外泌体提取方法比较

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1、外泌体（Exosome）发现于1986年，是一种直径约30r00nm的双层膜囊泡状结构小体，可由机体多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、神经细胞和肿瘤细胞等主动分泌产生，广泛分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中。外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质，在体参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关⑴⑵。由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未

2、来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。外泌体的分离纯化一直是科研工作者关注的问题，获得高纯度的外泌体对后续的研究至关重要。据了解，目前人们多采用超速离心、免疫磁珠、超滤，沉淀或试剂盒等方法实现外泌体的提取分离：1、超速离心法（差速离心）超离法是最常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行（如图所示），可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎，但过程比较费时，且回收率不稳定（可能与转子类型有关），纯度也受到质疑；此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量⑶。Qjllureswoematanrnuid300xg.

3、10nunr^iprwnwnrM2OOOX5,iOrrmpelioc=

4、、超滤离心⑷由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体，大于一般蛋白质，利用不同截留相对分子质量（MWCO）的超滤膜对样品进行选择性分离，便可获得外泌体。超滤离心法简单高效，且不影响外泌体的生物活性，是提取细胞外泌体的一种新方法。4、磁珠免疫法外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白)⑻，用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以广泛普及。5、PEG-base沉淀法聚乙二醇(PEG)可与疏水性蛋白和脂质

5、分子结合共沉淀，早先应用于从血清等样本中收集病毒，现在也被用来沉淀外泌体，其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题：比如纯度和回收率低，杂蛋白较多(假阳性)，颗粒大小不均一，产生难以去除的聚合物，机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等，因此发表文章时易受质疑。6、试剂盒提取近几年来，市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒，有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分，有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化，也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。这些试剂盒不需要特殊设备，随着产品不断更新换代，提取效率和纯化效果逐渐提高，

6、因而逐渐取代超速离心法并推广开来。有些试剂盒操作简便，不用超速离心，同时可获得高纯度和高回收率的外泌体一一如lOlbi。开发的系列试剂盒,可分别针对尿液、血液、细胞上清液等多种样品进行提取⑶⑵，并可进一步从外泌体中获得想要的蛋白质或者RNA分子，方便快速，因而受到大多数人的欢迎，并发表了不少高质量的文章！然而，市场上各类产品纯化效果良莠不齐，目前仍没有绝对的方法或试剂盒能满足所有要求，从各类样品中分离到理想的外泌体。参考文献：[1]卢婉，人强，王伶.外泌体的研究进展[J].生命的化学，2013,04期(04).[2]TaixueAnetal.Exosomesserve

7、astumourmarkersforpersonalizeddiagnosticsowingtotheirimportantroleincancermetastasis[J].JournalofExtracellularVesicles2015,4：27522.-dx.doi.org/10.3402/jev.v4.27522.[3]RichardJ.Lobbetal.Optiniizedexosomeisolationprotocolforcellculturesupernatantandhumanplasma[J].JournalofExtrace