沙门氏菌检验(现用)

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1、精品文档精品文档杂项瑞莺培养■al・L孔市鳏增嫉中.42121124h怆轮祥品髭计刑增第培养基（・冲果臼除水》舞51nL.在3ar±]CM16h-20hIB缸娃嫁球庙《平SL）3&七±1七培养20h-40，■如物需宴培养生4Hh短干皿取5个有沙门氏蓄构征的甫萧，桃钟在首舞喙朦上,30工士IH招养E8h24h血消等定生化签定结果能告沙门氏菌的检验1.目的规范沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。2.消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、

2、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是121C（1.5MPa）下灭菌20min3.原理沙门氏菌的检验分四个连续阶段：取ft培荫黛养，10mL«片/卡硒・壮现城R液中，在养24h«46hDHL藤脂《平皿）》61rllc婚养2011r24b.如府需要.塔界至4®h4.操作步骤4.1准备工作配制实验所需的缓冲蛋白腺水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。4.2前增菌精品文档在无菌环境下，称取25g待检样品放入盛有22

3、5ml灭菌好的缓冲蛋白腺水中，然后放到36±「C的恒温培养箱内进行前增菌4-6h;1.1增菌在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取10ml前增菌液接种与100ml亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌，恒温培养箱36±1C,培养18-24h;1.2分离培养将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm勺接种环挑取一环，划线于表面无凝结水的BS和SS琼脂平板各一个，于36±1C培养18-24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2ho然后观察培养的平板（黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫

4、化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征亚？耳更产觥肋葩融冲金用光半色It匕BS期X桶孵色的It?礴黠新变DHL尤色半溯：临曲醮中曲懿或几乎金田4EXLI.V怨色或蓝鬲诙i豁航乩中^色淞阳性的赭墉色4，B匕飙乎幸艮色1%冒退It或几乎全境色性或M性的白巾；W挺或靶冲心盹削他pX-Q-但不如以上群翱SKmauMUb担中心无黑色帛於时与表希氏甫穗区别1.3生化实验用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培养基上，恒温培养箱36±1C,培养18-24h;

5、典型沙门氏菌培养物斜面显红色（碱性），底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑）。三糖铁培养基变化表培养基部位培养基变化黄色乳糖和蔗釉阳件（利!科乳糖或BW）琼脂斜面红色或/、艾色乳糖和戡糖阴性（不利用乳糖和蕊糖）底端黄包匍葡糖阳性（发醉葡角糖）红色或/、艾色南舍甫糖阴性（不发醉甸萄桦0精品文档琼脂沐部穿剌黑色形成硫化箸气泡或裂缝ffif萄糖产气精品文档精品文档肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果可能的菌属和种斜血底层产气硫化氢沙门氏菌属r弗劳地氏柠檬酸杆藕、变形轩菌属、缓慢爱德华氏菌沙门氏菌nr弗劳地氏柠棣疲杆曲

6、、普通变形杆菌沙门氏菌属.大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚曲、摩根氏菌、普罗菲登斯苗属伤寒沙门氏藕、鸡沙门氏葡、志贺氏朗属、大肠埃希-+氏菌、蜂K哈夫尼亚菌.摩根氏菌.普罗菲登斯菌属大肠埃希氏懦1、肠杆帽属“克宙伯氏南属?沙击氏U属、架劳地氏柠檬酸杆南注：+我示阳-表示阴性；+/-表示多数阳性.少数阴性。以下表同。同时将三糖铁培养基上可疑的菌株，做生化实验，将可疑的沙门氏菌落分别接种于尿素、赖氨酸脱痰等发醉管中恒温培养箱36±1C,培养18-24h（根据上表进行判定），将可疑的沙门氏菌补做进一步的生化试验，如下表：三糖铁琼脂反应赖氨

7、酸脱竣酶培可能的菌属斜面底层产气硫化氢KA+（一）+（一）+可疑沙门氏菌属KA+（一）一（-）+可疑沙门氏菌属AA+（一）+（一）+可疑亚利桑那菌AA+（一）一㈤一非沙门氏菌属KK+/一+/一+/一非沙门氏菌属备注：K--产碱；A--产酸；+--阳性反应，一一阴性反应，（一）少见反应,+/阳性或阴性反应精品文档三糖铁琼脂和尿素的琼脂筛选三糖铁琼脂反应尿素酶琼脂可能的菌属斜面底层产气硫化氢KA+（一）+（一）一可疑沙门氏菌属AA+（一）+（一）一可疑亚利桑那菌KA+（一）+（一）非沙门氏菌属AA+（一）+（一）+非沙门氏菌属KK

8、+/一+/一+/一非沙门氏菌属备注：K--产碱；A--产酸；+--阳性反应，一一阴性反应，（一）少见反应，+/——阳性或阴性反应沙门氏菌属反应序号生化项目反沙门氏菌亚利桑那菌尿素酶试验V-P试验氧化钾试验赖氨酸脱竣酶试验口引噪试验丙一酸钠试验卫矛醇试验备注：+--阳性反应，一