DB22T 1997-2014 饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定 液相色谱-串联质谱法

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1、ICS65.120B46备案号：41843-2014DB22吉本标准仅供内部使用不得翻印林省地方标准DB22/T1997—2014饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定液相色谱-串联质谱法本标准仅供内部使用不得翻印Determinationofenrofloxacin，ciprofloxacin，norfloxacininfeeds——LC-MS/MSmethod2014-02-28发布2014-04-30实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1997-2014本标准仅供内部使用不得翻印前言本

2、标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、吉林大学。本标准主要起草人：李媛媛、刘斌、李滢倩、关树文、刘智、任明月、王颖。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1997-2014饲料中本标准仅供内部使用不得翻印恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的液相色谱-串联质谱测定。本标准适用于饲料中恩诺沙星、环丙沙星、

3、诺氟沙星的含量测定。本标准方法检出限为10μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备本标准仅供内部使用不得翻印3原理用乙腈和磷酸盐缓冲溶液提取试样中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星，固相萃取小柱净化，5%氨水甲醇溶液洗脱，供液相色谱-串联质谱检测，外标法定量。4试剂与材料所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；除另有说明外，水为GB/T

4、6682规定的一级水。4.1甲醇，色谱纯。4.2乙腈，色谱纯。4.3磷酸。4.4甲酸，色谱纯。4.5磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）。4.6磷酸二氢钾（KH2PO4）。4.7氨水。4.8磷酸盐缓冲溶液：称取5.68g磷酸氢二钠(4.5)和1.36g磷酸二氢钾(4.6)置于1000mL烧杯中，加入800mL水溶解，用磷酸（4.3）调至pH=3.0，再用水定容至1000mL。4.9氨水甲醇溶液(5%)：取5mL氨水(4.7)与95mL甲醇(4.1)混合。1DB22/T1997-20144.10甲酸水溶液(pH=3.0)：量取500mL水，用甲酸

5、（4.4）调pH值到3.0。4.11甲醇本标准仅供内部使用不得翻印水溶液(25%)：取250mL甲醇(4.1)，加水稀释到1000mL。4.12甲醇-甲酸溶液(15+85)：量取30mL甲醇(4.1)与170mL甲酸溶液(4.9)混合。4.13恩诺沙星(CAS：93106-60-6)、环丙沙星(CAS：93107-08-5)、诺氟沙星(CAS：70458-96-7)标准物质，纯度大于等于95%。4.14标准贮备液(1.0mg/mL)：称取0.1g（精确至0.1mg）标准物质(4.13)，至100mL容量瓶，甲醇(4.1)定容。2℃～4℃冷藏保存，可

6、保存6个月。4.15混合标准工作液(1μg/mL)：用甲醇水溶液(4.11)分别配成浓度范围为1ng/mL～60ng/mL标准工作溶液，现配。4.16OasisHLB固相萃取小柱或相当者：60mg，3mL。4.17滤膜：0.22μm。4.18氮气。5仪器5.1液本标准仅供内部使用不得翻印相色谱-质谱联用仪：配有电喷雾电离源。5.2涡旋振荡器。5.3固相萃取装置。5.4分析天平：感量0.1mg。5.5粉碎机。5.6旋转蒸发仪。5.7氮气吹干仪。5.8离心机。6试样制备选取代表性饲料样品至少500g，按照GB/T20195制备试样。7分析步骤7.1提取

7、称取试样0.5g(精确至0.1mg)于50mL具塞离心管中，准确加入6mL磷酸盐缓冲溶液(4.8)，涡旋混匀，再加入10mL乙腈(4.2)，于涡旋振荡器振荡提取1min，5000r/min离心5min，上清液过滤到鸡心瓶中，在残渣中加入5mL磷酸盐缓冲溶液(4.8)，10mL乙腈(4.2)，重复以上步骤，合并上清液，于50℃旋转蒸发，至乙腈全部蒸出。加入5mL磷酸盐缓冲溶液(4.8)，混匀。2DB22/T1997-20147.2净化本标准仅供内部使用不得翻印固相萃取小柱先用5mL甲醇、5mL水和5mL磷酸盐缓冲溶液(4.8)活化，保持柱体湿润。将7

8、.1的样液以1mL/min的流速全部过HLB固相萃取小柱，待液体完全流出后，先后以4mL水，4mL甲醇水溶液(4.11)淋