阻塞型睡眠呼吸暂停合并高血压病患者中血清3-NT及NO水平的测定

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分类号：R563.9学校代码：10114密级:公开学号：011530073硕士学位论文阻塞型睡眠呼吸暂停合并高血压病患者中血清3-NT及NO水平的测定Thedeterminationofserum3-NTandNOinpatientswithobstructivesleepapneacombinedwithhypertension研究生：杨亚云指导教师：任寿安主任医师专业名称：内科学（呼吸内科）研究方向：睡眠呼吸障碍学位类型：专业学位所在学院：第一临床医学院中国山西二〇一八年五月一日 分类号：R563.9学校代码：10114密级：公开学号：011530073阻塞型睡眠呼吸暂停合并高血压病患者中血清3-NT及NO水平的测定Thedeterminationofserum3-NTandNOinpatientswithobstructivesleepapneacombinedwithhypertension研究生：杨亚云指导教师：任寿安主任医师专业名称：内科学（呼吸内科）研究方向：睡眠呼吸障碍学位类型：专业学位所在学院：第一临床医学院中国山西二〇一八年五月一日 学位论文独创性声明本人声明，所畝交的学位论文系在导师任瑯安主任指导下？本人独立究成的研宂成采？文中任何引用他人的成采，均已做出明确标注成徇到许可．论文－内容采包含法怵息义上已Ｍｆ他人的任何形式的研究成泶．也不包含本人已用亍其他学位中请的论文或成果。ｇ我１］工作的同志对本研宂所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢惫．本文如违反上述声明，應意承拘以下贵任和后果：１、交回学校授予的学位证书：２、学校可在相关媒体上对作＃本人的行为进行通报ｔ３、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道敎》４、本人负贵因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名日期年＿ｉ＿月＿Ｌ日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时．署名单位仍然为山西医科大学。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名：乂各处冬日期：年年６月丨日指导教师签名：ｐ＃日期：６月丨日Ａ￥（本声明的皈权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用） 山西医科大学硕士学位论文目录中文摘要………………………………………………………………Ⅰ英文摘要………………………………………………………II中英文缩略对照表…………………………………………………………Ⅲ前言…………………………………………………………………71.资料和方法……………………………………………………………81.1参与者…………………………………………………………………81.2研究内容…………………………………………………81.2.1多导睡眠监测…………………………………………………………81.2.2高血压病………………………………………………………81.2.3标本的采集及测定……………………………………………………91.2.4实验过程…………………………………………………………91.3统计分析………………………………………………………………112.结果…………………………………………………………………122.1各组身高、体重、颈围、腰围、臀围的比较……………………………122.2各组3-NT、NO的表达水平…………………………………122.3不同程度的OSA患者中血清3-NT和NO的水平……………………132.4相关性分析…………………………………………………133.讨论…………………………………………………………………144.结论…………………………………………………………………18参考文献…………………………………………………………………19综述…………………………………………………………………21参考文献…………………………………………………………………26附录……………………………………………………………………29致谢…………………………………………………………………………………30个人简历…………………………………………………………………311 山西医科大学硕士学位论文阻塞型睡眠呼吸暂停合并高血压病患者中血清3-NT及NO水平的测定摘要目的通过测定阻塞型睡眠呼吸暂停（OSA）合并高血压病患者体内血清3-硝基酪氨酸（3-NT）、一氧化氮（NO）水平，探讨OSA合并高血压病可能的发病机制，为OSA合并高血压病的治疗提供新的治疗靶点。方法从本院呼吸科睡眠监测室中收集87例符合入选标准和排除标准的患者，分为4组：对照组（16例）、单纯OSA组（29例）、单纯高血压病组（17例）、OSA合并高血压病组（25例）。抽取各组患者晨起静卧5分钟的后肘静脉血，离心后留取血清，用ELISA法测3-NT、化学发光法测NO的水平。结果（1）单纯OSA组、单纯高血压病组、OSA合并高血压病组与正常对照组之间身高、体重、腰围、臀围、颈围的比较无统计学意义（P>0.05）；（2）与正常对照组相比，单纯OSA组、单纯高血压病组、OSA合并高血压病组血清3-NT明显升高，血清NO水平明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与单纯OSA组、单纯高血压病组相比，OSA合并高血压病组血清3-NT进一步升高，血清NO水平进一步降低，差异有统计学意义（P<0.05）；单纯OSA组与单纯高血压病组之间血清3-NT、NO水平的差异无统计学意义（P>0.05）。（3）OSA严重程度越高，血清3-NT水平越高，NO的水平就越低，差异有统计学意2 山西医科大学硕士学位论文义（P<0.05）。（4）各组AHI与3-NT的水平呈正相关(r=0.524，P<0.001)，而与NO的水平呈负相关(r=-0.873，P<0.001)。结论1.OSA和高血压病患者血清3-NT水平升高、NO水平降低，提示硝化应激水平升高，且硝化应激的水平与OSA的严重程度密切相关，提示了硝化应激的标志物3-NT、NO在OSA和高血压病的发病机制中均起到了一定的作用；2.OSA合并高血压病患者有更高水平的3-NT和更低水平的NO表达，两者呈负相关，提示OSA合并高血压病有更高水平的硝化应激，过氧亚硝酸盐的形成参与OSA合并高血压病的发病过程。关键词阻塞型睡眠呼吸暂停、慢性间歇低氧、氧化应激、3-硝基酪氨酸、一氧化氮3 山西医科大学硕士学位论文Thedeterminationofserum3-NTandNOinpatientswithobstructivesleepapneacombinedwithhypertensionAbstractObjectiveTodeterminetheexpressionofserum3-nitrotyrosine(3-NT)andnitricoxide(NO)inpatientswithobstructivesleepapnea(OSA)combinedwithhypertension,andexplorethepossiblepathogenesisofchronicintermittenthypoxiainducedhypertension,whichcanprovidenewtherapeutictargetsforthetreatmentofOSAcombinedhypertention.MethodsCollect87patientsmettheinclusioncriteriaandexclusioncriteriafromtheourSleepMonitoringRoom,dividedinto4groups:controlgroup(16cases),simpleOSAgroup(29cases),simplehypertensiongroup(17cases),OSAwithhypertensiongroup(25cases).Toextractthevenousbloodofthepatientafterthemorning,theserumwascollectedaftercentrifugation,3-NTmeasuredbyELISAmethod,chemiluminescencemethodtomeasureNOexpression.Results（1）Therewasnosignificantdifferenceinheight,weight,waisthipratioandneckcircumferencebetweenOSAgroup,hypertensiongroup,OSAwithhypertensiongroupandcontrolgroup(P>0.05);（2）Comparedwiththecontrolgroup,OSAgroup,hypertensiongroup,OSAwithhypertensiongroupserum3-NTincreasedsignificantly,serumNOlevelsweresignificantlylower,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05);comparedwiththeOSAgroupandthehypertensiongroup,theserum3-NTlevelintheOSAcombinedwithhypertensiongroupincreasedfurther,andtheserumNOleveldecreased4 山西医科大学硕士学位论文further,andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).（3）ThehighertheseverityofOSA,thehigherthelevelofserum3-NT,thelessthelevelsofNO,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).（4）AHIandthelevelsof3-NTwerepositivelycorrelated(r=0.524，P<0.001)，butAHIandthelevelsofNOwerenegativelycorrelated(r=-0.873，P<0.001).Conclusion1.OSAandhighbloodpressurepatients3-NTlevelsishigh,NOlevelisreduced,promptnitrationstresslevelsrise,andnitrationstressleveliscloselyrelatedtotheseverityofOSA,promptthenitrationstressmarkers3-NT,NOinthepathogenesisofOSAandhypertensionhaveplayedarole;2.OSAcombinedhypertensionpatientshavehigherlevelsof3-NTandlowerlevelNOexpression,andnegativelycorrelated,promptOSAcombinedhypertensionhasahigherlevelofnitrationstress,theformationofnitriteinOSAcombinedhypertensiondiseaseprocess.[Keywords]Obstructivesleepapnea,chronicintermittenthypoxia,oxidativestress,3-nitrotyrosine,nitricoxide5 山西医科大学硕士学位论文中英文缩略对照表英文缩写英文名称中文名称OSAobstructivesleepapnea阻塞型睡眠呼吸暂停3-NT3-nitrotyrosine3-硝基酪氨酸NOnitricoxide一氧化氮CIHchronicintermittenthypoxia慢性间歇低氧O2-superoxideanionfreeradical超氧阴离子自由基ONOO-peroxynitriteanion过氧亚硝基阴离子CBcarotidbody颈动脉体NOSnitricoxidesynthase一氧化氮合酶eNOSendothelialnitricoxidesynthas内皮型NO合酶AHIapnea—hypopneaindex睡眠呼吸暂停指数ROSreactiveoxygenspecies活性氧簇RNSreactivenitrogenspecies活性氮FADflavinadeninedinucleotide黄素腺嘌呤二核苷酸FMNflavinmononucleotide黄素单核苷酸GCguanylatecyclase鸟苷酸环化酶cGMPcyclicguanosinemonophosphate环磷酸鸟苷BH4tetrahydrobiopterin四氢生物蝶呤reducednicotinamideadenime还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷NADPHdinucleotidephosphate酸磷酸6 山西医科大学硕士学位论文前言阻塞型睡眠呼吸暂停(obstructivesleepapnea)，简称OSA，是一种睡眠障碍性疾病，以完全呼吸暂停数十秒或更长时间（即呼吸暂停）或者有效呼吸幅度减弱（即低通气）为特征。慢性间歇低氧（CIH）是OSA患病的主要病理生理特征之一。流行病学和临床研究结果都证实OSA可累及多系统并造成多器官损害，最终影响高血压病、冠心病、糖类及脂类代谢异常、脑梗死、脑出血、老年痴呆等多种疾病的发病率。据最新的流行病学调查显示，3%-7%的成年男性和2%-5%的成年女性诊断出患有OSA[1]。OSA合并高血压病和高血压病患者同时伴有OSA的比例分别为50%-92%、30%-50%[2-3]。OSA通过交感神经机制、RAAS系统的激活、氧化应激、系统炎症反应、胰岛素抵抗等机制导致高血压病的发生，本文主要就氧化应激这一主要机制进行阐述。3-NT、NO均是氧化应激的产物。Moya[4]等人的研究显示：由NO与超氧阴离子自由基（O2-）反应导致的过氧亚硝酸盐的形成是CIH诱发的颈动脉体（CB）化学感受器反应增强和高血压病形成的一个关键步骤。过氧亚硝基阴离子（ONOO-）水平增加的主要后果之一是使蛋白质的酪氨酸残基变成3-NT[5]。之前有研究报道过低心血管疾病危险因素的OSA患者，NO有效性的减少与微循环内皮细胞的过氧亚硝酸盐生成的增加有关[6]。NO是由NO合酶（NOS）在酶的催化和辅酶因子的作用下将氧分子结合到L-精氨酸后产生，这些辅酶因子是黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）、黄素单核苷酸（FMN）、亚铁血红素、四氢生物蝶呤（BH4）和Ca2+钙调蛋白。因此，NO与NOS活性相关。Saradhadevi[7]等人发现了内皮型NO合酶（eNOS）解耦联是OSA患者NO利用度降低和内皮O2-来源生产过剩的原因，eNOS是OSA诱导的血管内皮功能障碍的新途径。故3-NT、NO有可能是CIH诱发的继发性高血压病的关键作用靶点，目前OSA促进高血压病发生发展的确切机制尚未阐明，本实验通过3-NT、NO水平的测定来解释OSA是怎样通过硝化应激的介导机制导致高血压病的。7 山西医科大学硕士学位论文1资料与方法1.1参与者收集2016年7月至2017年7月我院门诊、住院部、健康体检者并于山西医科大学第一医院呼吸科睡眠监测室行多导睡眠监测而且之前未予以CPAP呼吸机治疗的87名患者，年龄在18-70岁，其中男性47名，女性40名。正常对照组16名、单纯OSA组29名、单纯高血压病组17名、OSA合并高血压病组25名。入选标准：所有患者均应接受夜间至少7h的多导睡眠呼吸监测（PSG），监测当天必须禁饮茶、咖啡、酒、镇静药物等，近1月无叶酸、VitB6、VitB12、雌激素等药物服药史，监测前1周戒烟酒，口服降压药者停药1周，且高血压发生在OSA之后。排除标准：排除肾脏血管疾病及糖脂代谢异常诱发的继发性高血压病；急慢性感染性疾病；冠心病、心肌梗死、心力衰竭；严重肾脏疾病；慢性呼吸系统疾病；心脑血管疾病；糖尿病、甲亢等内分泌疾病；肿瘤及严重脏器功能衰竭；结缔组织疾病；近期有手术、创伤及其他严重应激病史；精神疾病患者。1.2研究内容1.2.1多导睡眠监测入选者均行夜间不低于7h多导睡眠监测，测量身高、体重、颈围、腹围、臀围、睡前及晨起血压。计算体质量指数(BMI)，记录呼吸暂停指数(AHI)、夜间呼吸暂停的最长时间、最低的夜间血氧饱和度，用Epworth嗜睡量表（见附录1）进行嗜睡评分。OSA患者根据2014年APC发表的《成人阻塞型睡眠呼吸暂停诊断临床实践指[8]南》来判断，AHI≥15次/h，伴或者不伴临床症状；或AHI≥5次/h，伴有临床症状。1.2.2高血压病[9]据《中国高血压防治指南》（2010版）的标准诊断：诊室血压≥140/90mmHg,8 山西医科大学硕士学位论文家庭血压≥135/85mmHg,24小时动态血压均值≥130/80mmHg。血压测量采用校正的汞柱式血压计，在标准状态下测量，即同一时间、同侧臂、同一血压计、由同一专业人员测量。每次重复测血压3次，间隔2min，取血压平均值，测量患者睡前及晨起血压。1.2.3标本采集及测定所有纳入者进行夜间多导睡眠监测7h结束后于晨起时空腹静卧5分钟，采血管采集5ml的肘部静脉血，室温条件下自然凝固30分钟，不抗凝，用3000r/min的离心机离心10min，然后收集上层的血清，保存在-80℃冰箱中。1.2.4实验过程使用试剂盒进行酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清3-NT、化学发光法测定血清NO，操作严格按照试剂盒要求及操作进行各组内及组间的比较。实验的主要仪器及耗材：3-硝基酪氨酸ELISA检测试剂盒：贝茵莱生物科技有限公司（武汉）货号：HM10708一氧化氮测试盒：建成生物工程研究所（南京）货号：A013-2酶标仪：普朗新技术有限公司（北京）仪器型号：DNM-9602洗板机：芬兰（ThermoLabsystems）仪器型号：AC8离心机：微量高速离心机仪器型号：TG16W培养箱：隔水式恒温培养箱仪器型号：GNP-9080型漩涡混匀器：科航实验仪器有限公司（南京）仪器型号：UVS-1使用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清3-NT的具体步骤如下：（1）标准品的稀释：准备6个编好号码的小试管，然后在每个试管中先加入100μL的标准品稀释液，然后在第一个试管中加入原浓度标准品100μL，充分混匀；从该9 山西医科大学硕士学位论文试管中取100μL的溶液加入下一个试管中充分混匀；按照此方法依次稀释好5个浓度梯度，第六个试管作为标准对照品，可见稀释后的浓度分别是：160ng/ml、80ng/ml、40ng/ml、20ng/ml、10ng/ml、0ng/ml，然后各个梯度的每孔加样量都是50μL；（2）加样：每个浓度分为2个平行孔：空白孔、待测样品孔，每个浓度的待测样品孔在酶标包被板上首先加入40μL的样品，然后加入10μL的被生物素标记的抗3-NT抗体，而空白孔不加样品和抗3-NT抗体作为对照组；（3）加酶：各孔均加入50μL的酶标试剂，但空白孔必须除外；（4）温育：封板膜封板后温育，温育的条件为37℃、30分钟；（5）配液洗涤：30倍的浓缩洗涤液用同等倍数的蒸馏水稀释；（6）洗涤：温育30分钟后揭开封板膜，弃掉液体后进行甩干，连续重复5次在每个孔中加满配置好的洗涤液，并经过30秒的静置后弃掉，最后拍干；（7）显色：然后在每个孔中先后加入50μL的显色剂A和50μL的显色剂B，轻轻混匀后放置在37℃的环境中显色，时间为10分钟，必须做到避光；（8）终止：显色10分钟后将50μL的终止液加入各个孔中进行终止反应；（9）测定：在加入终止液15分钟的时间内用酶标仪测量各孔在波长为450nm时的吸光度值（OD值），之前还必须用空白孔进行调零；（10）计算：计算出以横坐标为浓度、纵坐标为吸光度值的多项式二次回归方程，然后便可根据测得的吸光光度值推算出所测样品的浓度，最后乘以稀释倍数，所得结果即为样品的实际浓度。使用化学发光法测定血清NO的具体步骤如下：（1）前处理：取100μL的血清先后加入200μL的试剂一、100μL的试剂二，并且每次加入后均充分混匀，静置10分钟后放在离心机中离心15分钟，离心机的转速为10 山西医科大学硕士学位论文3500-4000转/分，离心完后取上层的160μL上清液进行下一步的操作；（2）操作表：空白孔标准孔测定孔双蒸水（mL）0.1620μmol/L亚硝酸钠标准液（mL）0.16上清液（mL）0.16显色剂（mL）0.080.080.08充分混匀，静置15分钟后用酶标仪测量各孔在波长550nm时的吸光光度值，然后根据计算公式计算出各孔的NO含量。计算公式：测定OD值-空白OD值NO含量（20μmol/L）=×标准品浓度20μmol/L×稀释倍数（4倍）标准OD值-空白OD值1.3统计学分析实验数据应用SPSS22.0统计软件进行统计分析；统计结果用均数±标准差来表示统计结果；用单因素方差分析表示多组间均数的比较；组间两两比较采用最小显著性差（LSD）检验；用Pearson直线相关分析来描述两个变量之间的相关性，P<0.05时即为差异有统计学意义。11 山西医科大学硕士学位论文2结果2.1单纯OSA组、单纯高血压病组、OSA合并高血压病组与正常对照组之间身高、体重、颈围、腰围、臀围的比较见表1；表1各组中的身高、体重、颈围、腰围、臀围的比较（均数±标准差）组别例数身高（cm）体重（Kg）颈围（cm）腰围（cm）臀围（cm）NC组16166.38±5.06bcd68.94±4.36bcd37.59±2.43bcd97.22±3.90bcd104.13±3.40bcdEH组17169.82±6.95acd65.79±4.36acd39.82±1.78acd101.41±2.05acd105.18±4.67acdOSA组29167.79±5.13abd68.44±3.67abd40.81±1.66abd100.05±3.81abd105.79±4.28abdOSA+EH组25168.20±6.52abc66.40±4.89abc40.04±1.77abc103.14±3.73abc106.28±3.88abcF值2.739.0782.200.8420.239P值0.8940.6470.0940.4750.869注：NC组：正常对照组；EH组：单纯高血压病组；OSA组：单纯阻塞型睡眠呼吸暂停组；OSA+EH组：阻塞型睡眠abc呼吸暂停合并高血压病组；与NC组比较，P>0.05；与高血压病组比较，P>0.05；与OSA比较，P>0.05；与OSA+EHd组比较，P>0.05，差异无统计学意义。2.2正常对照组、单纯OSA组、单纯高血压病组、OSA合并高血压病组的3-NT、NO的平均值(均数±标准差），见表2；表2各组3-NT、NO的测定值(xs)组别例数3-NT（ng/ml）NO（μmol/L）NC组1639.86±3.5141.92±5.00EH组1750.83±5.20a37.10±3.46aOSA组2948.44±4.48ab36.09±3.89abOSA+EH组2558.96±7.05abc29.55±3.79abcF值41.34233.135P值0.0000.000注：与NC组比较，aP<0.05；与EH组比较，bP>0.05，cP<0.05；与OSA组比较，cP<0.05.与正常对照组相比，单纯OSA组、单纯高血压病组、OSA合并高血压病组血清NO明显降低，血清3-NT明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。与单纯OSA组、单纯高血压病组相比，OSA合并高血压病组血清NO进一步降低，血清3-NT进一步升高，差12 山西医科大学硕士学位论文异有统计学意义（P<0.05）。单纯OSA组与单纯高血压病组血清3-NT、NO水平的差异无统计学意义（P>0.05）。2.3不同程度的OSA患者中血清3-NT和NO水平的平均值（均数±标准差）见表3；OSA严重程度的分级见附录2。表3不同程度的OSA患者中血清3-NT、NO的测定值(xs)组别例数3-NT（ng/ml）NO（μmol/L）轻度组735.55±2.51bc40.89±2.80bc中度组1541.45±3.26ac37.78±2.48ac重度组3252.55±3.59ab29.57±2.29abF值48.14330.672P值0.0000.000注：与轻度组比较，aP<0.05；与中度组比较，bP<0.05；与重度组比较，cP<0.05，差异有统计学意义。2.4各组AHI与3-NT、NO水平的相关性分析，见表4；表4各组AHI与3-NT、NO水平的相关性分析组数Pearson相关系数（r）P值AHI与3-NT0.524<0.001AHI与NO-0.873<0.001各组AHI与3-NT的水平呈正相关(r=0.524，P<0.001)，而与NO的水平呈负相关(r=-0.873，P<0.001)。13 山西医科大学硕士学位论文3讨论氧化应激起源于抗氧化防御机制和氧化剂产生之间的不平衡；这意味着抗氧化能力的减弱和/或活性氧和活性氮(ROS/RNS)的产生过剩导致了氧化应激[10]。虽然氧自由基在调节信号转导和细胞功能方面有重要的作用，但是产生过剩会损伤脂质、蛋白质和DNA，从而影响很多细胞的生理机制。最近的研究显示缺氧相关的氧自由基与OSA患者的氧化应激和心血管疾病的密切联系。目前公认的是，OSA是高血压病发生发展的独立危险因素[11]，Schulz[12]等人的研究也发现了暴露于CIH条件下的大鼠动脉血压明显增高。虽然OSA和高血压病之间的联系是众所周知的，OSA和心血管疾病的联系已经提出来很多机制；证据包括交感神经激活、氧化应激、炎症、内皮功能障碍和代谢失调。间歇低氧可通过氧化应激促进内皮功能障碍和心血管疾病，本文主要描述氧化应激在OSA患者中的心血管疾病危险因素中的作用。研究证实，OSA患者体内氧化应激加重，OSA合并高血压病患者氧化应激的加重更加明显[13,14]，本研究通过测定单纯OSA、单纯高血压病、OSA合并高血压病患者氧化应激状态下的敏感和特异性指标3-NT、NO来进一步阐述氧化应激在OSA诱发的继发性高血压病中的作用，证明3-NT和NO在OSA合并高血压病疾病中的作用，为OSA合并高血压病的治疗提供敏感的治疗靶点，为OSA合并高血压病提供新的治疗方向。CB在维持体内氧稳态中起着主要作用，CIH条件下对CB的缺氧刺激导致了化学感受器放电的增加，这反过来又引起了反射性交感神经的兴奋、心血管系统和呼吸系统的异常调节，从而导致相关疾病的发生。CB化学感受器反应的加剧与人的交感神经介导性的疾病如高血压病、胰岛素抵抗、心力衰竭和OSA等疾病密切相关。氧化应激过程中产生的大量ROS与NO和/或NO衍生的RNS发生生物化学反应，生成ONOO-，使细胞内蛋白质中的酪氨基残基或者游离的酪氨酸硝化成3-NT[15]，生成3-NT的过程即硝化应激，硝化应激是氧化应激的一种。由于ONOO-的半衰期短和在体内大量分布，ONOO-很难测量，故通过检测3-NT来间接反映氧化应激的水平。有研究发现CIH可以增加CB中3-NT的免疫反应，这与CB化学感受器对缺氧的反应增加相关，且暴露于CIH7-21天的大鼠体内的3-NT免疫反应积累量随着时间而增加14 山西医科大学硕士学位论文[16]。在本次小样本人群中的研究显示，单纯OSA组、OSA合并高血压病组患者的血清中3-NT水平明显高于对照组，而且OSA的严重程度与3-NT密切相关，AHI的增加会导致更高水平的3-NT，3-NT是反映机体氧化应激和硝化应激新的生物指标，证实了OSA患者硝化应激水平明显增高，而且与病情的严重程度相关，与上述研究结果一致。Jelic等人[17]也发现了OSA组经过CPAP呼吸机治疗后氧化应激标志物3-NT较治疗前明显下降，氧化应激水平下降，促进了血管内皮的修复。但检测人体CB中3-NT的水平难度大且不易操作，血清中3-NT的水平易受多种外在因素（如酸碱环境、不饱和脂肪酸、谷胱甘肽等）的影响，血清中3-NT的水平是否可间接反映CB中3-NT的水平仍需要进一步的研究来探讨。与高血压病有关的管腔内的压力和振荡剪切应力的增加可以激活氧化还原反应信号通路,提高了脉管系统的氧化应激,损害体内和体外的血管内皮功能，导致血压升高。我们的研究也证实了单纯高血压病组、OSA合并高血压病组的3-NT水平与正常对照组相比有更高水平的表达，氧化应激损伤加重。且有研究证实，高血压病患者血清中的3-NT水平显著升高并与病情的进展程度密切相关[18]，故可通过检测血清中3-NT的水平来反映高血压病的严重程度。3-NT导致血压升高的具体机制尚不完全清楚，可能机制为：NO的合成和NO-sGC-cGMP信号的改变或内皮细胞产生的NO生物利用度的减少导致的氧化应激增加是高血压病发病机制的关键因素[19]；ONOO－可引起酪氨酸的硝基化，导致体内脂质、蛋白质和DNA的损伤，从而造成血管内皮系统的功能障碍；3-NT由NO和O2-反应生成，NO作为重要的舒张血管的因子，3-NT会降低NO的生物利用度，加重血管内皮的损伤及升高血压。Moya[4]等人发现，3-NT能通过蛋白残留物的硝基化促进CB化学感受器反应的增强，这反过来促进高血压病的发生，而ONOO-清除剂能有效的阻止CB化学感受器反应的增加和逆转CIH诱发的高血压病。本研究也显示了OSA合并高血压病组的硝化应激水平较单纯OSA组、单纯高血压病组有更高水平的表达，差异有统计学意义，提示过氧亚硝酸盐的形成参与OSA合并高血压病的发病过程，通过阻断亚硝酸盐的形成途径在一定程度上可以为减少OSA合并高血压的发病机率，而且为今后OSA合并高血压病的治疗提供新的治疗方向。但硝化应激与慢性间歇低氧条件下的高血压病之间的具体机制目前还不是十分清楚，准确的机制及硝化应激的特异和敏感性指标还需要进一步研究来证实。15 山西医科大学硕士学位论文NO作为最重要的血管舒张因子。在氧化应激期间，NO与O2-反应生成强氧化剂过氧亚硝基离子，从而减少了NO的有效性，且之前提到过eNOS是使NO生物利用度降低和O2-的产生过剩的原因，这促进了血管内皮组织的氧化应激。这种功能障碍称为“eNOS解耦联”，在心血管疾病，包括糖尿病、高血压病、心脏衰竭等疾病的发病机制中均起着重要的作用。本研究中单纯高血压病组较正常对照组有更低水平的NO的表达，舒张血管因子减少，舒缩比例失衡，血压升高。NO被认为是CB化学感受器放电的抑制调制器，NO水平的减少可能部分促进CB放电基线的升高和化学感受器对缺氧的反应。在OSA期间上气道的循环阻塞导致间歇低氧和高碳酸血症、胸腔负压和微觉醒，从而刺激人体血管内皮释放的缩血管活性物质增多，而舒血管活性物质NO则分泌减少，导致了缩血管因子作用占优势，血管舒缩比例失衡，从而造成血管内皮细胞功能障碍和血压升高。本研究显示单纯OSA组NO水平较正常对照组有更低的表达，而且NO水平与OSA的严重程度呈负相关，OSA合并高血压病患者的血清NO水平较单纯OSA组、单纯高血压病组更低。这一解释与Moya[20]等人的研究一致，他的研究发现，大鼠暴露于CIH7天后CB中的NO减少。NO是由左旋精氨酸和氧分子结合产生的，OSA反复的低氧血症导致的氧化应激使O2-生成过多，从而导致NO破坏增多，NO水平下降；而且低氧血症导致氧分子降低，NO合成减少，促进高血压病的发生发展。在氧化应激条件下，NO与O2-迅速反应形成ONOO-，从而导致3-NT的生成。研究发现内皮功能障碍时NOS表达和超氧化物产生同时增加，且与3-NT生成增加密切相关[21],而且NO有效性的减少与内皮细胞生成增加的过氧亚硝酸盐有关[6]。由此可见，NO利用度的减少和过氧亚硝酸盐的生成增加会加重血管内皮的损伤，导致不同程度的内皮功能障碍，从而进一步导致血压的升高，而且NO利用度的减少与过氧亚硝酸盐的生成密切相关、相互影响，但两者之间具体的联系途径仍不清楚。Saradhadevi[7]等人发现eNOS解耦联是导致NO利用度减少和OSA血管内皮功能障碍的关键机制,而eNOS的辅助因子BH4利用度的降低是OSA患者eNOS解耦联的关键，也有研究发现ONOO-很容易氧化BH4和导致eNOS解耦联，促进O2-产生过剩和NO不足的循环[22]。3-NT通过影响氧化eNOS的辅助因子BH4使其利用度降低，导致eNOS解耦联，从而使NO利用度减少和造成血管内皮功能障碍。本研究也证实了各组中血清3-NT水平越高，血清NO的表达水平就越低，3-NT、NO分别作为慢性间16 山西医科大学硕士学位论文歇低氧诱发的高血压病的正向、负向调节因子，Pearson直线相关分析发现AHI与3-NT的水平呈正相关，与NO的水平呈负相关，3-NT水平越高，对eNOS解耦联的影响越大，NO的生物利用度就越低，从而造成严重的血管内皮功能障碍而影响血压。本研究通过检测OSA合并高血压病患者体内的3-NT、NO水平，从硝化应激水平阐述了OSA合并高血压病的发病机制，结果表明了OSA合并高血压病患者有更高水平的3-NT及更低水平的NO的表达，这提示了OSA合并高血压病患者有更高水平的硝化应激，本研究为以后OSA合并高血压病的防治提供了更好的理论支持，但ONOO-清除剂逆转CIH诱发的高血压病目前仅在大鼠实验中取得了成功，在人体中效果如何及相关医学伦理问题尚需进一步研究来探讨，需要更多的研究来增加我们对OSA诱发的心血管疾病和新的、更有效的治疗方法的认识。17 山西医科大学硕士学位论文4结论1.OSA和高血压病患者血清3-NT水平升高、NO水平降低，提示硝化应激水平升高，且硝化应激的水平与OSA的严重程度密切相关，提示了硝化应激的标志物3-NT、NO在OSA和高血压病的发病机制中均起到了一定的作用；2.OSA合并高血压病患者有更高水平的3-NT和更低水平的NO表达，两者呈负相关，提示OSA合并高血压病有更高水平的硝化应激，过氧亚硝酸盐的形成参与OSA合并高血压病的发病过程。18 山西医科大学硕士学位论文参考文献[1]PunjabiNM.Theepidemiologyofadultobstructivesleepapnea.ProcAmThoracSoc[J].2008,5(2):136-143[2]DragerLF,GentaPR,PedrosaRP,etal.Characteristicsandpredictorsofobstructivesleepapneainpatientswithsystemichypertension[J].AmJCardiol,2010,105(8):1135-1139[3]WorsnopCJ,NaughtonMT,BarterCE,etal.Theprevalenceofobstructivesleepapneainhypertensives[J].AmJRespirCritCareMed,1998,157(1):111-115[4]MoyaEA,PaulinaA,CarlosV,etal.Intermittenthypoxia-inducedcarotidbodychemosensorypotentiationandhypertensionArecriticallydependentonperoxynitriteformation[J].OxidativeMedicineandCellularLongevity.2016,2016:9802136[5]Ferrer-SuetaGandRadiR.Chemicalbiologyofperoxynitrite:kinetics,diffusion,andradicals[J].ACSChemicalBiology.2009,4(3):161–177[6]PattBT,JarjouraD,HaddadDN,etal.Endothelialdysfunctioninthemicrocirculationofpatientswithobstructivesleepapnea[J].AmJRespirCritCareMed.2010，182:1540–1545[7]SaradhadeviV,KyleP,AdamP,etal.EndothelialNitricOxideSynthaseUncoupling:ANovelPathwayinOSAInducedVascularEndothelialDysfunction[J].RespirPhysiolNeurobiol.2015,1(0):40-47[8]QaseemA，DallasP，0wensDK，eta1．Diagnosisofobstmctivesleepapneainadult8：aclinicalpracticeguideIinefromtheAmericancollegeofPhysicians[J]．AnnIntemMed，2014,161(3)：210—220[9]中国高血压防治指南修订委员会.中国高血压防治指南2010[J].中华心血管病杂志，2011，39（7）,579-615[10]Lopez-AlarconaC,DenicolaA.Evaluatingtheantioxidantcapacityofnaturalproducts:Areviewonchemicalandcellular-basedassays.Anal.Chim.Acta.2013,763:1-10[11]CalhounDA.Obstructivesleepapneaandhypertension.Curr.Hypertens.2010,12,189–195[12]SchulzR,MurzabekovaG,EgemnazarovB,etal.Arterialhypertensioninamurinemodelofsleepapnea:roleofNADPHoxidase2[J].Hypertens.2014,32,300–305[13]郝雁，纪明，李黎等.阻塞性睡眠呼吸暂停相关高血压与氧化应激研究[J].中华高血压杂志.2015,23,85-86[14]王鹏举，李江平，曹红等.氧化应激反应在OSAHS伴原发性高血压中的作用[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志.2014,28(9),604-606[15]ChenLl,YuanD,WangGL,etal.ClinicopathologicalsignificanceofexpressionofTspan-1,JablandP27inhumanhepatocellularcarcinoma[J].JKoreanMedSci.2010,25(10)，1438-1442[16]R.DelRio,MoyaEA,andIturriagaR,etal.Differentialexpressionofproinflamma-torycytokines,endothelin-1andnitricoxidesynthasesintheratcarotidbodyexposedtointermittenthypoxia[J].BrainResearch.2011,1395:74-8519 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山西医科大学硕士学位论文综述阻塞型睡眠呼吸暂停合并高血压病的硝化应激机制的研究进展摘要：阻塞型睡眠呼吸暂停，简称OSA，是一种常见的睡眠呼吸障碍性疾病，由反复的上呼吸道阻塞引起,通常与夜间打鼾伴呼吸暂停、憋醒、夜尿增多，白天嗜睡、疲劳、注意力不集中、执行能力差有关，与高血压病、肺动脉高压、冠状动脉疾病、心房纤颤和糖尿病等多种疾病有关。OSA通过交感神经机制、RAAS系统的激活、氧化应激、系统炎症反应、胰岛素抵抗等机制导致高血压病的发生，其中氧化应激是近年来研究的重点和热点，硝化应激作为氧化应激的一种，本文就硝化应激机制进行阐述。关键词：阻塞型睡眠呼吸暂停、高血压、硝化应激、3-硝基酪氨酸、一氧化氮[1]OSA被认为是系统性高血压病的一个独立的危险因素，3%-7%的成年男性和[2]2%-5%的成年女性被诊断患有OSA。许多研究都证实OSA合并高血压病和的高血[3-4][5]压病患者同时伴有OSA的比例分别为50%-92%、30%-50%。Marin等人发现，与没有OSA的参与者相比，OSA的存在与高血压事件的风险升高有关，然而，CPAP的治疗与高血压病风险降低有关。这表明了OSA与高血压病的进展有关，显示了呼吸暂停低通气指数(AHI)和高血压病相关。虽然OSA与高血压病之间的联系已经被证明了，但是导致高血压病发病的具体机制还不完全清楚，最接受的机制是CIH导致了全身的氧化应激、炎症和交感神经的亢进，这导致了内皮功能障碍和高血压。本文就OSA继发高血压病的氧化和硝化应激机制做一综述。1.概述1.1氧化应激术语“氧化应激”指活性氧（ROS）和活性氮（RNS）的增多和抗氧化防御系统[6]之间的不平衡导致了严重的氧化还原反应障碍。过度的ROS可能导致生物合成物如脂类、蛋白质和DNA的氧化增加。氧化应激与心血管疾病比如动脉粥样硬化、高[7]血压病和内皮功能紊乱有很强的联系，而且越来越多的临床研究证明了未治疗的[8]OSA患者产生了氧化应激和CPAP的有效治疗能逆转这些异常情况。在过去的几十年,OSA与心血管疾病的中间通路已经被很好阐述了。新陈代谢和细胞改变的主要21 山西医科大学硕士学位论文触发点是CIH，这也就是OSA患者夜间的低氧-再复氧事件。别的OSA相关的事件如高碳酸血症、觉醒和胸腔压力的改变可能会起到重要的作用，但是很少被普遍证明。阻塞性睡眠呼吸暂停综合症导致心血管疾病另一个潜在的机制是氧化应激的增加。在生理条件下,侵略性和保护性因素之间的平衡影响氧化还原反应。1.23-硝基酪氨酸3-硝基酪氨酸（3-NT）蛋白是酪氨酸的氨基酸蛋白后修饰的结果，亚硝酸盐[9]共价取代酪氨酸芳香酚的3位。酪氨酸硝基化最著名的途径之一是硝化反应的中间体过氧亚硝酸(ONOO−)。过氧亚硝酸盐是在体内由过氧阴离子(O2−)和一氧化氮[10](NO)快速反应形成的。NADPH氧化酶和一氧化氮合酶分别产生O2-和NO。ONOO-是参与氧化应激的重要活性氮之一，它极不稳定而且不易检测到，蛋白质的酪氨酸[11]残基生成3-NT是ONOO-增加的主要结果之一，生成3-NT的过程即硝化应激，硝化应激是氧化应激的一种。目前公认的是，NT是ONOO-在体内生成的特异性标志物[12]。酪氨酸硝基化的途径包括：OONO-依赖途径和非OONO-依赖途径，非OONO-依赖途径又包括：（1）过氧化物酶依赖途径；（2）铜/锌-过氧化物歧化酶催化途径；（3）过氧化氢酶依赖途径；（4）血红蛋白催化途径。酪氨酸硝基化不仅抑制了其磷酸化在细胞内的信号通路的作用，而且可以使细胞内多种重要酶失活，改变重要蛋白质的水解速度，损伤细胞的线粒体和DNA，从而影响细胞内的多条信号转导通路，导致了多种疾病的发生。2.硝化应激在OSA低氧中的表达OSA典型的病理生理机制是慢性间歇低氧（CIH）。3-NT是体内蛋白质硝基化[13]程度的直观反映指标，是反映机体硝化应激新的生物指标。颈动脉体（CB）在一些人类交感神经介导的疾病的发病机制中起着至关重要的作用,用于维持体内氧平衡。有研究发现CIH可以增加颈动脉体3-NT的免疫反应，3-NT免疫水平的改变与CIH条件下CB化学感受器反应的增强有关,且暴露于CIH7-21天的大鼠体内的3-NT[14]免疫反应积累量随着时间而增加。这表明，由NO与ONOO-反应生成的过氧亚硝[14,15,16]酸盐的形成是CIH诱发的CB化学感受器反应增强的一个关键步骤。Moya等人最新的研究证实了ONOO-清除剂Ebselen的治疗阻止了CIH诱导的CB中3-NT[17]免疫反应的增加和CIH诱导的CB化学感受器反应的增强，这证明了蛋白质的硝22 山西医科大学硕士学位论文基化在增强化学感受器对急性缺氧的反应增强中起着一定的作用。因此，氧化应激通过ONOO−依赖途径可能在OSA的病理生理过程中发挥作用是合理的。在氧化应激期间，NO与O2-反应生成强氧化剂ONOO−，之前有研究报道OSA患[18]者中NO有效性的减少与微循环内皮细胞的过氧亚硝酸盐生成增加有关。此外，[19]这种氧化应激可以直接修饰eNOS（内皮型一氧化氮合酶）蛋白或其辅助因子四[20]氢生物蝶呤（BH4），最终导致酶的功能障碍。在这些条件下，eNOS从NO的产[21]物转变为O2-的过剩，这促进了血管内皮组织的氧化应激。这种功能障碍称为“eNOS解耦联”，在心血管疾病，包括高血压病、糖尿病、心脏衰竭等疾病中被描述。有研究通过培养基中亚硝酸盐的产生来测量暴露于CIH的大鼠CB中的NO产物，[14,22]发现暴露于CIH7天后NO产物的减少与eNOS表达的降低有关。由于NO被认为是CB化学感受器放电的抑制调制器，NO水平的减少可能部分促进CB放电基线[23]的升高和化学感受器对缺氧的反应。这一解释与Marcus等人的观察一致，他的结果发现，CIH降低了小鼠体内nNOS的表达能力，这表明正常的抑制NO的移除作用促进了CB对缺氧的化学感受器的反应。已证实OSA患者NO的降解副产物3-NT升高而NO水平下降，eNOSmRNA的活性和稳定性下降且eNOS的活性降低，是OSA[24,25]致内皮细胞损伤的例证。而且OSA患者经过CPAP治疗后氧化应激标志物3-NT[26]较治疗前明显下降，促进了血管内皮的修复。[27]但之前有研究发现，OSA患者血清3-NT作为硝化应激的标志物无明显升高，实验结果仍存在争议,而且3-NT本身也有细胞毒性的作用。故目前仍需要进一步研究来明确是硝化应激导致的细胞损伤和疾病的发生还是3-NT本身对细胞的毒性作用导致的病理生理改变，以及是蛋白硝基化到何种状态下才能改变蛋白质功能引起器官系统病变。3.硝化应激与高血压病值得注意的是,在大多数情况下,用各种药物或治疗措施降低血压和改善与高血压病相关的内皮功能障碍和终末器官的损伤，目的在于降低血压、减少氧化应激(如维生素E、洛沙坦,抗氧化剂、饮食等等)，这总是与血管系统、心脏和各种其[28]他器官的3-NT的减少有关。这样看来,过氧亚硝酸盐在高血压病的病理生理学中起着重要的作用，ONOO-在各种形式的心血管功能障碍和损伤中扮演着一个很重要23 山西医科大学硕士学位论文的角色，针对下游效应器通路可能提供一个有前途的治疗各种心血管疾病的策略。氧化应激条件下，NO与O2-迅速反应形成ONOO-，从而导致3-NT的生成。研究发现内皮功能障碍时NOS表达和超氧化物产生同时增加，且与3-NT生成增加密[29][18]切相关，NO有效性的减少与内皮细胞的过氧亚硝酸盐生成增加有关。这表明只有超氧化物本身增高并不足以产生内皮功能障碍。过氧化物水平的增加可以减少NO的生物利用度,从而促进维持外周血管阻力的升高。与高血压病有关的管腔内的压力和振荡剪切应力的增加可以激活氧化还原反应信号通路,提高了脉管系统的氧化应激,损害体内和体外的血管内皮功能，导致血压升高。NO的合成和NO-sGC-cGMP信号的改变或内皮细胞产生的NO生物利用度的减少导致的氧化应激增加是高血压[30]病发病机制的关键因素。许多动物实验模型和临床报告发现高血压病与超氧化物[31，32]的产生增多、NOS的调节异常、内皮功能障碍有关。然而，这个过程准确的分子机制还不清楚。高血压病患者硝化应激导致的内皮功能障碍是血压升高的原因或结果是有争议的，目前有许多人提出了令人信服的证据来支持重要的内源性过氧亚硝基形成和蛋白质的硝基化参与高血压病的发病机理这一观点。研究发现，与血压正常的对照组相比，超氧化物的形成的增加、NAD(P)H氧化酶类几个亚基的表达、eNOS和硝基酪氨酸明显增加了大鼠在主动脉缩窄上段主动脉(高血压区)和心脏的大动脉段的血压[33]。可见，硝化应激的水平间接反映了动脉血压的严重程度，为下一步的治疗提供了新的方案：减弱硝化应激的水平是否可以改善受损的血管功能和终末器官的损害，硝化应激的拮抗剂的种类、作用方式及效果的研究仍需进一步的实验来证实。4.慢性间歇低氧与高血压病在OSA期间上气道的循环阻塞导致间歇低氧和高碳酸血症、胸腔负压和微觉醒。上气道阻塞期间，导致的低氧和高碳酸血症刺激了CB化学感受器诱发了急性反射[34]性交感神经兴奋、高血压和过度换气的反应。颈动脉体化学感受器反应的加剧与人的交感神经介导性的疾病如高血压病、胰岛素抵抗、心力衰竭和OSA有关。CIH选择性增强颈动脉体在常氧和缺氧条件下化学感受器的放电，这反过来又导致了对血管的交感神经的持续放电，诱发了神经源性高血压病。作为OSA的一个主要特点，CIH增加了在常氧和低氧条件下CB化学感受器的放电基线，引起交感神经过度兴奋和血管内皮功能紊乱。CIH动物模型表明在CIH暴露早期发生血管内皮功能障碍，24 山西医科大学硕士学位论文[35]eNOS表达无明显的改变，这与内皮的过氧亚硝基阴离子沉积有关。越来越多的证据支持这个观点，OSA患者和暴露于CIH的大鼠的CB促进自主神[36]经功能障碍和高血压病。Schulz等人发现CIH条件下大鼠的动脉血压明显增高。有研究显示，NO利用度减少所致的OSA血管内皮功能障碍的关键机制是eNOS的解耦联,而BH4利用度的降低是OSA患者eNOS解耦联的关键，这项研究第一次发现，[37]eNOS解耦联是内皮O2-过剩和NO利用度降低的原因。也有研究发现ONOO-很容[38]易氧化BH4和导致eNOS解耦联，促进O2-产生过剩和NO不足的循环。Moya等人的研究也证实了CIH条件下大鼠颈动脉体的3-NT升高，增强了颈动脉体对低氧的化学感受器反应，也增加了高血压病对急性缺氧和低通气的反应，ONOO-清除剂的治疗能使常氧条件下血压基线正常，而动脉血压对急性缺氧的反应也能正常，能[17]有效的阻止CB化学感受器反应的增加和逆转CIH诱发的高血压病。通过这些研究可以发现间歇性低氧诱导的CB化学感受器反应的增强和高血压病严重依赖于过氧亚硝酸盐的形成，即硝化应激是CIH诱发的继发性高血压病的关键机制，为OSA继发性高血压病提供新的治疗方向，通过减弱硝化应激在一定程度上可以逆转OSA合并高血压病的发生。但也有研究显示，3-NT的含量在OSA和OSA[39]合并高血压病患者体内的变化无统计学差异，试验结果不一致，仍需要进行进一步的研究来证实硝化应激在OSA合并高血压病中的作用、硝化应激的信号通路以及下游信号的阻滞剂及拮抗剂。5.展望鉴于ROS在心血管疾病和OSA的发病机理中的作用,OSA诱发的氧化应激可能与心血管疾病的发病率和死亡率有关。然而,在这一领域的研究仍然需要更多的研究。特别的是，未接受CPAP治疗的患者抗氧化剂的心脏保护作用和OSA患者导致的氧化应激的基本原理应该进行更详细的探索。25 山西医科大学硕士学位论文参考文献[1]CalhounDA.Obstructivesleepapneaandhypertension.Curr.Hypertens.2010,12,189–195[2]PunjabiNM.Theepidemiologyofadultobstructivesleepapnea.ProcAmThoracSoc[J].2008,5(2):136-143[3]DragerLF,GentaPR,PedrosaRP,etal.Characteristicsandpredictorsofobstructivesleepapneainpatientswithsystemichypertension[J].AmJCardiol,2010,105(8):1135-1139[4]WorsnopCJ,NaughtonMT,BarterCE,etal.Theprevalenceofobstructivesleepapneainhypertensives[J].AmJRespirCritCareMed,1998,157(1):111-115[5]MarinJM,AgustiA,VillarI,FornerM,NietoD,CarrizoSJ,etal.Associationbetweentreatedanduntreatedobstructivesleepapneaandriskofhypertension.JAMA.2012,307,2169–2176[6]SiesH,Oxidativestress:aconceptinredoxbiologyandmedicine.RedoxBiology.2015,4,180–183[7]HalliwellB,Theroleofoxygenradicalsinhumandisease,withparticularreferencetothevascularsystem.Haemostasis.1993,23,118–126[8]Hans-JoachimEisele,PhilippMarkart,andRichardSchulz.ObstructiveSleepApnea,OxidativeStress,andCardiovascularDisease:EvidencefromHumanStudies.OxidativeMedicineandCellularLongevity.2015,2015,1-9[9]SokolovskyM,RiordanJF,ValleeBL.Tetranitromethane:areagentforthenitrationoftyrosylresiduesinproteins.Biochemistry.1966.,5,3582–3589[10]HuieRE,PadmajaS.ThereactionofNOwithsuperoxide.FreeRadic.Res.Commun.1993.,18,195–199[11]Ferrer-SuetaGandRadiR.Chemicalbiologyofperoxynitrite:kinetics,diffusion,andradical［J］.ACSChemicalBiology,2009,4(3):161-177[12]IschilropoulosH,ZhuL,ChenJ,etal.Peroxynitrite-mediatedtyrosinenitrationcatalyzedbysuperoxidedismutase[J].ArchBiochemBiophys,1992,298∶431-437[13]ChenL,ZhuYY,ZhangXJ,etal.TSPAN1proteinexpression:asignificantprognosticindicatorforpatientswithcolorectaladenocarcinoma[J].WorldJGastroenterol,2009,15(18):2270-2276[14]R.DelRio,MoyaEA,andIturriagaR,etal.Differentialexpressionofpro-inflammatorycytokines,endothelin-1andnitricoxidesynthasesintheratcarotidbodyexposedtointermittenthypoxia.BrainResearch.2011,1395:74-85[15]R.DelRio,MoyaEA,andIturriagaR,etal.Carotidbodyandcardiorespiratoryalterationinintermittenthypoxia:theoxidativelink.EuropeanRespiratoryJournal,2010,36(1):143-150[16]IturriagaR,Moya,E.A.,andDelRio,R,etal.Carotidbodypotentiationinducedbyintermittenthypoxia:implicationsforcardiorespiratorychangesinducedbysleepapnoea.ClinExpPharmacolPhysiol.2009,36,1197–1204[17]MoyaEA,PaulinaA,CarlosV,etal.Intermittenthypoxia-inducedcarotidbodychemosensorypotentiationandhypertensionArecriticallydependentonperoxynitriteformation[J].OxidativeMedicineandCellularLongevity.2016,2016:980213626 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山西医科大学硕士学位论文附录1.Epworth嗜睡量表（ESS）情况打瞌睡可能性坐着阅读书刊0123看电视0123公共场所坐着不动0123中间不休息地乘车一小时0123环境安静下，下午休息0123坐着与人交谈时0123午餐不喝酒，安静坐着时0123堵车堵数分钟时0123注：0分是没有，1分是偶尔，2分是有时候，3分是经常。2.OSA严重程度的分级程度AHI（次/分）最低血氧饱和度（SpO2）轻度5-1585-90中度16-3080-84重度>30<80注：若AHI增高和最低SpO2降低程度不平行，目前推荐以AHI为标准对OSA病情程度评判，注明低氧血症情况。29 山西医科大学硕士学位论文致谢三年的研究生生涯转瞬即逝，今天能够顺利完成科研课题，得益于各位老师、同学及朋友的支持与帮助，在此向大家表示由衷的感谢!首先要感谢的是我的导师任寿安主任，在研究生期间任老师不仅教会我呼吸内科的各项基本技能、分析疑难病例的方法，还教会我在临床工作中必备的素质及良好的心态，给予了我数不尽的悉心教导和帮助。从研究生期间实验课题的选题、设计、实施，到最后论文的撰写、修改、发表等过程任老师都全程指导督促，在遇到瓶颈时老师为我提供了很多灵感和思路。而且老师还经常组织我们同门师兄妹一起交流、阅读最新文献，锻炼我们的表达及理解能力，让我们接受新的知识，使我们视野更开阔、不再仅仅局限在课本上的知识，也让我们明白了主动学习的重要性。任老师用自己的行动深深影响了我，言传身教，在跟随老师学习的这几年，我的专业知识和技能的掌握有了很大的进步，导师严谨的工作态度、和蔼的处事风格以及渊博的学术知识也是我人生的榜样和奋斗目标，能够成为任老师的学生是我毕生的荣幸，再次致以我最崇高的敬意和感谢！还要感谢睡眠监测室的张振霞老师和在呼吸科的所有老师，在日常临床工作和值班过程中是各位老师教会了我各项临床技能及面对突发紧急情况的处理方式，令我受益颇丰，也将会对我自己日后的工作生涯产生积极的影响。感谢王洪师兄、汤玮娜、栗瑞雪、白丹和闾临霞师姐、同门梁瑞玲和郭香香同学、刘苡、帅紫薇和马瑞敏师妹、尹建升和薛宇晖师弟在我的实验、学习、工作和生活中给予我的关心和帮助，是大家让我更好的融入了这个大家庭，非常感谢你们。最后也要感谢我的家人、朋友和室友给予我的关心和照顾，是他们让我不孤独，更有动力去拼搏，同时，我也从他们身上学到了很多对我有益的东西，我们互相鼓励、共同成长为更好的彼此。在论文完成之际，我特地向我的老师、朋友以及家人致以最真挚的感谢！祝愿大家永远幸福、身体健康、事业有成。30 山西医科大学硕士学位论文个人简历一、基本情况杨亚云，女，1991年11月21日出生，汉族，团员，山西省长治人，专业：内科学（呼吸内科），主要研究方向：睡眠呼吸障碍。二、学习工作经历2010年9月—2015年7月，重庆医科大学，第二临床医学院，临床医学专业，学士。2015年9月—2018年7月，山西医科大学，第一临床医学院，内科学(呼吸内科方向)专业，专业学位硕士。三、研究成果发表论文阻塞型睡眠呼吸暂停合并高血压患者中血清3-NT及NO水平的测定，杨亚云、任寿安，中西医结合心脑血管病杂志，已录用。31