDH突变型胶质瘤同时存在P53的突变，IDH野生型胶质瘤P53的突变率很低，在80%IDH突变型的间变型胶质瘤及胶质母中存在P53的突变，IDH的突变可能发生于P53之前。GerganaStancheva[19]认为IDH1基因突变伴随着p53基因的突变，突变率仅为64%。在本实验中，我们发现在15例IDH1突变的患者中同时存在P53突变的只有5例，且IDH1和p53的表达差异无统计学意义（P=0.565，R=0.065）。Ki67作为一种核抗原，与肿瘤的分化、侵袭、转移，肿瘤患者的预后密切相关，是肿瘤分级的重要参考指标[20]。本研究发现VDR的表达与P53、Ki67正相关，与IDH1的表达负相关，而P53、IDH1、Ki67都是判断胶质瘤患者预后的重要参考指标，所以我们认为VDR的表达可能受p53基因突变的调节，且VDR过表达是胶质瘤复发及死亡等不良预后的预测因子之一。维生素D及其类似物已被证实在鳞癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胶质瘤、胰腺癌和结直肠癌等具有抗癌作用，包括抑制肿瘤细胞增殖和分化，抑制肿瘤细胞的侵袭和转移，促进细胞凋亡，抑制肿瘤血管生成[2]。现在已经有临床研究将骨化三醇用于前列腺癌和肝细胞癌患者的临床治疗之中，患者预后得到明显改善[21]。1,25-二羟维生素D[22]3转运到细胞核与VDR结合发挥其抗肿瘤作用。在胶质瘤细胞中，维生素D促进细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（Cyclin-denpendentkinasesinhibitor,CKIs）P15、P27、P21、P57高表达，从而干扰细胞周期蛋白D（Cyclin-D）的表达，并可抑制CyclinD-CDK复合物的连续磷酸化，将肿瘤细胞的生长周期固定在G0/G1期，阻止其进入S期，抑制肿瘤细胞的生长与增殖[6,23]。入核的骨化三醇同时能抑制环磷酸化信号通路，诱导神经母细胞瘤和神经胶质瘤细胞细胞凋亡[24]；干扰Tenascin-C的表达，进而抑制增殖、侵袭和肿瘤细胞的血管生成[25]。Trouillas[26]随机选取了11例胶质瘤患者，包括10例胶质母细胞瘤及1例间变型胶质细胞瘤，每日给予骨化三醇，用MRI验证肿瘤细胞的变化，发现肿瘤体积出现明显的缩小。维生素D可以通过血脑屏障，但它也对人体有负面影响，引起高钙血症，现在已经发现有没有这种副作用的维生素D类似物[27]，因此可以将其用于临床上胶质瘤的治疗。11 中国医科大学硕士学位论文5结论VDR蛋白在高级别胶质瘤中表达高于低级别胶质瘤，与胶质瘤坏死、瘤周水肿和WHO分级有关，且其高表达与胶质瘤患者不良预后正相关。VDR的表达与P53和Ki67的表达呈正相关，与IDH1的表达负相关，表明VDR的表达与P53基因突变及肿瘤细胞的增殖有关，并且可能参与肿瘤细胞的代谢。维生素D可以通过血脑屏障并具有抑制胶质瘤细胞增殖的作用，VDR蛋白随胶质瘤级别的增加表达上调，因此推测VDR可以作为维生素D及类似物治疗高级别胶质瘤的潜在靶点。12 中国医科大学硕士学位论文本研究创新性的自我评价维生素D及其类似物在细胞学及临床II期实验方面已经证实可以抑制胶质瘤的进展，可用于胶质瘤的治疗，但是尚未有报道涉及与其结合的肿瘤组织中VDR表达的相关研究。本实验填补了胶质瘤中VDR与各类临床病理指标的相关性上的空白，可对于其作为治疗靶点的研究进程提供一定的理论基础。13 中国医科大学硕士学位论文参考文献[1]Lara-VelazquezM,Al-KharbooshR,JeanneretS,etal.AdvancesinBrainTumorSurgeryforGlioblastomainAdults[J].Brainsciences,2017,7(12):166.[2]DeebKK,TrumpDL,JohnsonCS.VitaminDsignallingpathwaysincancer:potentialforanticancertherapeutics[J].Naturereviewscancer,2007,7(9):684.[3]HeikkinenS,VäisänenS,PehkonenP,etal.Nuclearhormone1α,25-dihydroxyvitaminD3elicitsagenome-wideshiftinthelocationsofVDRchromatinoccupancy[J].Nucleicacidsresearch,2011,39(21):9181-9193.[4]XuY,HeB,PanY,etal.Systematicreviewandmeta-analysisonvitaminDreceptorpolymorphismsandcancerrisk[J].TumorBiology,2014,35(5):4153-4169.[5]GarcionE,Wion-BarbotN,Montero-MeneiCN,etal.NewcluesaboutvitaminDfunctionsinthenervoussystem[J].TrendsinEndocrinology&Metabolism,2002,13(3):100-105.[6]SalomónDG,FermentoME,GandiniNA,etal.VitaminDreceptorexpressionisassociatedwithimprovedoverallsurvivalinhumanglioblastomamultiforme[J].Journalofneuro-oncology,2014,118(1):49-60.[7]MagrassiL,ButtiG,PezzottaS,etal.EffectsofvitaminDandretinoicacidonhumanglioblastomacelllines[J].Actaneurochirurgica,1995,133(3-4):184-190.[8]DieselB,RadermacherJ,BureikM,etal.VitaminD3metabolisminhumanglioblastomamultiforme:functionalityofCYP27B1splicevariants,metabolismofcalcidiol,andeffectofcalcitriol[J].Clinicalcancerresearch,2005,11(15):5370-5380.[9]MitscheleT,DieselB,FriedrichM,etal.AnalysisofthevitaminDsysteminbasalcellcarcinomas(BCCs)[J].Laboratoryinvestigation,2004,84(6):693.[10]StambolskyP,TabachY,FontemaggiG,etal.ModulationofthevitaminD3responsebycancer-associatedmutantp53[J].Cancercell,2010,17(3):273-285.[11]Ferrer-MayorgaG,Gómez-LópezG,BarbáchanoA,etal.VitaminDreceptorexpressionandassociatedgenesignatureintumourstromalfibroblastspredictclinicaloutcomeincolorectalcancer[J].Gut,2016:gutjnl-2015-310977.[12]TrivediT,ZhengY,FournierPGJ,etal.ThevitaminDreceptorisinvolvedintheregulationofhumanbreastcancercellgrowthviaaligand-independentfunctionin14 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中国医科大学硕士学位论文[24]KolterT,SandhoffK.Sphingolipidmetabolismdiseases[J].BiochimicaetBiophysicaActa(BBA)-Biomembranes,2006,1758(12):2057-2079.[25]Alvarez‐DoladoM,González‐SanchoJM,Navarro‐YuberoC,etal.Retinoicacidand1,25‐dihydroxyvitaminD3inhibittenascin‐CexpressioninratgliomaC6cells[J].Journalofneuroscienceresearch,1999,58(2):293-300..[26]TrouillasP,HonnoratJ,BretP,etal.Redifferentiationtherapyinbraintumors:long-lastingcompleteregressionofglioblastomasandananaplasticastrocytomaunderlongterm1-alpha-hydroxycholecalciferol[J].JournalofNeuro-oncology,2001,51(1):57-66.[27]ChiangKC,YehCN,PangJHS,etal.1α,25(OH)2D3Analog,MART-10,InhibitsNeuroendocrineTumorCellGrowthThroughInductionofG0/G1Cell-cycleArrestandApoptosis[J].Anticancerresearch,2016,36(7):3307-3313..[28]黎相照,薛小磊,张中满,等.免疫组化染色检测脑胶质瘤IDH1的优化及染色特点[J].中华神经医学杂志,2016,15(6):558-562.16 中国医科大学硕士学位论文综述维生素D及维生素D受体在肿瘤中的研究进展1、维生素D的合成及代谢维生素Ｄ是一种脂溶性的类固醇衍生物。其功能主要调节矿物质，尤其是参与钙、磷的代谢转运及骨的矿化。维生素D来源包括主要的紫外线（290-315波长）照射皮肤及少量的食物摄取，通过7-脱氢胆固醇合成后转化为维生素D3进入循环系统，维生素D3在肝脏线粒体和微粒体25羟化酶（25-OHase，CYP27A1基因编码）作用下形成25(OH)2D3，然后在肾脏1a羟化酶（CY27B1基因编码）作用下形成活性产物1,25(OH)2D3（calcitriol,骨化三醇），最后在靶细胞中通过CYP24A1编码的24-羟化酶（24-OHase）代谢分解[1]，形成无活性的1,24,25(OH)2D3，CYP27B1,CYP24A1主要受骨化三醇自身水平及甲状旁腺激素（PTH）、成纤维细胞生长因子23（FGF23）的调节[3]。2、维生素D代谢酶与肿瘤的关系癌症患者参与维生素D代谢的功能性分子的表达不同。25-Ohase(CYP27A1)在乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肝细胞癌mRNA表达增高，在高级别结肠癌中表达降低[1].已经有研究证实CYP27B1在多种肾外区域表达，包括肿瘤细胞，从而发挥抗癌作用，肾外CYP27B1不参与矿物质平衡但主要受循环系统中25(OH)2D3底物浓度的影响。器官和肿瘤的分级不同，CYP27B1的表达水平和活性不同，可以减少、增加或不变[5,6]，但是已经证实的是其在分化良好的肿瘤表达比侵略性高、分化低的肿瘤高[3,5]。1a-Ohase(CYP27B1)在基底细胞癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、高分化结肠癌中mRNA表达增高，在低分化结肠癌mRNA表达降低，在胶质母细胞瘤，黑色素瘤和宫颈癌中表达1a-Ohase的剪接变异体（Hyd-V5、V6、V7、V8）[1]。在一些肿瘤细胞中代谢酶CYP24A1异常高表达，从而使他们失去拮抗骨化三醇的抑癌，且提示患者预后较差[7]，其抑制剂可以增强骨化三醇的抑癌作用[3]。25-Ohase(CYP24A1）在胃腺癌，乳腺癌，鳞状细胞癌、肺癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌mRNA表达增高，肺非小细胞癌中蛋白表达增加，其中食管癌中mRNA表达17 中国医科大学硕士学位论文增加患者预后差，而在低分化的结肠癌中其mRNA表达增加[9]，但是也有文献提及乳腺癌中其mRNA表达降低[8]。3、维生素D受体及其基因多态性研究维生素D受体（VDR）属于类固醇激素/甲状腺激素核受体超家族成员，是一种配体依赖的核转录因子，VDR基因定位于12q12-14,长度约75kb，由启动子，调节区（1a-1f）和外显子2-9（编码长链VDR蛋白的A-F区域）构成。VDR的核定位信号可以直接沿着微管束通过核孔进入细胞核.目前，已发现的VDR多态性位点多达13个，研究较多的是4个酶切位点，分别为FokI、BsmⅠ、ApaⅠ和TaqⅠ。其中FokⅠ位点位于第2外显子，在起始密码子的翻译过程中，形成一个与转录因子2B（TF2B）相互作用的短链VDR，比长链VDR转录活性更强]。虽然VDR多态性的具体功能尚不清楚，但是已经发现其与原发性肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌、结直肠癌、前列腺癌的易感性有关，但是其在头颈部癌作为保护因素[1]。BsmⅠ、ApaⅠ位点位于第8内含子，TaqⅠ位点位于第9外显子。VDR的启动子区域较长，可启动多种具有组织特异性的转录产物的合成;而不同区域的多态性对VDＲ基因表达的影响各异，5'端启动区的多态性位点对mRNA的表达有影响(如FokⅠ酶切位点)，而3'端非翻译区的多态性位点则对mRNA的稳定性和蛋白质的效率有影响(如ApaⅠ、BsmⅠ和TaqⅠ)[1]。VDR基因多态性与癌症相关性现在仍有争议，但是有观点认为VDR的基因多态性与癌症发生相关性由高到低分别是乳腺癌最强（Bsm1、Fok1），前列腺癌（Fok1）和恶性黑色素瘤（MM），而与肿瘤预后相关性由强到弱是前列腺癌最强（Fok1），乳腺癌（BSM1，Taq1），肾细胞癌（Taq）[2]。4、维生素受体与肿瘤的关系维生素D受体（VDR）mRNA在基底细胞癌、鳞状细胞癌、早期结肠癌表达增加，乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌其免疫反应增加[7],在晚期低分化的结肠癌中VDRmRNA表达下降[9],患者预后差,这证实了VDR参与的1α,25(OH)2D3信号通路具有组织学差异性。维生素受体的表达已经被证实在不同类型的肿瘤中与患者的预后相关，如胆管腺癌、结直肠癌、乳腺癌、肺腺癌、卵巢癌、肺非小细胞癌、膀胱癌、外阴癌等[4]。VDR敲除鼠的降结肠细胞增殖和有丝分裂活性增加，认为1α,25(OH)2D3调控信号在肿瘤的抑制过程中扮演重要的角色。而VDR敲除鼠乳房、表皮、淋巴组织癌变的风险增加，但是卵巢癌、子宫、肺肝脏组织则不能[1]。5、维生素D通过基因通路发挥抑癌作用已有研究证实，维生素D体内活性形式1α,25(OH)2D3及维生素D类似物通过维18 中国医科大学硕士学位论文生素D受体介导的VD-VDR信号通路发挥抗肿瘤作用[3]。当游离1α,25(OH)2D3被转运到细胞核，并与VDR结合并使VDR发生磷酸化，从而导致VDR构象的改变及转录抑制因子的释放[13]，尤其是核受体辅助抑制剂（NCoRs）和维甲酸-甲状腺激素受体（SMRT）-组蛋白脱乙酰基酶抑制剂（HDAC）复合物。VDR构像改变可以复位VDR活性2（AF2）结构域，从而与刺激因子如类固醇激素受体辅助激活剂（SRCs）、核辅助激活剂结合，乙酰化组蛋白，解离转录DNA[14]。VDR与RXR结合形成异质二聚体，该异质二聚体可促使VDR与靶基因启动子区的VDREs结合，进而调节靶基因的转录活性[11,12]。6、维生素D的流行病学研究虽然早期一些流行病学发现已经展示了低水平的25(OH)D3与结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌的相关性[1]，认为维生素D水平与许多癌症的风险和死亡率相关[17,18]。个体增加维生素D的摄入，可以减少结直肠癌的发生率[19]，且早期非小细胞肺癌患者补充大量的维生素D，可以提高患者的总体生存率和降低复发率[20]。但是近期的流行病学产生了不一致的结果，认为维生素D的缺乏与癌症发生之间没有必然的联系。最近一项纵向流行病学研究总汇分析发现，25(OH)D3浓度与总癌症发病率呈中度反向关联，与癌症死亡率呈负相关。研究评估25(OH)D浓度需要谨慎，因为病情严重的患者可能有较低的25(OH）D水平由于某些行为（例如晒太阳少）或晚期癌症的全身效应[3]，所有测量患者血清中维生素D的含量，最准确的是测量入院时患者血清中25(OH)D3的含量。7、维生素D主要的抑癌机制⑴抑制细胞生长与增殖细胞周期紊乱，在维生素D介导的抗肿瘤细胞增殖的过程中起关键作用。细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK3）与其抑制剂（CKIs）结合可以调节细胞周期。1α,25(OH)2D3增加细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（CKIs）p21和P27的表达,并减少CDK的活性，将细胞周期阻滞在G0/G1期，同时促进视网膜母细胞瘤蛋白pRB去磷酸化，进而抑制肿瘤细胞的增殖[26]。S期激酶相关蛋白2（SKp2）可以特异性的识别降解的底物蛋白（CyclinE,p21,P27,E2F-1,MYC,cyclinD等，其中P27是最重要的和研究最清楚的Skp2底物蛋白）。1α,25(OH)2D3通过抑制SKp2,使P21,P27，P57蛋白增加，cyclinE和周期蛋白依赖激酶CDK2表达下降，从而使细胞周期停滞在G1/S期。细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子1A基因（CDKN1A）与生长阻滞和DNA损伤基因（GADD45A）包含功能性的VDRE和1α,25(OH)[1]2D3-VDR的直接转录靶点。19 中国医科大学硕士学位论文所以1α,25(OH)2D3-VDR可以激活细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子1A基因（CDKN1A）的转录，诱导人U937骨髓单核细胞细胞周期变异及阻滞。1α,25(OH)2D3治疗乳腺癌和宫颈鳞状细胞癌可以增加CDKN1A及CDKN1B（编码P27）的表达，抑制CCND1（编码cyclinD1），CCND3(编码cyclinD3),CCNE1(编码cyclinE1)的表达,因此从而抑制CDK活性，促进pRb次磷酸化，将细胞周期阻滞在G0/G1期[27]。1α,25(OH)2D3在结肠癌、卵巢癌、淋巴瘤细胞影响GADD45的活性破坏DNA；抑制TYMS（编码胸苷酸合成物）和TK1（编码胸苷激酶）的表达，从而影响DNA的复制和细胞周期蛋白D-依赖激酶抑制剂INK4家族的激活，cyclinD依赖激酶抑制剂可以将细胞周期阻滞在G1期[28]。由于其他信号通路的相互干扰，1,25(OH)2D3对于细胞周期的调节有许多间接的影响。1α,25(OH)2D3通过作用于生长因子，如胰岛素样生长因子1（IGF1）和表皮生长因子（EGF），调节胞内激酶通路，如激活IGFBP3（编码胰岛素生长因子结合蛋白3）信号通路与转化生长因子（TGF-β）–Smad3信号级联通路；抑制表皮生长因子受体（EGFR）信号通路，从而抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）-细胞外信号调节激酶（ERK）1，2通路。1α,25(OH)2D3治疗也可以抑制癌基因MYC，这有助于1α,25(OH)[1,3]2D3抗增殖作用。骨化三醇及其类似物降低人类肿瘤细胞端粒酶逆转录酶（TERT）mRNA表达，抑制端粒酶的高活性[29]。虽然在1α,25(OH)2D3治疗对于肿瘤细胞周期的进程似乎有一个整体的抑制，这种精确的分子基础作用在不同类型的肿瘤细胞中可能不同，因此不能形成一个统一的假设1α,25(OH)2D3可以干扰细胞周期。⑵诱导分化。在骨化三醇的作用下，一些肿瘤细胞分化为低度恶性或更加成熟的组织学类型[21]。1α,25(OH)2D3激活VDR，依赖活性VDR和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）复合物，诱导髓系白血病细胞株分化成单核细胞和巨噬细胞，进而抑制细胞增殖[22]。然而在造血干细胞中，1,25(OH)2D3与VDR结合可以抑制白细胞介素12（IL12）蛋白和其他辅助刺激分子（CD40、CD80和CD86）的分泌。在头颈部、结肠和前列腺肿瘤细胞系,1α,25(OH)2D3或维生素D类似物诱导与原始细胞分化相关的基因的表达。在各种结肠癌细胞中，1α,25(OH)2D3治疗不仅通过增加PKC和JNK依赖IUN的活性还通过调节DNA结合，抑制抑制剂因子1和2（ID1，ID2）的表达，ID1及ID2分别影响上皮细胞分化和增殖[25]。1α,25(OH)2D3在肿瘤性结肠息肉癌变形成的结肠癌和胰腺癌中通过诱导CDH1（编码E-cadherin）活化，促进β-catenin从细胞核迁移到细胞质，与20 中国医科大学硕士学位论文细胞转录因子4（TCF4）竞争β-catenin的结合位点，通过干扰Wnt-β-catenin-TCF4信号通路，抑制β-catenin对靶基因转录的调控，从而抑制细胞增殖[21]。在胰腺癌中1α,25(OH)2D3和VDR形成的复合物还可促进蛋白激酶C的表达、影响DNA抑制剂和N末端激酶的表达，进而诱导细胞分化[1]。在乳腺癌细胞中诱导分化标志物酪蛋白，脂滴和黏着蛋白的表达[24]。增加前列腺癌细胞前列腺特异抗体（PSA）、E-cadherin、骨形态发生蛋白（BMP6）的表达[21]。⑶诱导凋亡。除了抗增殖的作用外，1α,25(OH)2D3有越来越多的证据表明，1α,25(OH)2D3作为调节肿瘤细胞凋亡的关键介质，如抑制细胞凋亡促生存蛋白(BCL-2,BCL-XL)的表达或者激活凋亡蛋白（例如BAX，BAK，BAD）[1]。1α,25(OH)2D3在MCF-7乳腺肿瘤和HL-60淋巴细胞中抑制BCL-2的表达，促进前列腺癌、结肠腺瘤和结肠癌细胞BAX和BAK的表达[30]。除了调节BCL2家族的表达，1,25(OH)2D3也可能直接激活caspase效应分子，尽管目前还不清楚1α,25(OH)2D3诱导的细胞凋亡是否依赖caspase。为了验证这一想法，用1α,25(OH)2D3治疗小鼠鳞状细胞癌发现肿瘤细胞VDR表达增加，同时ERK1/2磷酸化被抑制。促生长和促生存信号分子MEK作为ERK上游，在1α,25(OH)2D3治疗后的凋亡的细胞中以Caspase依赖的方式被裂解灭活[31]。最近，江提及1α,25(OH)2D3介导上皮源性的卵巢癌细胞凋亡的一系列机制：1α,25(OH)2D3破坏端粒酶逆转录酶（TERT），因此通过降低端粒酶的活性诱导细胞凋亡[32]。在胰腺癌中VDR可以上调以癌基因PTEN的表达[33]。观察到1α,25(OH)2D3介导的细胞凋亡提示虽然抗肿瘤增殖的作用在体内，体外很明确，但是精准的去剖析其中心机制依旧是个挑战。⑷抗血管生成。1α,25(OH)2D3抑制体外培养的内皮细胞增殖并减少血管在体内生成。血管内皮生长因子（VEGF）-诱导内皮细胞管腔的形成和肿瘤生长[35]，而1α,25(OH)2D3可以抑制乏氧诱导因子-1（HIF-1）及其靶基因VEGF、ET-1和Glut-1等的转录活性、抑制VEGF等相关蛋白的表达，上调VEGFmRNA在血管平滑细胞的表达，在人结肠癌细胞SW480-ADH中促进强效抗血管生成因子THBS1mRNA的表达。在SCC细胞1，25（OH）2D3诱导血管生成因子白细胞介素8（IL8），但在前列腺癌细胞中1α,25(OH)[36]2D3中断IL8信号从而抑制内皮细胞的传导运移与成管。⑸抗炎作用。炎症反应可以促进许多肿瘤进展，骨化三醇在多个癌症肿瘤中具有抗炎作用21 中国医科大学硕士学位论文[37]。具体的机制如下：通过抑制环氧化酶2(COX2)的表达诱导前列腺素的合成；增加分解代谢酶15-羟基前列腺素脱氢酶和抑制前列腺素受体的表达，诱导前列腺信号[38]；正调控MAPK磷酸酶5(众所周知的DUSP10)，抑制p38应激激酶信号，从而诱导炎症细胞因子的生成；抑制NF-kB信号[36]。⑹抑制肿瘤的侵袭和转移。调节纤维蛋白溶解酶原激活系统和基质金属蛋白酶（MMPs）各元件的表达[39]；抑制健糖蛋白C(tenasinC),a6整联蛋白，B4整联电脑；抑制MMP9活性，增加组织中金属蛋白酶1（TIMP1）抑制剂的表达；增加抑癌基因E-cadherin的表达，这与肿瘤的转移负相关[3]8、临床研究1α,25(OH)2D3与化疗药物同时使用，或者在化疗前使用可以增加抗癌作用，而在化疗后使用则达不到预期的效果。在对鳞状细胞癌的相关研究已经证实骨化三醇和顺铂一起使用可以增加肿瘤细胞的凋亡率，用1α,25(OH)2D3处理鳞状细胞癌细胞发现促凋亡信号分子如丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶1在凋亡前和凋亡时表达都会增加，这种MEKK1表达的增加可以增强顺铂的治疗效果，这表明1α,25(OH)2D3预处理肿瘤细胞通过与凋亡有关的相关通路促进肿瘤细胞凋亡，当给予细胞一个额外的细胞毒性刺激治疗时，这种效果会叠加[1]。相似的效果在MCF-7细胞给予维生素D类似物ILX23-7553及阿素霉和电辐射时也可以表现出来[40]。在这些研究中，ILX23-7553增加阿霉素的细胞毒性和抑制p53表达的诱导。1α,25(OH)2D3和紫杉醇治疗主要是通过降低p21表达，增加细胞对DNA损伤剂的敏感性，增加抗肿瘤活性[41]。9、维生素D及其受体在胶质瘤中的相关研究维生素D在中枢神经系统中除了参与神经递质的合成，增加谷胱苷肽的活性，保护中枢神经胶质细胞-星形细胞和免疫调节的功能，在神经肿瘤方面已经证实1,25-二羟基维生素D3能有效的抑制肿瘤细胞增殖，诱导凋亡，并可抑制血管生成及肿瘤的浸润和转移[16]。维生素D受体在正常的胶质细胞及神经细胞中表达[43]。维生素D-VDR复合物在胶质瘤发挥抗肿瘤作用，其可能的机制有以下方面：通过作用于细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（Cyclin-denpendentkinasesinhibitor,CKIs）P15、P27、P21、P57促进其高表达，从而抑制细胞周期蛋白（Cyclin）-D的表达，并可抑制CyclinD-CDK复合物的连续磷酸化，将肿瘤细胞的生长阻滞在G0/G1期，阻止其进入S期，抑制肿瘤细胞的生长与增殖，但是其可以导致有更高恶性特征的C6胶质细胞数目的增多22 中国医科大学硕士学位论文[44]；促进神经母细胞瘤和胶质瘤细胞的凋亡[45]；维生素D可以通过抑制鞘磷酸信号通路杀死胶质瘤细胞[42]；维生素D通过抑制腱糖蛋白-C抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭、血管形成[16]；增加巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）和白血病抑制因子(LIF)的表达[15]；维生素D已经证实在二期临床研究中有利于胶质瘤治疗[10]。参考文献[1]DeebKK,TrumpDL,JohnsonCS.VitaminDsignallingpathwaysincancer:potentialforanticancertherapeutics[J].Naturereviewscancer,2007,7(9):684.[2]KöstnerKIM,DenzerN,MuellerCSL,etal.TherelevanceofvitaminDreceptor(VDR)genepolymorphismsforcancer:areviewoftheliterature[J].Anticancerresearch,2009,29(9):3511-3536.[3]FeldmanD,KrishnanAV,SwamiS,etal.TheroleofvitaminDinreducingcancerriskandprogression[J].Naturereviewscancer,2014,14(5):342.[4]SalomónDG,FermentoME,GandiniNA,etal.VitaminDreceptorexpressionisassociatedwithimprovedoverallsurvivalinhumanglioblastomamultiforme[J].Journalofneuro-oncology,2014,118(1):49-60.[5]CrossHS,BareisP,HoferH,etal.25-HydroxyvitaminD3-1α-hydroxylaseandvitaminDreceptorgeneexpressioninhumancolonicmucosaiselevatedduringearlycancerogenesis[J].Steroids,2001,66(3-5):287-292.[6]LopesN,SousaB,MartinsD,etal.AlterationsinVitaminDsignallingandmetabolicpathwaysinbreastcancerprogression:astudyofVDR,CYP27B1andCYP24A1expressioninbenignandmalignantbreastlesionsVitaminDpathwaysunbalancedinbreastlesions[J].BMCcancer,2010,10(1):483.[7]FriedrichM,RafiL,MitscheleT,etal.AnalysisofthevitaminDsystemincervicalcarcinomas,breastcancerandovariancancer[M]//VitaminDAnalogsinCancerPreventionandTherapy.Springer,Berlin,Heidelberg,2003:239-246.[8]AndersonMG,NakaneM,RuanX,etal.ExpressionofVDRandCYP24A1mRNAinhumantumors[J].Cancerchemotherapyandpharmacology,2006,57(2):234-240.[9]BareisP,BisesG,BischofMG,etal.25-hydroxy-vitamindmetabolisminhuman23 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中国医科大学硕士学位论文致谢衷心感谢恩师李晓晗教授对我的教育与培养，以及在课题选择、实验的开展及论文撰写的整个过程中所给予的悉心指导与全力支持。三年的研究生生涯中，我不仅仅收获到了书本上的知识和工作中的技能，更是有幸在老师身边，见识了老师严谨求实的治学态度和工作作风，这将是我一生学习的榜样。同时，感谢董芳老师在免疫组化操作上对我的热心指导与帮助，感谢研究生同学王涛在数据的整理及实验操作中贡献的力量，感谢李晔、谭驰宇在病理切片中给予技术上的支持。谨向各位表示我最诚挚的感谢与敬意！张群2018年2月28 中国医科大学硕士学位论文个人简历姓名：张群性别：女民族：汉族出生年月：1989年8月学习经历：本科：2010年9月-2015年7月潍坊医学院临床医学专业研究生：2015年9月-今中国医科大学附属盛京医院病理科29