DB63∕T 863-2009 实验室冬虫夏草真菌 中国被毛孢真菌保存技术规程(青海省)

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1、TCS备案号26842-2010DB63主同tTJ而海省b方标准DB63/T863一-2009实验室冬虫夏草真菌一中国被毛抱真菌保存技术规程2009-12-07发布2010-01-10实施青海省质量技术监督局发布DB63/T863-2009目次1也围..................................................................................12术语............................................................................

2、......13菌种制备..............................................................................13.2菌种纯化方法........................................................................24菌种保存方法..........................................................................24.5冬虫夏草真菌的保存步骤..................

3、............................................26保存菌种的复壮........................................................................3DB63/T863-2009--'-目IJE司本规程由青海省畜牧兽医科学院提出并归口。本规程由青海省畜牧兽医科学院草原所负责起平。本规程起草人:李王玲、马少丽、刘欣、徐海峰、张宗豪。本规程由青海省质量技术监督局批准发布。IIDB63/T863-2009实验室冬虫夏草真菌一中国被毛子包1范围本规和规定了冬虫夏草真菌分高培养

4、后的保存技术措施。本规和适用于冬虫夏草真菌中国被毛胞分离培养后的保存。2术语2.1中国被毛于包(HirsutellasinθnsisLiu,Guo,Yu&Zeng)指冬虫夏草的无性型。2.2菌种冬虫夏草体内分离时巾国被毛抱。2.3无菌操作指采用经过一定消毒措施处理之后的环境、器具及人为操作的工作方式。2.4培养基是供做生物、植物和动物组织牛长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氧物质、兀机盐(包括微量元素)以及维牛东和水等。有的培养基还含有fJL菌素和色素。2.5菌种纯化有一种以上[的内{做敖牛刀那IS么这个曲落称为纯培养，这个过程就是菌种纯化。2.6菌

5、种衰退菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标i己的丢失等现象。2.7菌种保藏就是对活体微生物群体进行有效的保藏的生物学方法。2.8水活度(Aw)是影响丁燥菌种保藏稳定性的重要因素。3菌种制备3.1菌种纯化3.1.1纯化菌种用培养基配方3.1.1.1牛肉汤的制备DB63/T863-20093.1.1.1.1先将新鲜牛肉去除筋和脂肪，然后取1kg牛肉加茶馆水2kg放入容器内煮沸，煮沸约40分钟后将肉渣滤去，肉水经121"C、O.1MPa高原灭由30min后备用。3.1.1.1.2注意:①煮沸时应边煮边搅动:②煮沸前应在容器壁上划

6、一刻度，煮沸时随时添补蒸馆水。3.1.1.1.3固体培养基C1000ml)牛肉汤500ml、牛奶200ml、葡萄糖30g、琼脂18g、水解乳蛋白5g、酵母浸音19、磷酸氢二佣19、核糖核酸O.挝、硫酸馍O.址，力口水定容至1000mL3.1.1.2液体培养基:液体培养基自己方不加琼脂外，按照本标准3.1.1.1.3固体培养基制备方法进行制备。3.1.2培养基的制备3.1.2.1固体培养基:按照本标准3.1.1.1.3中的配方，依次加入水解乳蛋、酵母、葡萄糖、磷酸氢二号甲、硫酸镜、核糖核酸和琼脂放入容器内加热煮沸溶化后备用:量取牛奶200ml加热煮沸后取F备用:将上述溶

7、液和牛肉汤共同放入容器中加水定容主1000ml，煮沸后，用1N的盐酸或1N氢氧化铀调训PH6.7，分装于试管内(中试管每支6ml~7ml),115"C、O.075MPa灭菌30min后取出摆成斜而备用C3.1.2.2液体培养基:将上述溶液除去琼脂不加，和牛肉汤共同放入容器中煮沸后，用1N的盐酸或1N氢氧化铀调制PH6.7，分装于250ml三角瓶内(每瓶装150ml),115"C、O.075MPa灭菌30mi口后备用。3.1.3菌种纯化方法将实验室分离培养得到的冬虫夏草真菌，纤显微镜检查确认为中同被毛也后，将该菌落边缘挑取少量菌丝体，接种在纯化用固体培