动物细胞培养和核移植技术新医学ppt

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1、动物细胞融合单克隆抗体技术动物细胞核移植动物细胞培养动物细胞工程常用技术（基础）在治疗烧伤病人时，通常采用的方法是取烧伤病人健康皮肤进行自体移植。但对于一个大面积烧伤的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源不足，而且会产生免疫排斥反应。动物细胞培养技术那么，怎么才能获得大量的自体健康皮肤呢？1、概念：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2、原理：细胞增殖（有丝分裂）概念：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。胰蛋白酶/胶原蛋白酶处理取出组织块胚胎或幼龄动物器官组织剪碎

2、单个细胞细胞悬液①原代培养细胞悬液CO2培养箱增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养3.过程加培养液特点：①细胞贴壁生长，长成单层细胞；②有接触抑制现象；转入培养瓶内进行原代培养贴壁过程细胞贴壁：培养瓶或培养皿壁要求：内表面光滑、无毒、无菌、易于贴附在培养瓶悬液中分散培养的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。①原代培养特点当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。细胞的接触抑制①原代培养特点接触抑制：②传代培养（扩大培养）CO2培养箱当原代培养的细胞处于接触抑制后,用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离

3、下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程）分瓶扩大培养：以1:2或l:3以上的比率进行分装10—50代细胞无限传代分瓶胰蛋白酶原代培养接触抑制1—10代细胞传代培养单层细胞细胞核型保持正常多层细胞细胞突变核型改变①第一次危机②第二次危机部分细胞核型可能改变癌细胞（不死性，无限增殖，失去接触抑制，易转移）②传代培养特点单层细胞每分瓶扩大培养一次为一次传代；传代代数就是分瓶次数；每一代的细胞培养，从细胞贴壁到贴满瓶壁过程中，细胞分裂了很多次；思考题传代培养中,传代代/次数与细胞增殖

4、/分裂次数是否相同？1.为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖，也不利于细胞营养物质的吸收和代谢废物的排出。思考题2.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？①胰蛋白酶水解蛋白质②细胞间的成分是蛋白质③不能，因为两者的最适pH不同④胰蛋白酶长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，因此必须控制好胰蛋白酶的处理时间。4.传代培养的细胞能一直传代下去吗？5.有些为何能一直传下去？不都能。传代培养到50代左右的时候，大部

5、分的细胞都停止分裂，最终衰老死亡；但有少数细胞能够继续传代。这些发生突变，获得不死性，朝着癌细胞方向发展（成为了癌变细胞）3.如果培养的细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？用胰蛋白酶处理将贴满瓶壁的细胞分离下来，然后分瓶后继续培养（传代培养）8.动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养出新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能形成新的动物个体7.动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？可以得到细胞，也可以得到细胞产物6.人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？保存10代以内的细胞，可以保持细胞正常的二倍体核型；而10代以后的细胞核型可能发生

6、变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展4.动物细胞培养条件1.无菌、无毒的环境①对培养液和培养用具进行无菌处理；②在培养液中添加一定量的抗生素；③定期更换培养液；2.营养葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等+动物血清或血浆3.温度和pH温度36.5±0.5度，pH7.2～7.44.气体环境95%空气和5%CO2（CO2培养箱提供）合成培养基不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶O2是细胞代谢所必需的；CO2维持培养液的pH获得细胞细胞的全能性细胞或细胞产品新的个体或细胞产品培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的蔗糖、植物激素培养基特有

7、成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较葡萄糖等、动物血清5.动物细胞培养技术的应用:1.生产生物制品如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.应用于基因工程主要用于作为受体细胞3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性4.细胞的生理、药理、病理研究如用于筛选抗癌药物1.用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（　）A.容易产生各种变异B.具有更强的全能性C.取材十分方便D.分裂增殖的能力强【随堂练习】D2.动物细胞培养的特点（）①细

8、胞贴壁②有丝分裂③细胞分化④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养一般传代1~~10代A、①②④⑥B、②③④⑤C、①③④⑥D、③④⑤